陶慧娴 作品数:9 被引量:54 H指数:4 供职机构: 张家港市第一人民医院 更多>> 发文基金: 江苏省自然科学基金 国家自然科学基金 南京市科技发展计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
miRNA-20a在脂多糖诱导A549细胞焦亡和炎症反应中的作用与机制研究 2023年 目的探讨miRNA-20a在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的A549细胞焦亡与炎症反应中的作用与调控机制。方法培养人肺泡上皮A549细胞,以LPS为刺激物建立细胞焦亡及炎症反应模型,给予LPS+三磷酸腺苷刺激为LPS组,未给予刺激为空白对照组,验证模型是否成功。将A549细胞根据转染物质分为miRNA-20a模拟物(mimics)组、mimics-阴性对照(negative control,NC)组、miRNA-20a抑制物(inhibitor)组和inhibitor-NC组,构建过表达及沉默miRNA-20a的A549细胞模型,各组细胞在转染24 h后给予LPS+三磷酸腺苷刺激。构建TLR4-3'UTR双荧光素酶报告基因载体质粒,包括野生型(WT)载体质粒TLR4-3'UTR-WT1、TLR4-3'UTR-WT2及相应的变异型(MUT)载体质粒TLR4-3'UTR-MUT1、TLR4-3'UTR-MUT2,用双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-20a的靶基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫印迹试验及酶联免疫吸附试验检测各组焦亡标志因子消皮素D(gsdermin D,GSDMD),炎症因子凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β),以及信号分子Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)mRNA及蛋白表达。免疫荧光检测各组细胞TLR4表达和NF-κB入核情况。结果LPS组A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA和蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05),模型建立成功。mimics组miRNA-20a表达量高于mimic-NC组(P<0.05),inhibitor组miRNA-20a表达量低于inhibitor-NC组(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验显示,TLR4-3'UTR-WT与miRNA-20a mimics共转染组的相对荧光值低于TLR4-3'UTR-WT与mimics-NC共转染组(P<0.05)。mimics组LPS介导的A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB 陶慧娴 王木子 郭艳 邹芸苏 卢志涛 丁溢芳 周晓光 许卫东关键词:脂多糖 川崎病患儿血浆N端脑钠肽前体表达水平及临床意义 被引量:2 2014年 目的:探讨血浆N端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP)表达水平在川崎病(Kawasaki disease, KD)中的临床意义。方法采用电化学发光免疫学方法测定16例KD患儿应用丙种球蛋白前后及20例呼吸道感染性疾病患儿(对照组)的血浆NT-proBNP水平。结果急性期KD儿童血浆NT-proBNP水平明显高于对照组(t=3.829,P<0.01)。KD治疗前后比较,KD急性期血浆NT-proBNP水平较恢复期升高,差异有统计学意义(t=12.64,P<0.01)。KD有冠脉损害组与无冠脉损害组比较,KD急性期冠脉损害组患儿血浆NT-proBNP明显升高,差异有统计学意义(t=8.361,P<0.01)。结论KD急性期血浆NT-proBNP升高,而在疾病恢复期明显降低,有助于急性期KD的早期诊断,以及NT-proBNP水平升高是KD儿童发生冠脉损害的预测指标之一,值得临床推广应用。 