董忠典
- 作品数：25 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划山东省博士后创新项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>
- 山羊毛囊外根鞘细胞系的构建方法
- 本发明涉及一种山羊毛囊外根鞘细胞系的构建方法，利用皮肤成纤维细胞外基质诱导和机械分离与酶消化相结合的方法，启动了ORSC的原代培养，并利用不同培养液，成功建立了山羊毛囊外根鞘细胞系。利用本发明构建的山羊毛囊外根鞘细胞系已...
- 王慧崔志峰胡艳霞曾勇庆陈维云周芬娜董忠典张娇
- 文献传递
- 一种半滑舌鳎性染色体连锁的DNA片段及其应用
- 本发明提供了一种半滑舌鳎性染色体连锁的DNA片段及其应用，其中Z染色体上DNA片段的序列为SEQ ID NO:1；W染色体上DNA片段的序列为SEQ ID NO:2。上述的DNA片段用于设计鉴定半滑舌鳎遗传性别的分子标记...
- 陈松林董忠典张宁刘洋邵长伟徐文腾
- 文献传递
- 一种基于基因组编辑的海水鲆鲽鱼类种质构建方法及应用
- 本发明提供一种基于基因组编辑的海水鲆鲽鱼类新种质构建方法。以半滑舌鳎Dmrt1基因为例，通过构建Dmrt1基因的基因组编辑TALEN质粒，在体外转录为mRNA后转移到半滑舌鳎1‑4细胞期的受精卵动物极，将受精卵培育为成鱼...
- 陈松林崔忠凯郑汉其刘云王娜林帆王文文张宁董忠典李仰真
- 文献传递
- 半滑舌鳎gata5基因的克隆及表达分析
- 2019年
- 【目的】研究半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)gata5基因(csgata5)的序列特征及该基因在半滑舌鳎性腺分化、成熟过程中的表达模式。【方法】通过克隆获得csgata5编码区序列,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测csgata5 mRNA在不同类型性腺、胚胎和性腺发育中的表达模式,借助原位杂交技术定位csgata5 mRNA表达的细胞类型。【结果】克隆获得csgata5 cDNA序列1 777 bp,包含1 167 bp的编码区(Coding sequence,CDS),262 bp的5′UTR和348 bp的3′UTR区,预测csgata5编码388个氨基酸残基(aa),分子质量为41.9 ku,等电点为8.90,在C端含有两个典型的GATA锌指结构域;基因组分析显示csgata5位于半滑舌鳎10号染色体上,包含7个外显子和6个内含子区。RT-qPCR分析显示csgata5 mRNA在2龄雄鱼和伪雄鱼精巢中表达高于卵巢;csgata5m RNA主要定位在卵母细胞、精原细胞和精子中。胚胎发育过程中,csgata5m RNA表达在1细胞期至囊胚期呈下降趋势,之后上升,至原肠胚期达到峰值,随后降低并维持较低水平至孵化出膜。在精巢发育过程中,csgata5m RNA表达水平呈升高趋势,在1龄达到检测的峰值;在卵巢发育过程中,csgata5m RNA表达趋势类似精巢,表达水平低于同期精巢。【结论】csgata5参与半滑舌鳎原肠胚期的组织器官分化,具有促进原始生殖细胞向雄性生殖细胞分化及雄性生殖细胞发育的作用。
- 董忠典董忠典崔忠凯张宁崔忠凯
- 关键词：半滑舌鳎RT-QPCR原位杂交性腺分化
- 山羊毛囊外根鞘细胞系的构建方法
- 本发明涉及一种山羊毛囊外根鞘细胞系的构建方法，利用皮肤成纤维细胞外基质诱导和机械分离与酶消化相结合的方法，启动了ORSC的原代培养，并利用不同培养液，成功建立了山羊毛囊外根鞘细胞系。利用本发明构建的山羊毛囊外根鞘细胞系已...
- 王慧崔志峰胡艳霞曾勇庆陈维云周芬娜董忠典张娇
- 草鱼MHC II B和组织蛋白酶D基因的克隆、表达及多态性分析
- 本研究以我国重要的淡水养殖鱼类草鱼（Ctenopharyngodon idellus）为实验材料，采用RACE-PCR、分子克隆及实时荧光定量PCR等技术，对MHCⅡB和组织蛋白酶D（cathepsin D）基因进行了克...
