周迪
- 作品数：32 被引量：100H指数：6
- 供职机构：贵州大学更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅重大专项国家科技支撑计划贵州省科技厅农业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学金属学及工艺更多>>
- 关岭牛PPARγ基因原核表达载体的构建及生物信息学分析
- 2018年
- 本研究旨在通过克隆关岭牛PPARγ基因CDS区及构建p ET32a（＋）-PPARγ真核表达载体。本研究通过RT-PCR技术克隆关岭牛PPARγ基因的CDS区,采用DNAStar和Ex PASy等软件对该基因CDS区进行序列分析;利用双酶切的方法构建原核表达载体p ET32a（＋）-PPARγ,结果显示,关岭牛PPARγ基因的CDS区全长1 428 bp,编码475个氨基酸。本研究成功克隆了关岭牛PPARγ基因的CDS区,并构建了其原核表达载体p ET32a（＋）-PPARγ,为进一步研究PPARγ基因调控机制提供了理论基础。
- 吴国文陈伟陈伟张青青许厚强周迪赵焕平
- 关键词：PPARΓ基因原核表达载体
- 从江香猪PHKG2基因超表达载体和RNA干扰载体的构建及其表达被引量：1
- 2018年
- 旨在克隆从江香猪磷酸化酶激酶γ2(phosphorylase kinase gamma 2,PHKG2)基因编码区,并对PHKG2基因功能进行初步探究。本研究利用RT-PCR法扩增从江香猪PHKG2基因完整CDS区。通过构建pEGFP-N3-PHKG2超表达载体,设计并合成4对针对从江香猪PHKG2基因的RNAi表达载体,瞬时转染至C2C12细胞株和从江香猪肾细胞中,以正常生长的细胞为空白对照,24h后检测各个重组载体的绿色荧光蛋白的表达情况。48h后提取细胞总RNA,利用qRT-PCR方法检测目的基因PHKG2和糖原代谢相关基因糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,muscle form,PYGM)、肌肉糖原合成酶(glycogen synthase 1(muscle),GYS1)、磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglyce rate mutase,PGAM2)基因mRNA的表达情况,并且测定各组细胞中的糖原含量。结果表明,经过双酶切、测序检测以及脂质体瞬时转染至C2C12细胞中,验证超表达载体pEGFP-N3-PHKG2和4对RNAi表达载体均构建成功。转染至从江香猪肾细胞后,相对于空白对照(Blank)和阴性对照(pEGFP-N3),超表达载体pEGFP-N3-PHKG2能极显著提高PHKG2基因的表达量(P<0.01),同时显著上调PGAM2、PYGM基因的表达量(P<0.05),并且显著降低细胞中糖原的含量(P<0.05)。各RNAi载体中,相对于空白对照(Blank)和阴性对照(NC),shRNA-1的干扰效率较高,极显著下调PHKG2基因的表达量(P<0.01),显著下调PGAM2、PYGM、GYS1基因的表达量(P<0.05),并且显著升高细胞中糖原含量(P<0.05)。shRNA-2极显著下调PHKG2基因的表达量(P<0.01);shRNA-3对PHKG2基因的表达也能起到显著的干扰作用(P<0.05);shRNA-4对于所检测的4个基因干扰效果不明显;shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4转染细胞后,细胞中糖原含量升高水平不明显。PHKG2基因超表达和RNAi后可分别明显上调和抑制PHKG2、PYGM、PGAM2、GYS1基因的表达,并且分别降低和提高糖原含量,可能是影响从江香猪猪肉品质的重要候选基因,为进一步研究PHKG2基因在细胞糖原代谢通路�
- 王圆圆许厚强许厚强陈伟陈伟周迪
- 关键词：从江香猪超表达RNA干扰
- 关岭牛MyoD基因CDS区的克隆、序列分析及其真核表达载体构建
- 2015年