高锦萍 胡丹 陶慧娴关键词:川崎病 儿童 N端脑利钠肽前体 降钙素原、超敏C反应蛋白联合白介素6动态检测在新生儿感染早期诊断中的价值 被引量:13 2018年 目的探讨降钙素原、超敏C反应蛋白联合白介素6动态检测在新生儿感染早期诊断中的价值。方法方便选取该院2015年2月—2017年2月期间新生儿科收治的125例感染性疾病新生儿为观察组,其中75例为细菌感染组,50例为病毒感染组,细菌感染组中重症感染35例,轻症感染40例,并以同期该院收治的50例非感染性疾病新生儿为对照组研究对象。所有新生儿均检测血清降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及白介素6(IL-6)。观察各组新生儿指标检测结果,并以工作特征(ROC)曲线分析3种指标的疾病诊断特异性。结果细菌感染组患儿PCT、hs-CRP、IL-6各指标均显著高于病毒感染组和对照组新生儿,差异有统计学意义(P<0.05)。重症感染组PCT、hs-CRP、IL-6水平明显高于轻症感染组,轻症感染组的3项指标明显高于对照组(P<0.05)。PCT、hs-CRP、IL-6 3项指标的ROC曲线下面积分别为85.33、70.12、82.24,灵敏度为74.67%、70.67%、80.00%,特异性为90.67%、66.67%、68.00%。结论PCT、hs-CRP、IL-6均能作为判定新生儿早期感染的指标之一,但白介素6的灵敏度更高,降钙素原的特异性更好,联合动态检测可以提高诊断的灵敏度和特异性。 陶慧娴关键词:血清降钙素原 超敏C反应蛋白 白介素6 细菌性感染 自噬在脂多糖诱导的A549细胞炎症反应中的作用及机制研究 被引量:1 2022年 目的 探讨自噬在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应中的作用及机制。方法 用LPS刺激A549细胞建立炎症反应模型,按浓度(0、1、5、10μg/mL)和时间(0、4、8、12、24h)分组(各组n=3)。用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞,分为对照组、LPS组、3-MA组、3-MA+LPS组(各组n=3);用自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)处理细胞,分为对照组、LPS组、RAPA组、RAPA+LPS组(各组n=3)。通过Toll样受体4 (Toll-like receptor 4,TLR4)过表达质粒和siRNA转染A549细胞,实验分为两部分,每部分各分4组(各组n=3):TLR4过表达对照组、TLR4过表达组、TLR4过表达对照+LPS组、TLR4过表达+LPS组;TLR4沉默对照组、TLR4沉默组、TLR4沉默对照+LPS组、TLR4沉默+LPS组。采用CCK-8法检测细胞存活率,免疫印迹法检测炎症指标(NLRP3、Caspase-1、ASC)、自噬指标(LC3B、Beclin-1、P62)、TLR4蛋白表达水平。结果 1μg/mL浓度的LPS刺激12h后,炎症指标(NLRP3、Caspase-1、ASC)、自噬指标(LC3B、Beclin-1、P62)和TLR4蛋白表达均明显升高并达峰值(P<0.05)。与LPS组比较,3-MA+LPS组自噬相关蛋白表达降低,炎症相关蛋白表达升高,TLR4蛋白表达上调;RAPA+LPS组自噬相关蛋白表达升高,炎症相关蛋白表达降低,TLR4蛋白表达下调(P<0.05)。TLR4过表达+LPS组较TLR4过表达对照+LPS组自噬相关蛋白表达降低,炎症相关蛋白表达升高;TLR4沉默+LPS组较TLR4沉默对照+LPS组自噬相关蛋白表达升高,炎症相关蛋白表达降低(P<0.05)。结论 在LPS诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应中,自噬流对A549细胞具有一定保护作用;TLR4介导自噬流对LPS诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应进行负向调控。 时佳 陶慧娴 郭艳 邹芸苏 王木子 卢志涛 丁溢芳 许卫东 周晓光关键词:自噬 炎症反应 脂多糖 脐带延迟结扎及脐带血挤入法对早产儿的影响 被引量:4 2019年 目的探讨脐带延迟结扎及脐带血挤入法对早产儿的影响。方法方便选择2016年11月—2017年11月于该院经阴道分娩的早产儿50例为研究对象。