- 董忠典
- 关键词：草鱼克隆MRNA
- 文献传递
- 尼罗罗非鱼致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定与药敏试验被引量：10
- 2012年
- 从自然患病的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏组织分离出2株细菌,命名为M-O1和M-02。用M-O1和M-02分别在实验室人工感染健康的尼罗罗非鱼,被感染鱼3周内全部死亡,且患病症状与自然发病症状一致。从被感染的鱼体中分离得到2株类似细菌(分别命名为W-01、W-02),说明分离的菌株为本次尼罗罗非鱼出血性败血症的病原菌。通过生理生化方法进行种属鉴定,确认以上分离到的4株细菌均为嗜水气单胞菌(Aeromonaz hydrophila),分别命名为M-O1、M-02、W-01、W-02。用19种常见药物对上述菌株进行药敏试验,4菌株对丁胺卡那、氟哌酸、庆大霉素、链霉素、恩诺沙星、新霉素、氟罗沙星和复方新诺明极为敏感;对氧哌嗪青霉素、利福平、麦迪霉素、红霉素、罗红霉素和阿奇霉素敏感,对羧苄青霉素、头孢噻吩、先锋霉素、氨苄青霉素和林可霉素为不敏感。
- 董忠典周芬娜袁颜颜冯艳艳王慧
- 关键词：尼罗罗非鱼败血症嗜水气单胞菌药敏试验
- 尼罗罗非鱼MHC ⅡA基因的克隆、表达及多态性分析被引量：2
- 2012年
- 为进一步了解鱼类MHC ⅡA基因的特点及其在免疫反应中的功能,采用同源克隆、RACE-PCR、巢式PCR等技术,从健康的尼罗罗非鱼体获得1 205 bp的MHC ⅡA基因cDNA全序列(Orni-DBA-0101,Genebank登录号:JF719813)及1 388 bp的基因组序列。序列分析发现,尼罗罗非鱼MHC ⅡA基因含4个外显子和3个内含子,开放阅读框长720 bp,编码239个氨基酸。从4尾尼罗罗非鱼中共得到8条不同的cDNA序列,分别编码不同的氨基酸序列。氨基酸序列比对后发现,序列间存在丰富的多态性,且主要集中在α-1区,多态性位点数远远高于半滑舌鳎MHC ⅡA基因。生物信息学分析表明,尼罗罗非鱼MHC ⅡA编码的蛋白质分子包含1个信号肽、2个胞外结构域、1个跨膜区和1个胞质区,存在4个保守的半胱氨酸残基以及丰富的磷酸化位点,与其他物种的相似性为23%～65%。RT-PCR结果表明,MHC ⅡA基因在脾、肾、肠、鳃、性腺、肝、心脏表达量很高,在鳔和肌肉中表达量最低。人工感染嗜水气单胞菌后,肝、脾、肾、鳃、肠5个组织中MHC ⅡA基因的mRNA水平均发生了不同程度的变化,提示MHC ⅡA分子作为一种重要的免疫因子,在清除病原的免疫反应中起着重要作用。
- 周芬娜董忠典李同明傅咏王慧
- 关键词：尼罗罗非鱼多态性基因克隆MHC
- 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Nramp基因克隆与表达分析及SNP筛选被引量：4
- 2016年
- 天然抗性相关巨噬细胞蛋白(Natural resistance-associated macrophage protein,Nramp)属于膜整合转运蛋白,具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞的抗菌活性等作用。本研究对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Nramp基因进行了克隆和表达分析,并对其与抗鳗弧菌感染相关的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位点进行了筛选。该基因c DNA序列全长3717 bp,其中开放阅读框(Open reading frame,ORF)1677 bp,所编码蛋白含有558个氨基酸,该蛋白具有Nramp家族的典型特征,包括10个跨膜区(Transmembrane,TM)、1个由20个氨基酸残基组成的胞质内转运蛋白特征结构域(Consensus Transport Motif,CTM)。半滑舌鳎Nramp的ORF末端有1个类似于脊椎动物Nramp2中的铁反应控制蛋白结合位点(Iron-responsive regulatory protein-binding site,IRE)。半滑舌鳎Nramp与其他14个物种的Nramp氨基酸序列同源性在63%-91%之间,系统进化分析表明,半滑舌鳎Nramp和所有鱼类Nramp聚集为一簇,与其他物种Nramp2的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析显示,Nramp基因在半滑舌鳎脾脏和肾脏中的表达量最高,而在肌肉和性腺中的表达量最低;在哈维氏弧菌感染的半滑舌鳎肾脏、脾脏和肝脏中表达量呈升高趋势,而在鳃中则表现为下调趋势。利用直接测序法检测感染鳗弧菌后同一家系的233个个体(抗病个体165个,感病个体68个),共检测到15个SNP位点,对其中3个SNP位点即SNP-g.3113(T→C)、SNP-g.3125(A→G)和SNP-g.3164(A→T)进行测序分型后发现,SNPg.3125(A→G)的等位基因(G)频率和基因型(GG)频率与半滑舌鳎抗鳗弧菌疾病呈极显著相关(P<0.01)。研究结果表明,Nramp基因不同基因型对半滑舌鳎的抗病能力有着极其重要的影响,SNP-g.3125(A→G)可作为潜在的抗性遗传标记位点。本研究将为半滑舌鳎抗性品系培育提供技术支持。
- 邢贺飞高峰涛张永珍董忠典陈松林
- 关键词：半滑舌鳎基因克隆RT-PCR
- MHC基因的遗传变异及其与鱼类抗病性研究进展被引量：8
- 2011年
- 概述了主要组织相容性复合体(MHC)的结构与功能以及在脊椎动物特别是鱼类中的研究进展。对MHC基因的遗传变异与鱼类抗病性机制做了较为详细的阐述,介绍了MHC的遗传变异与多种鱼类抗病性关系的研究进展,重点介绍了草鱼MHC基因的研究。展望了MHC基因在鱼类及草鱼未来抗病育种中的研究前景。
- 董忠典周芬娜王慧
- 关键词：MHC鱼类抗病性
