赵小平
- 作品数：12 被引量：43H指数：4
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默TIGAR基因对非小细胞肺癌细胞增殖和代谢的影响
- 2018年
- 目的:通过沉默TIGAR(Tp53 induced glycolysis and apoptosis regulator)基因,探讨其对非小细胞肺癌细胞增殖及代谢的影响及可能的机制。方法:用靶向TIGAR的siRNA沉默TIGAR,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白印迹(WB)分别检测TIGAR mRNA和蛋白表达水平,将敲除效率较好的敲除序列包装进重组慢病毒感染细胞构建稳定敲减TIGAR的细胞。通过CCK-8法、软琼脂克隆形成、FCM法分别检测细胞的增殖速率、克隆形成能力和细胞周期分布;蛋白印迹法检测TIGAR沉默后周期相关蛋白CDK4和p27的表达情况。RT-qPCR检测TIGAR对糖代谢相关酶表达的影响;^(18)F-FDG、1-^(14)C、6-^(14)C摄取实验分别检测相应的代谢流量,乳酸试剂盒和ROS试剂盒分布检测细胞乳酸生成和ROS水平。结果:转染siTIGAR或感染shTIGAR病毒后细胞TIGAR表达水平明显下降(P值均<0.005)。成功构建了两株稳定敲减TIGAR的非小细胞肺癌细胞株,shTIGAR组细胞增殖速率和克隆形成能力明显下降,细胞周期阻滞在G_0/G_1期,P27蛋白明显上调,CDK4蛋白明显下调。沉默TIGAR促进细胞糖酵解速率和乳酸生成,抑制磷酸戊糖途径和氧化磷酸化,细胞ROS生成增加尤其是低氧情况下(P值<0.05)。结论:下调TIGAR表达的非小细胞肺癌细胞增殖能力下降,其机制可能与调控CDK4和P27表达及代谢流量再分布相关。
- 申梦琴赵小平赵丽黄钢刘建军
- 关键词：RNA干扰细胞增殖
- 沉默ACLY基因可抑制结肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭被引量：4
- 2019年
- 目的:探讨沉默ATP柠檬酸裂解酶(ATP citrate lyase,ACLY)基因表达对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:采用成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)技术特异性靶向ACLY基因,构建2株稳定沉默ACLY表达的结肠癌HCT116细胞(即ACLY-knockout-1和ACLY-knockout-2,简称KO-1和KO-2)。应用蛋白质印迹法检测KO-1和KO-2组及未敲除ACLY的对照组(Ctrl)HCT116细胞中ACLY蛋白的表达,应用CCK-8法和软琼脂克隆形成实验分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的迁移和侵袭能力,应用实时荧光定量PCR法检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子E-cadhrein、N-cadherin和波形蛋白(vimentin,VIM)以及相关转录因子Snail和锌指E盒增强子结合蛋白1(zinc-nger E-box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA的表达水平。结果:KO-1和KO-2组HCT116细胞中ACLY蛋白不能正常表达,而Ctrl组HCT116细胞中可见ACLY蛋白表达。细胞培养72和96 h,KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力明显低于Ctrl组(P值均<0.01);KO-1组HCT116细胞形成的克隆数显著少于Ctrl组(P<0.01)。KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞的迁移(P值均<0.05)和侵袭(P值均<0.01)能力均低于Ctrl组。KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子N-cadherin和VIM以及相关转录因子Snail和ZEB1 mRNA的表达水平均明显低于Ctrl组(P值均<0.01),E-cadherin mRNA的表达水平均明显高于Ctrl组(P值均<0.01)。结论:沉默ACLY基因可能逆转结肠癌HCT116细胞的上皮-间质转化,显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖和迁移。
- 文君闵雪洁赵丽唐德伟刘建军黄钢赵小平
- 关键词：肿瘤侵润上皮-间质转化
- 辛伐他汀和NONO对乳腺癌细胞增殖的影响被引量：5
- 2015年
