王新颖
- 作品数：9 被引量：28H指数：3
- 供职机构：遵义医学院珠海校区生物工程系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技厅社会发展攻关项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人蔗糖酶卵黄抗体三种不同提取方法的比较
- 2016年
- 目的应用三种不同方法分离提取特异性抗人蔗糖酶卵黄抗体,比较总蛋白浓度、蛋白纯度及生物活性。方法以人蔗糖酶蛋白作为抗原免疫蛋鸡,分别采用硫酸钠水提取法、聚乙二醇法和冷乙醇法分离提取卵黄抗体,BCA法测定总蛋白质含量;聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测抗体纯度;间接酶联免疫吸附测定法检测抗体效价。结果经典的硫酸钠水提取法相对其他两种方法提取的卵黄抗体在总蛋白含量和纯度都较高,杂带相应较少,聚乙二醇法提取的抗体效价较低,硫酸钠水提取法和冷乙醇法提取的抗体效价基本没有区别。结论三种提取方法中,硫酸钠水提取法操作简单、纯度较高、对蛋白影响较小,为后续有效分离提取卵黄抗体打下实验基础。
- 邵敏王新颖杜凤霞冯昆田忠周鹤峰
- 关键词：蔗糖酶卵黄抗体生物活性
- 人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化被引量：3
- 2015年
- 目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实h SUC基因片段成功插入到p ET-28a(+)表达载体。表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Western blot结果显示融合蛋白可以与h SUC抗体特异性结合。结论成功在大肠杆菌中表达和纯化h SUC融合蛋白。
- 邵敏王新颖张青峰牛宪立王燕周鹤峰葛正龙
- 关键词：蔗糖酶Α-葡萄糖苷酶大肠杆菌蛋白纯化
- hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定被引量：2
- 2016年
- 目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)-hISO。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白。结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达。
- 邵敏王新颖刘星王燕周鹤峰葛正龙
- 关键词：原核表达Α-葡萄糖苷酶大肠杆菌
- 抗人异麦芽糖酶卵黄抗体和蔗糖酶卵黄抗体的制备及其活性探讨
- 目的：制备抗人异麦芽糖酶卵黄抗体(I-IgY)和抗人蔗糖酶卵黄抗体(S-IgY)，探讨其对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠血糖的影响。 方法：(1)抗人I-IgY和S-IgY的制备及鉴定：人异麦芽糖酶（ISO）和人蔗糖酶（S...
- 王新颖
- 关键词：卵黄抗体Α-葡萄糖苷酶蔗糖酶血糖水平动物实验
- 西红花苷Ⅰ对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞氧化损伤的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨西红花苷Ⅰ对大鼠腹腔巨噬细胞氧化应激损伤及功能的调节作用。方法采用原代培养方法培养大鼠腹腔巨噬细胞,用脂多糖(LPS)诱导建立巨噬细胞氧化损伤模型,实验分正常对照组、LPS组以及LPS+不同浓度西红花苷Ⅰ干预组,各干预组加入浓度分别为50、100、200、500μg/m L的西红花苷Ⅰ培养1 h后,向LPS组和各干预组加入LPS,使其终浓度为20μg/m L培养24 h,测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平以及巨噬细胞吞噬功能的变化。结果成功用LPS诱导建立了巨噬细胞氧化应激损伤模型;与LPS组相比,西红花苷Ⅰ干预组在一定浓度范围(50、100μg/m L)内能显著降低巨噬细胞的损伤率、减少LPS损伤细胞培养上清中LDH的释放、提高LPS损伤细胞中SOD的活性、增强巨噬细胞的吞噬能力。结论西红花苷Ⅰ对LPS引起的大鼠腹腔巨噬细胞的氧化应激损伤及其吞噬功能有一定的保护作用。
- 田忠夏嫱王新颖陈阳郭锦锦杜联峰
- 关键词：巨噬细胞氧化应激
- 抗人异麦芽糖酶卵黄抗体的研制及活性测定被引量：1
- 2018年
- 目的抗体药物是目前生物医药的研究热点问题之一。文章旨在研制抗人异麦芽糖酶(hISO)卵黄抗体(IIgY)并检测其生物学活性。方法将hISO重组蛋白作为抗原与弗式佐剂充分乳化后免疫蛋鸡,水稀释-硫酸钠提取法提取抗人I-IgY,分别通过SDS-PAGE、Western blot和ELISA等实验技术分析该抗体的纯度、特异性、效价和稳定性,PNPG法测定该抗体对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果。结果获得了抗人I-IgY,其效价最高可以达1∶12 800,该抗体可特异性结合hISO重组蛋白,且具有较好的热稳定性、酸碱稳定性及胃蛋白酶抗性。结论成功制备了抗人I-IgY,为后续对2型糖尿病口服降糖药物的研制奠定实验基础。
- 王新颖王丹冯昆葛正龙周鹤峰邵敏
- 关键词：卵黄抗体效价稳定性特异性
- P13K/Akt信号通路及其在鼻咽癌发生发展中的研究进展被引量：11
- 2016年
- 鼻咽癌是头颈部发病率较高且最为常见的恶性肿瘤,具有很大的地域分布特点[1],东南亚国家发病率较高,在我国以华南地区居多[2]。研究[3]表明,男性发病率明显高于女性。鼻咽癌的原发灶较为隐蔽,早期发病不明显,导致大多数确诊的鼻咽癌患者均已到中晚期。
- 田忠夏嫱王新颖
- 关键词：信号通路侵袭转移能力CADHERIN磷脂酰肌醇恶性增殖联合放化疗
- 抗人蔗糖酶卵黄抗体的制备及其稳定性和体外活性研究被引量：4
- 2016年
- 目的：制备抗人蔗糖酶（Sucrase,SUC）卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin Y,Ig Y）并对其稳定性、体外活性进行研究。方法：采用人SUC蛋白为抗原,免疫海兰灰蛋鸡,水稀释和盐析法提取纯化Ig Y;间接ELISA法监测抗体效价变化并评价其稳定性;SDS-PAGE和Western blot分析Ig Y的纯度和特异性;PNPG法测Ig Y对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果。结果：初次免疫10 d后检测到Ig Y,40 d后效价最高达到1∶12 800;提取的Ig Y重链和轻链分别在65 k D和25 k D处,且能够与抗原蛋白特异性结合;29~69℃范围内水浴15 min和p H 4~7之间37℃水浴4 h,抗体效价无变化;胰蛋白酶与胃蛋白酶作用Ig Y2 h,抗体效价降至一半,延长作用时间,Ig Y对胃蛋白酶耐受力较胰蛋白酶耐受力更强;Ig Y对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用,呈现剂量相关性,半抑制浓度（IC50）值为0.540 mg/ml。结论：抗人蔗糖酶卵黄抗体（S-Ig Y）的成功制备为后续用于2型糖尿病大鼠模型体内实验研究奠定基础。
- 邵敏王新颖卢毓璁王敏冯昆魏妮娜杜凤霞周鹤峰
- 关键词：蔗糖酶卵黄抗体稳定性
- 卵黄抗体在国内外医药方面的研究现状被引量：5
- 2015年
- 本文阐述卵黄抗体的优势性质和结构特点,概述卵黄抗体在抗人兽共患病、诊断应用、抗蛇毒类生物制品和抗生育制品等方面的研制与应用。
- 王新颖周鹤峰邵敏
- 关键词：卵黄抗体人畜共患病生物制品