根据断脐方式不同分为两组,观察组25例行脐带延迟结扎或脐血挤入,对照组25例行常规早期结扎脐带法。比较两组新生儿出生后血红蛋白、红细胞压积、血糖、碱剩余、胆红素、肌酸激酶同工酶(CKMB)。结果观察组血红蛋白、红细胞压积、血糖水平、碱剩余均高于对照组[(184.44±12.37)g/L vs (152.60±12.87)g/L、(0.559±0.385)%vs (0.459±0.397)%、(3.45±0.66)mmol/L vs (2.99±0.78)mmol/L、(-3.56±2.68)mmol/L vs (-6.50±1.69)mmol/L],差异有统计学意义(t=8.917、9.041、2.237、4.631,P<0.05);对照组胆红素、CKMB水平与观察组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论脐带延迟结扎及脐带血挤入法可有效提高早产儿血红蛋白、红细胞压积、血糖水平,减少早产儿贫血、低血糖的发生,但对高胆红素血症及心肌细胞损伤无明显影响。 陶慧娴关键词:早产儿 基于“柏林定义”的新生儿急性呼吸窘迫综合征临床流行病学调查研究 被引量:24 2018年 目的了解江苏省新生儿重症监护病房(neonatal intensive care unit,NICU)新生儿急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的发生率、病死率及影响因素。方法采用前瞻性、多中心临床流行病学研究方法,并应用2012年欧洲危重症协会在德国柏林主持修订的ARDS诊断新标准(柏林定义),对2015年3月至2016年2月收入江苏省9家医院NICU的新生儿ARDS病例及其影响因素进行调查。结果江苏省9家医院NICU在一年内共收治新生儿10 422例,其中8 795例符合危重病例,给予机械通气治疗1 681例。根据ARDS柏林定义,278例诊断为ARDS,其中轻度57例(20.5%),中度85例(30.6%),重度136例(48.9%);男185例,女93例;足月儿216例,早产儿62例;出生体重2 500~4 000 g 210例,〈2 500 g 57例,〉4 000 g 11例;顺产48例,剖宫产196例,吸引产21例,产钳助产13例。原发疾病包括围产期窒息176例(63.3%),胎粪吸入综合征97例(34.9%),败血症89例(32.0%),肺炎65例(23.4%),新生儿休克38例(13.7%),弥散性血管内凝血28例(10.1%)。在NICU收治的所有患儿中,ARDS发生率为2.7%,占危重病例的3.2%,占机械通气患儿的16.5%。治愈ARDS患儿172例(61.9%),死亡79例(28.4%),自动出院27例(9.7%)。对自动出院的27例患儿进行电话随访,其中17例自动出院后转上级医院治愈,10例自动出院后24 h内死亡。本组新生儿ARDS共死亡89例,病死率32.0%。结论NICU新生儿ARDS发生率及其在危重病例和机械通气病例中的比例均较高,围产期窒息、胎粪吸入综合征、败血症、肺炎、休克和弥散性血管内凝血为主要原发疾病,采取综合治疗可提高治愈率。 江苏省新生儿ARDS研究协作组 陆亚东 王贝贝 杨远 贡永健 牛蓉 阚清 杨洋 邱洁 赵莉 邹芸苏 钱力 李勇 程锐 周晓玉 周晓光 许卫东 陶慧娴 朱苏月 乔继冰 焦泽霖 韩良荣 万俊 包志丹 韩树萍 王威远 高艳关键词:急性呼吸窘迫综合征 流行病学研究 患病率 病死率 STAT3对肺泡上皮细胞表面活性物质相关蛋白表达的影响 被引量:3 2018年 目的 探讨信号传导及转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)对肺泡上皮细胞表面活性物质相关蛋白(surfactant proteins,SP)表达的调控作用.方法 构建过表达STAT3的慢病毒并感染人肺泡上皮细胞A549细胞,构建过表达STAT3基因的A549细胞株;设计并化学合成STAT3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),在脂质体(Lipofectamine3000)的介导下转染A549细胞,构建沉默STAT3的A549细胞;采用Real-time PCR法分别检测STAT3过表达和沉默后STAT3、SP-A、SP-B、SP-C和SP-D mRNA的表达量,Western blot法检测STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、SP-A、SP-B、SP-C和SP-D蛋白的表达.