- 目的:探讨辛伐他汀和NONO(non-POU-dormain-containing,octamerbinding protein)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法 :将靶向NONO基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)片段si RNA-NONO和NONO过表达重组载体pc DNA4/TO-NONO分别转染至乳腺癌MCF-7细胞后,分别应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和细胞计数法检测NONO m RNA和蛋白的表达及细胞的增殖情况。辛伐他汀(20μmol/L)处理MCF-7细胞后,分别应用细胞计数法、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞的增殖、NONO m RNA及蛋白的表达水平。辛伐他汀处理pc DNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞后,应用细胞计数法检测细胞的增殖情况。实时荧光定量PCR和组织总胆固醇酶法检测si RNA-NONO转染组MCF-7细胞中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-Co A reductase,HMGCR)m RNA和胆固醇水平。结果 :si RNA-NONO转染组MCF-7细胞中NONO m RNA和蛋白的表达水平低于阴性对照组[MCF-7细胞转染si RNA negative contro(lsi RNANC)](P<0.01,P<0.05),pc DNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞中NONO m RNA和蛋白的表达水平高于转染空载体pc DNA4/TO的对照组(P值均<0.01)。si RNA-NONO转染组MCF-7细胞的增殖能力明显低于si RNA-NC转染组(P<0.05),而pc DNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞的增殖能力明显高于转染空载体pc DNA4/TO的对照组(P<0.05)。辛伐他汀(20μmol/L)处理组MCF-7细胞的增殖能力和NONO mR NA及蛋白的表达水平均明显低于辛伐他汀未处理的对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。pc DNA4/TO-NONO转染组细胞经辛伐他汀处理后,细胞的增殖能力明显低于未用辛伐他汀处理的细胞(P<0.01)。si RNANONO转染组MCF-7细胞中HMGCR m RNA和胆固醇水平均明显低于si RNA-NC转染组(P值均<0.01)。结论 :辛伐他汀可以抑制MCF-7细胞的增殖,可能与抑制NONO的表达有关。
- 朱宗平赵小平赵丽黄钢刘建军
- 关键词：乳腺肿瘤胆固醇细胞增殖辛伐他汀
- ^(18)F-FDGPET/CT预测非小细胞肺癌淋巴结转移被引量：12
- 2016年
- 目的:研究评估SUVmax与淋巴结转移相关性,分析影响淋巴结转移的潜在危险因子,以便精确评估淋巴结转移。方法:收集2006年12月至2009年12月在本院PET/CT中心检查并经手术病理结果证实的非小细胞肺癌患者79例。将可能潜在的影响淋巴结转移的危险因子纳入研究变量,如肿瘤病理类型,分化程度,肿瘤大小和糖酵解关键酶。结果:SUVmax与肿瘤大小(P<0.01),生存时间(P=0.015)和淋巴结转移(P<0.01)相关。通过ROC生存曲线分析:SUVmax>7.65预测淋巴结转移的敏感性和特异性分别是82.8%和59.0%。肿瘤大小也与淋巴结转移相关(P<0.01),肿瘤原发灶的SUVmax和肿瘤大小为非小细胞肺癌预测淋巴结转移独立危险因素。高风险组(肿瘤大小>3cm且SUVmax>7.65)患有淋巴结转移的概率为66.7%。结论:PET/CT检查中的高SUVmax和大瘤体是非小细胞肺癌患者淋巴结转移的高风险因素。
- 朱宗平周翔李倩赵小平黄钢刘建军
- 关键词：SUVMAX淋巴结转移非小细胞肺癌18F-FDGPET/CT
- 异柠檬酸脱氢酶基因突变在急性髓细胞白血病发生中的作用被引量：4
- 2018年
- 异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)是参与三羧酸循环重要的代谢酶。近年来,在急性髓细胞白血病(acute myeloidleukemia,AML)中IDH成为突变最频繁的肿瘤代谢基因。与其他基因的突变不同,该基因突变后获得的新功能可催化α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)产生肿瘤代谢物二羟基戊二酸(D-2-hydroxyglutarate,D-2-HG)。而细胞中升高的D-2-HG可直接通过遗传表观调控、细胞信号转导、骨髓微环境变化等方式影响骨髓细胞的分化和增殖,诱发AML。目前,新型的IDH2抑制剂AG-221和IDH1抑制剂已成为靶向治疗AML患者中IDH突变的临床一线药物。该文主要针对IDH突变及其突变特点、突变产生的代谢物对AML的形成机制、肿瘤代谢物的代谢通路以及IDH抑制剂的研究进展进行综述。
- 李青丽文君闵雪洁赵丽赵小平
- 关键词：异柠檬酸脱氢酶基因突变急性髓细胞白血病
- SREBP在肿瘤中的研究进展被引量：2
- 2016年
- 脂质代谢是三大物质代谢之一,具有能量储存和供应、维持细胞膜结构、构成血浆脂蛋白以及信号转导等重要生理作用。固醇调节元件结合蛋白(SREBP)是真核细胞内调节脂类代谢的关键核转录因子。新合成的SREBP无活性,经过2次裂解活化转移到细胞核内激活靶基因的转录。SREBP通过调控脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)等基因表达,调节胆固醇和脂肪酸的合成;而在肿瘤中,SREBP往往会失调。该文主要对SREBP的结构、功能及其与肿瘤的关系进行综述。
- 闵雪洁赵丽赵小平
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白脂质代谢肿瘤
