高兴春
- 作品数：15 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科技资源平台项目上海市科技兴农重点攻关项目更多>>
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- 一种利用毕赤酵母生产皮蝇素C的方法
- 本发明公开一种利用毕赤酵母生产皮蝇素C的方法，包括如下步骤：首先用PCR扩增HC基因，酶切重组载体和片段HC，用连接酶连接后形成含有HC的重组质粒，将重组产物转入大肠杆菌，然后将含有HC的重组质粒酶切，线性化后通过电击转...
- 何国声高兴春徐梅倩郭敏曹杰朱顺海赵其平黄燕庞程李家诚
- 文献传递
- 皮蝇素C蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化被引量：2
- 2007年
- 利用PCR技术从重组质粒pGEM-T/HC中扩增HCcDNA片段,克隆到pPIC9k毕赤酵母表达载体中,获得重组质粒pPIC9k-HC,重组质粒线性化后电激转化入毕赤酵母GS115菌株中,重组子经G418筛选、PCR鉴定得到含外源基因的重组子,然后在含0.5%甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白,经SDS-PAGE检测发现表达蛋白质的相对分子量约为28kD,表达量约为121mg/L,表达上清经超滤浓缩和阴离子交换层析初步纯化,所得纯化产物经Western-blot表明具有与兔抗HC血清特异性结合的能力;明胶电泳检测显示具有水解酶活性,为今后进行大规模的牛皮蝇蛆病的调查提供了一种生产大量廉价抗原的方法。
- 高兴春徐梅倩何国声
- 关键词：HC毕赤酵母表达纯化
- 一种生产大片吸虫组织蛋白酶L1的方法
- 本发明公开了一种生产大片吸虫组织蛋白酶L1的方法，包括一个用PCR从大片吸虫成虫cDNA文库中扩增出大片吸虫组织蛋白酶L1基因的过程，一个构建含有组织蛋白酶L1全长基因的重组质粒的过程，一个将重组质粒转化入大肠杆菌中进行...
- 何国声郭敏徐梅倩高兴春曹杰朱顺海黄燕赵其平李家诚庞程米荣升
- 文献传递
- 在藏羚羊上发现的中国第四种皮蝇被引量：9
- 2008年
- 对于从可可西里藏羚羊上采集到的藏羚羊皮蝇Hypoderma sp.3龄幼虫进行了形态学观察,发现其在伪头、第10腹节上的刺、气门板形态上与中国现有记录的3种皮蝇(牛皮蝇、纹皮蝇和中华皮蝇)有着明显的区别。对藏羚羊皮蝇的线粒体COI基因种属特异性序列研究表明,其与牛皮蝇、纹皮蝇和中华皮蝇对应序列的相似性分别为88.1%,87.8%和88.8%。据此认为采自藏羚羊的此种皮蝇可能为中国境内又一皮蝇新种或新记录种,为中国第四种皮蝇。
- 庞程蔡进忠高兴春李春花曹杰徐梅倩刘生财黄燕朱顺海Chantal BOULARD何国声
- 关键词：藏羚羊皮蝇牛皮蝇纹皮蝇形态学
- 动物牛皮蝇蛆病诊断方法的进展(综述)被引量：4
- 2006年
- 综述了牛皮蝇蛆病临床诊断的方法以及一些免疫学诊断方法：免疫电泳、双向免疫扩散试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验。并重点介绍了国内外在酶联免疫吸附试验的进展,介绍了采样的方法、对血清和牛奶的检测以及检测循环抗原HC的夹心ELISA,并对该病未来诊断方法的发展做了展望。
- 高兴春徐梅倩何国声
- 关键词：牛皮蝇蛆病免疫电泳间接血凝试验酶联免疫吸附试验HC
- 大片吸虫组织蛋白酶L1在大肠杆菌中的表达及纯化被引量：1
- 2008年
- 利用PCR方法从pET28/FgCL1重组质粒中扩增FgCL1基因,定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组质粒pGEX/FgCL1,将该重组质粒转化大肠杆菌BL21中,转化子经IPTG诱导表达。重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为61 000。Western-blot、ELISA试验结果显示,纯化后的重组蛋白能被自然感染大片吸虫的牛血清所识别,表达产物具有良好的抗原性。
- 郭敏何国声徐梅倩高兴春岳城
- 关键词：大片吸虫原核表达
- 毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白被引量：5
- 2006年
- 建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A（Hypodermotin A，HA）的技术，并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上，构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后，用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0．5％甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白，培养3d后收取上清，用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测，所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明，该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示，该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明，甲醇浓度在0．5％～1％、溶氧量在70％以上、诱导2～3d的情况下表达产量最高，达1500mg／L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。
- 孙怡徐梅倩高兴春何国声
- 关键词：毕赤酵母GS115
- 藏羚羊中华皮蝇蛆的分子生物学鉴定被引量：3
- 2008年
- 利用分子生物学技术对藏羚羊感染的中华皮蝇的线粒体COI基因种属特异性序列进行了研究。利用PCR方法扩增出长度为688 bp的序列,经TA克隆后测序,测序结果表明与中华皮蝇、牛皮蝇和纹皮蝇的相似性分别为99.1%、91.4%、93.6%,确定为中华皮蝇,证实藏羚羊中存在中华皮蝇的侵染,从而扩大了中华皮蝇的宿主范围。
- 高兴春蔡进忠徐梅倩于明胜曹杰李春花郭敏王玉梅朱顺海黄燕何国声
- 关键词：藏羚羊
- 用毕赤酵母表达皮蝇素C蛋白的研究
- 牛皮蝇蛆病(Hypodermosis)是由双翅目皮蝇科皮蝇属的皮蝇幼虫引起的一种寄生虫病,通过在家畜体内移行和背部穿孔带来危害。皮蝇素C(Hypodermin C,HC)一种后生动物起源的昆虫胶原酶,分子量是 25．22...
- 高兴春郭敏徐梅倩何国声
- 关键词：毕赤酵母
- 文献传递
- 利用醋酸锂和DTT对毕赤酵母进行电击前处理提高外源基因转化效率
- 巴斯德毕赤酵母是近年来成功的外源基因表达系统之一,已经表达出众多外源蛋白．它既能像原核生物一样快速生长、高密度发酵,又能进行真核翻译后修饰,并且蛋白分泌表达量大,因此应用越来越广泛:高效转化外源基因是利用毕赤酵母表达的第...
- 黄燕徐梅倩高兴春何国声朱顺海曹杰
- 关键词：巴斯德毕赤酵母
- 文献传递