- [目的]通过关岭牛MyoD基因CDS区的克隆、序列分析及pcDNA3.1(+)-MyoD真核表达载体的构建,为后续研究MyoD基因的调控机制奠定基础。[方法]通过设计特异性引物克隆关岭牛MyoD基因的CDS区,并用DNAStar、Ex PASy等软件对该基因CDS区进行序列分析;同时利用双酶切的方法构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-MyoD。[结果]关岭牛MyoD基因的CDS区全长957bp,编码318个氨基酸;其编码的蛋白属于亲水性蛋白,蛋白二级结构主要以α-螺旋及无规则卷曲为主,含有b HLH结构域,无明显的跨膜区域。同源性分析显示,关岭牛MyoD基因的CDS区序列与海福特牛和山羊的同源性最高,核苷酸同源性为98.96%和96.9%,氨基酸同源性为100%和89.3%。MyoD蛋白的氨基酸肽链长度由低等动物到高等动物有逐渐加长的趋势。[结论]成功克隆了关岭牛MyoD基因的CDS区,并构建了其真核表达载体pcDNA3.1(+)-MyoD,为进一步研究MyoD基因在成肌分化过程中的作用及其调控机制奠定基础。
- 张雯张雯许厚强陈伟陈祥桓聪聪夏丹
- 关键词：真核表达载体
- 小鼠胚胎显微操作针的制作方法被引量：3
- 2015年
- 显微操作针是显微操作的必备工具,其制作的好坏直接影响到操作的成败。介绍了利用拉针仪、断针仪、磨针仪制备用于小鼠胚胎移植显微操作的移卵针(moving pipettes)、注射针(injection pipettes)和持卵针(holding pipettes)的制作方法,以供实验参考。
- 倪萌萌许厚强赵佳福陈伟桓聪聪周迪
- 关键词：显微操作注射针制作方法
- 含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法
- 本发明公开了一种含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法，本发明采用4对5'端加磷的引物扩增不同长度的MyoDI基因启动子片段，与用高保真DNA聚合酶扩增出的不含启动子区的pEGFP-N3载体片段进行平末端连接，构...
- 许厚强桓聪聪陈伟赵佳福张雯周迪
- 文献传递
- 花青素增强反刍动物抗氧化性能作用机制的研究被引量：10
- 2019年
- 花青素是植物中富含的一类水溶性天然色素,因其具有较高的安全性及极强的清除自由基的能力而备受学者青睐。本文主要综述花青素的结构和安全性,其在反刍动物中可能的消化代谢途径及增强机体抗氧化能力与缓解氧化应激的作用机制,探讨其作为反刍动物新型饲料添加剂的可行性。旨在为相关研究提供理论参考。
- 周迪王胤晨田兴舟田兴舟陈佳琪莘海亮班超Paengkoum Pramote吴文旋吴文旋陈胜昌
- 关键词：花青素代谢途径抗氧化氧化应激反刍动物
- 牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究被引量：2
- 2019年
- 旨在解析牛MSTN启动子与MEF2C之间的相互调控作用,进一步探讨MSTN基因在肉牛肌肉生长发育方面的调控机制。首先,通过PCR扩增关岭牛MSTN启动子序列2 267 bp和MEF2C基因CDS区1 425 bp。其次,构建pGL3-Basic-MSTN和pcDNA3.1(+)-MEF2C双荧光素酶报告载体,采用脂质体法共转染至小鼠C2C12成肌细胞,24 h后检测其双荧光素酶活性。最后,通过PCR扩增MSTN启动子核心片段MSTN-P1,重新构建以MSTN-P1片段替代(CMV)区的重组表达载体pEGFP-N3-MSTN-P1-MEF2C,将其分别转染至小鼠C2C12成肌细胞和大鼠下颌腺上皮细胞,24 h后观察绿色荧光蛋白发光情况,48 h后提取细胞总RNA,利用qRT-PCR检测MEF2C基因在不同细胞中的表达情况。结果显示,在小鼠C2C12成肌细胞中,共转染pcDNA3.1(+)-MEF2C试验组较pGL3-Basic-MSTN试验组能显著增强MSTN启动子的活性(P<0.05),较pGL3-Basic对照组能极显著增强MSTN启动子的活性(P<0.01);MSTN启动子核心片段MSTN-P1能驱动MEF2C基因在小鼠C2C12成肌细胞中的表达量极显著上调(P<0.01),且能驱动MEF2C基因在大鼠下颌腺上皮细胞中的表达量显著上调(P<0.05)。结果表明,在转录水平,MSTN启动子与MEF2C可能同时参与了牛肌肉生长和分化的调控。
- 杨涛许厚强许厚强陈伟陈伟周迪
- 关岭牛MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响被引量：5
- 2016年