- CDK4基因沉默对非小细胞肺癌A549增殖和代谢的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:通过特异性小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),使CDK4基因沉默,探讨该基因沉默对肺癌A549细胞增殖和代谢的影响及其可能的作用机制。方法:将靶向CDK4小干扰RNA(si RNA-CDK4)和阴性对照干扰片段(si RNA-control)成功转染A549细胞后,利用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法分别检测CDK4在m RNA和蛋白水平的变化;细胞计数法、CCK-8法和软琼脂糖克隆形成实验检测A549增殖的变化和克隆形成能力;FCM法检测A549细胞的细胞周期;18F-FDG摄取实验、乳酸检测试剂盒及海马技术检测A549细胞中葡萄糖、乳酸的量及氧耗的变化;利用RT-PCR检测CDK4基因沉默后A549细胞中糖代谢相关酶m RNA水平的变化。结果:将靶向CDK4小干扰RNA(si RNA-CDK4)转染A549细胞后,可明显抑制CDK4的m RNA和蛋白表达(P<0.001,P<0.01)。CDK4蛋白抑制后,细胞增殖在48、72和96 h均明显降低(P值均<0.05),G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显减少(P值均<0.05);18F-FDG摄取量下降(42.21±1.90)%(P<0.05),乳酸的生成量减少(29.39±5.35)%(P<0.05),而细胞的基础耗氧量增加(67.17±3.58)%(P<0.01);糖酵解相关酶PFKFB3、PKM2、LDHA在m RNA水平均明显减低(P<0.001,P<0.01,P<0.001)。结论:抑制CDK4表达可明显降低糖酵解水平,并增加耗氧量;同时可引起细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。其机制可能与CDK4直接或间接调节糖酵解相关酶的表达有关。
- 贾文芝赵小平赵丽黄钢刘建军
- 关键词：肺癌RNA干扰细胞周期
- HDGF的PWWP结构域改变对肿瘤细胞体外及体内增殖的影响
- 2018年
- 目的:研究肝癌衍生生长因子(Hepatoma-derived growth factor,HDGF)PWWP结构域(PWWP domain)改变对肿瘤细胞体外及体内增殖的影响。方法:构建HDGF的PWWP结构域突变体P24A,利用慢病毒感染细胞筛选稳定细胞系。采用CCK-8法和软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖情况。通过裸鼠皮下成瘤实验检测移植瘤的形成情况。结果:在肝癌Hep G2和结直肠癌DLD1稳定细胞株中,CCK-8法检测结果显示突变体P24A对细胞生长的抑制作用呈时间依赖性,其OD值在24、48、72和96 h均明显低于HDGF稳定细胞株(均P<0.001)。克隆形成实验结果显示P24A组克隆数目明显小于HDGF组(P<0.01)。异种移植瘤动物模型则证明P24A细胞株的瘤块生长速度(P<0.001,P<0.01,P<0.01),瘤块大小及体积(P<0.01)均明显低于HDGF细胞株。结论:PWWP结构域改变可能抑制HDGF发挥促进细胞增殖的作用。
- 闵雪洁文君赵丽刘建军黄钢赵小平
- 关键词：肝癌衍生生长因子肿瘤增殖
- 沉默HDGF基因抑制HepG2细胞的增殖和脂质代谢
- 2018年
- 目的:探讨肝癌衍生生长因子(HDGF)对HepG2细胞增殖和脂质代谢的影响。方法:用脂质体包裹si RNA的方法沉默HDGF基因,用实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法检测HDGF在mRNA和蛋白水平的变化,检测细胞总甘油三酯、胆固醇含量并用油红O染色,CCK-8检测及琼脂糖凝胶克隆形成,实时荧光定量PCR法检测脂质代谢相关酶的mRNA表达。结果:将靶向HDGF小干扰(si RNA-HDGF)转染到HepG2细胞后,可明显抑制HDGF的mRNA表达(P<0.001)和蛋白表达。HDGF蛋白抑制后,细胞增殖在48 h(P<0.01)、72 h(P<0.001)和96 h(P<0.001)均明显降低;细胞内总甘油三酯及胆固醇水平也明显降低(P<0.05,P<0.01)。此外,油红O染色显示细胞内脂滴有明显的减少。脂质代谢相关酶脂肪酸合成酶(FASN)、羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)及ATP-柠檬酸裂解酶(ACLY)的mRNA表达均明显降低(P<0.001,P<0.001,P<0.001,P<0.01)。结论:抑制HDGF的表达可明显降低HepG2细胞内脂质代谢水平并抑制其增殖。
- 闵雪洁文君赵丽刘建军黄钢赵小平
- 关键词：肝癌衍生生长因子脂质代谢HEPG2细胞
- 蛋白质精氨酸甲基转移酶在肿瘤中的作用及机制研究进展被引量：9
- 2017年
- 蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)能甲基化多种蛋白,包括组蛋白和非组蛋白,影响多种细胞过程,如转录、RNA剪接、DNA修复、细胞周期的控制等。PRMT的活性受多种调节机制影响,它的异常表达在疾病的发生发展中起重要作用,尤其是肿瘤,如乳腺癌、白血病等。PRMT在肿瘤诊断或治疗中有着独特的价值。随着PRMT甲基化机制的深入探索,目前PRMT选择性抑制剂的研究已取得一定进展,PRMT特异性抑制剂有望成为治疗肿瘤的精准靶向药物。
- 文君闵雪洁赵丽赵小平
- 关键词：甲基化肿瘤