结果 通过Real-time PCR和Western blot法检测STAT3的表达,结果证明成功构建了过表达/沉默STAT3的A549细胞株;与空载病毒组(LV5-Mock)相比,过表达STAT3组(LV5-STAT3)的SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白的表达均上调(P<0.05);与阴性对照组(NC)及转染试剂对照组(Mock)相比,沉默STAT3组(siRNA) SP-A、SP-B、SP-C和SP-D mRNA和蛋白的表达均下调(P<0.05).结论 STAT3对肺表面活性物质相关蛋白的表达具有调控作用,过表达STAT3基因能够促进SP的表达,沉默STAT3基因抑制SP的表达. 贡永健 许卫东 陶慧娴 卢志涛 陈旸 周晓玉 周晓光关键词:肺表面活性物质相关蛋白 小干扰RNA A549细胞 血浆脑钠肽测定在小儿肺炎合并心衰诊疗中的应用价值 被引量:5 2015年 目的探讨小儿肺炎合并心力衰竭患者血浆脑钠肽(BNP)测定在鉴别诊断和疗效评估中的价值。方法选择2012年8月至2014年2月入住我院的80例1-3岁肺炎患者,其中单纯肺炎病例46例和肺炎合并心衰病例34例。每位患者分别在入组时和治愈出院前进行血浆BNP的测定,另取20名健康体检同年龄段儿童测定血浆BNP作为健康对照。将检测结果进行入组时单纯肺炎组与肺炎合并心衰组比较、肺炎合并心衰组治疗前后比较。结果肺炎合并心衰组入院时的血浆BNP(750±120 pg/ml)高于单纯肺炎组(135±50 pg/ml),差异有统计学意义(P<0.05)。肺炎合并心衰组患者治愈出院时的血浆BNP(85±45pg/ml)低于入组时(750±120 pg/ml),差异也有统计学意义(P<0.05)。结论血浆BNP是小儿肺炎合并心力衰竭患者临床诊断及监测疗效的一个敏感性指标,对于临床诊疗具有重要应用价值。 高锦萍 胡丹 陶慧娴关键词:儿科 心衰 肺炎 circRNA_Dock6在急性呼吸窘迫综合征新生大鼠肺组织中的表达及其生物信息学分析 被引量:2 2020年 目的对应用circRNA高通量测序技术在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)新生大鼠肺组织中筛选出差异表达的circ_Dock6进行体内验证,并通过生物信息学方法预测其相对应的miRNA靶基因,分析其所参与的生物学过程及富集的信号通路。方法采用实时定量PCR技术检测ARDS组(12只)和正常对照组(12只)新生大鼠肺组织circ_Dock6表达变化。应用TargetScan、RNAhybrid和miRanda数据库预测circ_Dock6可能的募集miRNAs及其对应的靶基因,并对各个miRNA的靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析。结果ARDS组新生大鼠肺组织circ_Dock6表达(0.44±0.29)较正常对照组(1.63±1.33)显著下调(t=2.060,P<0.05)。用3个数据库得到circ_Dock6可能募集的miRNAs(miR-24-3p、miR-667-3p、miR-711、miR-203b-5p、miR-5132-5p等)的靶基因交集情况;对前述靶基因的合集进行注释描述、富集分析,其靶基因的功能参与调控多种生物学过程,包括各种细胞蛋白质代谢、蛋白质氨基酸磷酸化、DNA依赖性转录调节、生物调节、组织器官发育、细胞分化、信号调节、基因表达、对刺激的反应性调节等;细胞组分富集分析可见靶基因集合富集于细胞内、细胞器、细胞质、细胞核等几乎所有细胞组分上;分子功能富集分析可见其具有转移酶活性、转录因子活性、磷酸转移酶活性等功能。所涉及的信号通路包括富集于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路等均与ARDS密切相关;circ_Dock6在ARDS发病过程中可能发挥重要作用。结论circ_Dock6可能与新生儿ARDS的发病机制密切相关,通过生物信息学分析对其靶基因与相关信号通路的预测,为进一步探讨其作用机制奠定了基础。 韩晶晶 许卫东 陶慧娴 卢志涛 杨远 陈旸 周晓光关键词:急性呼吸窘迫综合征 MIRNA 靶基因