- 【目的】生肌决定因子(myogenic determination gene,MyoD)家族是肌肉生成过程中参与分子调控作用的一个重要家族。该家族包括MyoD1,Myf5,Myo G和Myf6,只表达在成熟的骨骼肌细胞和其前期细胞中;在其他的非肌细胞中,MyoD基因家族会被抑制。该家族中,MyoD1负责早期胚胎成肌祖细胞的激活并参与胚后骨骼肌的生长、发育和修复等的调节,以维持个体骨骼肌的相对稳定,是启动和维持骨骼肌细胞分化和生长的重要因素,具有尤为重要的作用,已成为研究热点。目前MyoD1在多态性和关联性分析等方面的研究较多,表达调控方面主要是研究小鼠、鸡和猪肌细胞生成机理;在牛上对它的研究主要在转录后和翻译水平的表达,但对MyoD1在转录调控方面的作用机制还不明确。文章研究关岭牛MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响,为探讨牛MyoD1的表达调控机制奠定基础。【方法】通过设计特异性引物克隆关岭牛MyoD基因家族CDS区和MyoD1启动子片段P1和P2;同时利用双酶切的方法分别将CDS区和克隆的启动子序列连入pcDNA3.1(+)和p GL3-Basic基本骨架,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G和含萤火虫荧光素酶报告基因的报告载体p GL3-P1、p GL3-P2。重组质粒经酶切和测序鉴定后,利用共转染的方法将真核表达载体和报告载体转染小鼠C2C12细胞,30 h后裂解细胞并检测细胞裂解液的双荧光素酶活性。最后根据荧光素酶的相对活性来分析MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响。【结果】克隆得到的关岭牛MyoD基因家族CDS区和MyoD1启动子序列测序正确,载体pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G、p GL3-P1和p GL3-P2经酶切和测序鉴定,证实载体构建成功;与相应剂量的对照组相比,转染pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD后,p GL3-P1的相对荧光素酶活性明显增�
- 张雯许厚强陈伟陈祥赵佳福桓聪聪夏丹周迪
- 关键词：转录因子启动子报告基因
- 日粮能量对贵州从江香猪生长性能和血液生化指标的影响被引量：3
- 2017年
- 为了研究日粮能量水平对贵州从江香猪生长性能和血液生化指标的影响,试验在满足蛋白质、氨基酸等营养水平的前提下,选取10头年龄、体重接近的从江香猪,随机分为高能量(14.35 MJ/kg)组和低能量(12.26 MJ/kg)组,测定生长性能和血液生化指标。结果表明:日粮能量对从江香猪生长性能的影响不显著(P﹥0.05);但对血液生化指标有较大影响,低能量组从江香猪血液中的丙氨酸氨基转移酶活性及尿素、钠含量均显著低于高能量组(P<0.05);低能量组天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB型同工酶、α-羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶活性及尿酸、钙、镁、磷含量均极显著低于高能量组(P<0.01);低能量组白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B含量等指标均极显著高于高能量组(P<0.01)。说明在满足其他营养条件下,降低日粮能量水平不会降低断奶仔猪蛋白质合成和代谢,还可能提高断奶仔猪的免疫性能,对脂肪代谢也有一定影响。
- 肖伟喻昌毅许厚强孙成娟周迪陈伟
- 关键词：从江香猪日粮生化指标
- 关岭牛MyoD基因原核表达载体的构建及生物信息学分析被引量：1
- 2015年
- 本实验采用RT-PCR方法克隆关岭牛MyoD基因的CDS区,利用Eco RⅠ、XhoⅠ酶对目的片段与pET32a(+)原核表达载体进行酶切,T4连接酶连接过夜,通过转化,测序,构建重组表达载体,并对该基因进行相关生物信息学分析。实验结果获得了关岭牛Myo D基因CDS区,成功构建了p ET-32a(+)-MyoD重组表达载体。MyoD基因编码区为954 bp,编码318个氨基酸,共有31个稀有密码子,表达蛋白大小为34.2 kD。该蛋白为水溶性蛋白,等电点p I=5.8,在体内带负电,二级结构中α-螺旋、无规则卷曲较多。蛋白没有信号肽和明显的跨膜区,为胞内蛋白,主要存在于细胞核中。重组载体表达的Myo D蛋白带有His等标签,蛋白大小为53.6 kD,共497个氨基酸。实验对关岭牛Myo D蛋白的理化性质、结构特点进行了初步分析,以期为研究牛MyoD蛋白特性及其作用机制奠定理论基础。
- 夏丹许厚强陈伟陈祥周迪张雯桓聪聪赵焕平张青青孙成娟
- 关键词：原核表达载体生物信息学
