曾中秋
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国科学院成都生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Wnt蛋白拮抗剂Frzb的cDNA克隆、重组慢病毒构建以及稳定表达细胞株的建立被引量：2
- 2014年
- Wnt信号通路的异常活化与人类多种恶性肿瘤的发生密切相关,为探索作为Wnt蛋白拮抗剂sFRP(Secreted frizzled related protein)家族成员之一的Frzb/sFRP3在肝癌细胞中的抗癌潜力,本研究主要通过RT-PCR以及慢病毒表达系统进行了Frzb的cDNA克隆、重组慢病毒构建以及肝癌稳定表达细胞株的建立.从人正常肝细胞HL-7702中提取总RNA,通过RT-PCR获得Frzb cDNA片段并经测序证实;与此同时,将Frzb cDNA分别构建至以绿色荧光蛋白或嘌呤霉素抗性为报告基因的慢病毒真核表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1-Frzb及pLVX-Puro-Frzb,通过酶切和测序获得正确的慢病毒重组表达质粒;其次,通过Lenti-X?Lentiviral Expression Systems将慢病毒重组表达质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染HEK293T细胞,48 h后制备重组慢病毒悬液,随后感染HEK293T细胞,分别通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达以及Western blot验证了Frzb(FLAG标签)在细胞中的正确表达;最后,将Frzb重组慢病毒悬液感染肝癌HepG2细胞,经2μg/mL嘌呤霉素筛选成功地获得了稳定表达Frzb的细胞株.以上结果表明慢病毒表达体系对Wnt信号通路的分子靶向药物研究具有重要价值.
- 马玉玲裴哲王晶魏枭曾中秋陈雨文唐亚雄
- 关键词：FRZB肝癌细胞HEPG2克隆重组慢病毒
- 蛋白质精氨酸甲基转移酶抑制剂DB75对人膀胱癌T24细胞的抑制作用被引量：2
- 2015年
- 蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)是近年来新发现的一种表观遗传修饰酶,在膀胱癌等多种癌组织中过度表达,因此针对该靶点的新型表观抗肿瘤药物研究尤为重要.通过基于PRMT1药效团虚拟筛选模型筛查抑制PRMT1活性的小分子化合物,体外研究了靶向PRMT1的小分子化合物DB75对膀胱癌细胞的抗瘤活性及诱导细胞凋亡的分子机制.实验结果显示:通过筛选体系获得了能显著抑制PRMT1活性的小分子化合物DB75;MTT实验表明,DB75能够显著(P<0.05)地抑制膀胱癌T24细胞的增殖,且随着药物浓度的增加,抑制率呈明显的剂量效应,48 h半数抑制浓度IC50为2.2μmol/L;DAPI染色显示DB75能显著(P<0.05)诱导膀胱癌T24细胞凋亡;分子机制研究显示,DB75通过激活Caspase-3和PARP活性从而诱导T24细胞凋亡.以上结果初步表明DB75可作为一种新型的膀胱癌表观先导化合物.
- 曾中秋马玉玲裴哲陈雨文王晶唐亚雄
- 关键词：膀胱癌细胞凋亡
- 重组靶向Wnt融合蛋白及其在制备抗癌药中的应用
- 本发明涉及一种重组靶向的Wnt信号通路融合蛋白及其在制备抗癌药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明构建了基于sFRP家族蛋白的CRD结构域和WIF-1的WD结构域，所构建的融合蛋白具有抑制Wnt信号并显著抑制裸鼠皮下...
- 唐亚雄曾中秋
- 文献传递
- Wnt信号通路蛋白Frzb在制备抗肝癌药中的应用
- 本发明涉及一种Wnt信号通路蛋白Frzb在制备抗肝癌药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明首先通过蛋白质免疫印记以及免疫组化技术明确了肝癌病人肝脏组织样本库和肝癌细胞株中Frzb的表达量相对较低，发现了Frzb在肝癌...
- 唐亚雄裴哲曾中秋
- 文献传递
- 肝癌Wnt通路可溶性跨膜受体Frizzled-7稳定表达细胞株的构建与鉴定被引量：2
- 2015年
- Wnt信号的异常持续激活可导致肝癌的发生发展,跨膜受体Frizzled-7在绝大多数肝癌临床肿瘤组织中呈现高度表达特征.为探索可溶性跨膜受体sFZD7在肝癌细胞中的抗癌活性,本研究主要通过分子克隆手段构建sFZD7的重组慢病毒表达载体,实现其在肝癌细胞Mahlavu中的超量表达,并通过抗生素筛选获得稳定表达sFZD7的肝癌细胞株,从而为研究sFZD7在肝癌中的生物学功能奠定基础.具体方法是首先提取人正常肝细胞HL-7702的总RNA,通过RT-PCR获取sFZD7 cDNA片段,分别将其插入慢病毒表达载体p LVX-IRES-Zs Green1与p LVX-Puro中,并通过酶切鉴定及测序分析以验证该慢病毒重组表达质粒的成功构建.其次,包装sFZD7重组慢病毒,并将制备的重组慢病毒悬液感染人胚肾HEK293T细胞,分别通过荧光显微镜与Western blot技术检测sFZD7的表达.最后,通过病毒感染与嘌呤霉素筛选获取稳定表达sFZD7的Mahlavu细胞株.实验结果表明,通过分子生物学手段已经成功地获得sFZD7慢病毒重组表达质粒p LVX-IRES-Zs Green1-sFZD7与p LVX-Puro-sFZD7;与此同时,已获得sFZD7重组慢病毒,感染HEK293T细胞后已通过荧光显微镜技术及Western blot证实了sFZD7的正确表达;此外,通过该sFZD7重组慢病毒感染肝癌Mahlavu细胞并经嘌呤霉素筛选手段成功地获得了稳定表达sFZD7的肝癌细胞株.上述结果可为sFZD7在肝癌细胞中的生物学功能与分子机制后续研究奠定基础.
- 裴哲曾中秋陈雨文李文华TANG Yunjie唐亚雄
- 关键词：WNT信号肝癌重组慢病毒稳定细胞系
- 愈创木内酯Dehydrozaluzanin C的合成及其对膀胱癌T24细胞的抑制作用
- 2016年
- 天然产物倍半萜内酯如青蒿素等具有重要的药用价值,Dehydrozaluzanin C是一种从兔耳风等药用植物根部提取分离的愈创木内酯类倍半萜内酯,为解决其生物含量的问题、了解其抗肿瘤活性,本研究设计出一种快速、高效的合成方法获得Dehydrozaluzanin C,探讨该化合物对膀胱癌T24细胞增殖、细胞凋亡的影响.实验结果表明,以去氢木香内酯为起始反应物,通过烯丙位氧化、戴斯-马丁氧化两步反应从而获得Dehydrozaluzanin C,总产率为73%.细胞增殖MTT实验结果表明该化合物能显著地制膀胱癌T24细胞的增殖,且该抑制作用呈现出明显的剂量依赖效应;DAPI染色结果表明该化合物能显著诱导T24细胞凋亡,Western Blot免疫印迹分析结果证实该化合物在分子水平上通过PARP的断裂从而诱导细胞凋亡.上述结果表明愈创木内酯Dehydrozaluzanin C对膀胱癌的预防与治疗具有潜在价值.
- 陈雨文马玉玲曾中秋李文华李遂焰唐亚雄
- 关键词：膀胱癌细胞T24细胞增殖细胞凋亡PARP
