王豪杰
- 作品数：8 被引量：28H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学园艺学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目“十二五”国家科技计划农村领域更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用GC-MS和电子鼻研究1-MCP对‘嘎拉’苹果常温贮藏期间芳香物质的影响被引量：9
- 2014年
- 【目的】研究1-MCP对‘嘎拉’苹果常温贮藏期间的挥发性芳香物质的影响,探讨电子鼻技术在苹果采后挥发性物质检测与分类中的应用。【方法】以‘嘎拉’苹果为试材,采用顶空固相微萃取(SPME)结合气相色谱-质谱联用(GCMS)技术,分析1-MCP对‘嘎拉’苹果采后挥发性芳香物质的影响,使用PEN3电子鼻无损检测结合线性判别分析(LDA),研究1-MCP对‘嘎拉’苹果采后挥发性物质的影响。【结果】GC-MS检测结果表明,1-MCP处理显著抑制了‘嘎拉’苹果常温贮藏期间醛类、醇类、酯类物质以及草蒿脑的产生,但对酮类物质影响不大,显著减少了芳香物质的种类和总含量;电子鼻线性判别分析(LDA)结果表明,除贮藏6 d的果实外,其余贮藏期的对照和1-MCP处理果实可以完全区分开。【结论】1-MCP处理显著抑制了‘嘎拉’苹果常温贮藏期间芳香物质的合成,利用电子鼻可以在一定程度上区分不同贮藏期的对照和1-MCP处理果实。
- 樊丽向春燕周轲王豪杰任小林
- 关键词：电子鼻芳香物质
- 苹果HD-ZipⅠ家族基因序列特征及其在果实中的激素响应被引量：6
- 2015年
- [目的]对苹果基因组中挖掘得到的HD-Zip Ⅰ(Homeodomain leucine zipper Ⅰ)家族基因进行生物信息预测,结合生理生化数据为苹果果实发育的激素调控网络研究提供最佳候选基因。[方法]应用Ex PASy进行HD-ZipⅠ家族蛋白基本理化性质分析,采用MEME和PLACE软件预测各成员启动子含有的顺式作用元件及其功能,利用GSDS绘制基因内含子/外显子结构示意图;通过内源乙烯浓度、可溶性固形物、可滴定酸、硬度等品质指标检测‘皇家嘎啦’苹果果实在不同激素处理条件下的后熟进程;运用半定量RT-PCR分析HD-Zip I家族各成员对外源激素的响应。[结果]鉴定完整的22个HD-ZipⅠ基因可以细分为5个亚类,同一亚类基因的内含子/外显子结构相似,但仍有差异;各基因起始密码子上游-600 bp区域内广泛分布多个响应赤霉素、细胞分裂素、茉莉酸、乙烯和脱落酸的顺式作用元件,以(GA/TC)8重复序列最为保守和丰富。乙烯和脱落酸两种激素处理后,果实内源乙烯浓度及硬度等各指标变化表现出极高的相似度,均加快了‘皇家嘎啦’果实的后熟进程;不同于其他各家族成员,MdHZ1和MdHZ17两个基因的转录水平在乙烯和脱落酸处理后48 h均被不同程度的上调,而在有延缓果实衰老效果的腐胺(PUT)和赤霉素(GA4)处理组中表现为下调,表明MdHZ1和MdHZ17可能与果实的后熟进程有较为紧密的联系。MdHZ16在成熟果实组织中未检测到表达,其他家族成员的激素响应特性未表现出一定的规律性,表明同一家族内即使结构相似的基因也并不一定呈现相似的表达模式,家族基因上游调控机制有一定的复杂性。[结论]通过苹果基因组扫描获得22个HD-Zip I基因,这些基因编码的蛋白结构相似度较高;基因启动子区域含有多个参与不同激素交互作用的顺式作用元件,这或许为家族成员差异响应各外源激素处理的原因;MdHZ1和MdHZ17两个基因�
- 温小红姜永华亢键王豪杰任小林
- 关键词：苹果激素后熟差异表达基因
- 苹果MdHB-1基因启动子中的乙烯响应元件对外源乙烯的响应分析被引量：3
- 2016年
- 通过PlantCARE和PLACE软件在线分析预测表明,在苹果Md HB-1启动子中存在一个乙烯响应元件(距ATG上游576 bp)。为了探究该启动子中的乙烯响应元件对不同浓度乙烯的响应,以苹果品种‘皇家嘎拉’(Malus domestica Borkh.cv.Royal Gala)基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到长度分别为680 bp(含有乙烯响应元件)和485 bp(不含有乙烯响应元件)的启动子序列,构建GUS报告基因瞬时表达载体,依靠农杆菌介导转化烟草叶片,检测经过不同浓度乙烯利(0、500、1 000和1 500mg·L^(-1))处理的转基因烟草叶片的GUS蛋白活性。结果表明,该乙烯响应元件受到外源乙烯正调控作用,随着处理的外源乙烯浓度的增大,正调控效应先升高达到最大值后逐渐减弱,500 mg·L^(-1)乙烯利能最大程度地提升乙烯响应元件活性。
- 王豪杰姜永华刘艳利戚英伟刘翠华任小林
- 关键词：苹果
- 苹果HD-Zip I亚家族转录因子鉴定及其与乙烯的关系
- 利用苹果基因组筛选同源异形盒家族基因，通过qRT-PCR 探索它们在苹果各器官组织与激素处理的表达特性，并分析其表达与乙烯和果实后熟的关系。结果表明，苹果中有鉴定完整的22个HD-Zip I亚家族基因。
- 姜永华亢键温小红王豪杰刘翠华任小林
- 关键词：苹果果实乙烯
- 苹果果实β-半乳糖苷酶基因启动子的克隆与功能分析被引量：4
- 2017年
- 根据已发表的苹果基因组序列设计特异引物,克隆得到苹果品种‘嘎拉’中β-半乳糖苷酶基因(Md-gal)的启动子。序列分析表明,该启动子除含有大多数高等植物启动子具有的保守元件外,还含有大量光响应元件和与激素相关的顺式作用元件,主要有赤霉素响应元件(GARE-motif和P-box)、茉莉酸甲酯(MeJA)应答元件(CGTCA-motif和TGACG-motif)和生长素响应元件(TGA-element);构建5个不同长度Md-gal启动子和GUS基因融合的瞬时表达载体,并进行苹果果实和烟草叶片转化试验,结果显示,5个启动子均具有启动子活性,在Md-gal启动子序列中激活与抑制调节元件并存,正调控元件位于-1206^-754bp区域,负调控元件位于-754^-597bp区域;对Md-gal启动子进行激素响应分析结果显示,激素处理可对其产生诱导作用,且MeJA处理后GUS活性最高。研究表明,Md-gal启动子具有真核基因启动子的基本结构特征和正负调控特性,可响应外源激素处理,可能在苹果果实生长发育和成熟软化方面具有一定的作用。
- 蒋小兵杨惠娟王豪杰张波杨亚州赵政阳
- 关键词：苹果Β-半乳糖苷酶启动子果实生长发育
- 苹果转录因子MdHB1自激活作用及其互作蛋白分析被引量：1
- 2015年
- 筛选苹果转录因子MdHB1的互作蛋白,可以为研究苹果生长发育过程中各种信号分子网络提供线索和依据。本文以苹果品种‘皇家嘎啦’为试材,应用SMART技术构建酵母双杂交cDNA文库。分析MdHB1的转录活性区域并验证其对Y2HGold的细胞毒性作用,利用诱饵载体pGBKT7-MdHB1-N进行文库筛选,获得了24个阳性克隆,测序分析后得到9个无重复的MdHB1互作蛋白,其涉及光合作用、病虫害防御、逆境胁迫等过程。
- 刘艳利姜永华王豪杰戚英伟刘翠华任小林
- 关键词：SMART技术
- 苹果果实HD-ZipⅠ转录因子亚家族基因鉴定及表达分析被引量：5
- 2014年
- 转录因子在调控苹果果实成熟衰老过程中起到至关重要的作用。利用生物信息学方法从苹果基因组数据库筛选出22个HD-ZipⅠ转录因子家族成员并进行分类。通过对不同组织基因表达特异性分析,筛选出6个在成熟果实中表达的基因,进一步分析其在果实成熟贮藏过程中的表达差异。实时荧光定量PCR分析结果表明,在‘富士’果实采后贮藏过程中,有3个家族成员的表达与乙烯存在不同程度的联系,其中MdHZ 6在果实常温贮藏中的表达与内源乙烯含量变化有较高的相关性,且均在35d达到峰值;MdHZ 15和MdHZ 17在内源乙烯高峰之前有显著上调,预测三者与苹果的成熟衰老相关。
- 亢键姜永华王豪杰杨艳青任小林
- 关键词：苹果转录因子
- 苹果转录因子MdHB1的原核表达与多克隆抗体制备被引量：3
- 2018年
- HD-Zip转录因子在植物生长发育过程中具有重要作用,蛋白水平的研究有助于进一步阐释其功能。将苹果转录因子基因Md HB1分别连接到p GEX-6p-1和p ET-28a(+)表达载体,热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),随后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导培养,分别得到了带有GST和6×His标签的Md HB1融合蛋白(分别命名为Md HB1-GST和Md HB1-His_6)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,在18、28℃和37℃3个温度诱导条件下都是沉淀中Md HB1-GST融合蛋白的量较多,37℃尤为明显,较低的诱导温度(18℃和28℃)能够提高融合蛋白Md HB1-GST可溶性形式存在的比例;28℃条件下50 mg/L IPTG诱导的总蛋白量在8 h左右达到最大,且受IPTG质量浓度(10、50、100 mg/L)的影响不大。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白Md HB1-His_6为抗原,成年兔免疫以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明,所得抗体效价较高。蛋白质免疫印迹实验结果说明,所制备多克隆抗体特异性良好,能够从菌体和苹果幼叶总蛋白中成功检测Md HB1蛋白。综上所述,本实验所得多克隆抗体能够用于深入研究Md HB1在植物体内的功能。
- 戴杰雨姜永华张玉洁王豪杰刘潇然刘翠华任小林
- 关键词：苹果转录因子HD-ZIP原核表达多克隆抗体
