苏敬敬
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：复旦大学附属华山医院神经内科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 酸敏感离子通道基因重组质粒的构建、表达及其活性测定
- 2009年
- 为了构建含有小鼠酸敏感离子通道(ASIC1a、ASIC2a)基因全长cDNA的重组质粒,并表达有生物学活性的ASIC1a和ASIC2a融合蛋白,本研究通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别获得小鼠ASIC1a和ASIC2a全长cDNA,并将其克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,构建含小鼠全长ASIC1a和ASIC2a基因的重组质粒pEGFP-ASIC1a和pEGFP-ASIC2a,经DNA测序鉴定序列正确。脂质体法分别将其转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO),荧光显微镜下观察小鼠ASIC1a和ASIC2a融合蛋白在细胞内的表达分布,Westernblot检测其蛋白表达。酸性处理转染重组质粒细胞,并比较其细胞存活率及乳酸脱氢酶(LDH)的释放来评价融合蛋白的生物学活性。结果显示:本研究成功地分别将小鼠ASIC1a和ASIC2a全长cDNA克隆入pEGFP-N3载体中,并将其转染至CHO细胞,荧光显微镜下观察到CHO细胞膜周围呈强绿色荧光条带,Westernblot显示小鼠ASIC1a和ASIC2a融合蛋白分别在90kD和88kD处有表达。经酸性处理的转染ASIC1a和ASIC2a重组质粒的CHO细胞,分别较其在pH7.4条件下的细胞存活率明显降低,LDH释放量明显增高,且通道阻断剂可抑制该效应。上述结果提示,我们已成功构建出含小鼠ASIC1a和ASIC2a全长cDNA的重组质粒pEGFP-ASIC1a和pEGFP-ASIC2a,并使有生物学活性的ASIC1a和ASIC2a融合蛋白在CHO细胞中表达。
- 苏敬敬董强
- 关键词：酸敏感离子通道重组质粒生物学活性小鼠
- 水通道蛋白4与脑出血后脑水肿形成的关系研究被引量：7
- 2010年
- 目的:研究水通道蛋白4(AQP4)在脑出血后脑水肿形成中的作用。方法:以AQP4基因敲除(AQP4-/-)小鼠为研究对象,分别在AQP4+/+和野生型(AQP4-/-)小鼠右侧基底节区立体定向注入5μL自体全血建立脑出血模型。比较两组小鼠脑出血后神经功能缺损、脑含水量、血肿周围组织脑比重、伊文思蓝漏出量及脑组织毛细血管超微结构间的差异。结果:脑出血后AQP4+/+小鼠脑内AQP4蛋白表达量显著增高。AQP4基因的缺失加剧了脑出血神经功能缺损及患侧大脑半球的含水量,降低了血肿周围组织的脑比重,加剧了伊文思蓝的渗漏及毛细血管超微结构的损坏。结论:AQP4基因缺失加剧了脑出血损伤,包括水肿形成、血脑屏障破坏。对脑出血后AQP4表达增高的保护性机制研究可能会为临床治疗脑出血后脑水肿提供新的靶点及思路。
- 唐宇平苏敬敬丁宏岩程忻韩翔王亮董强
- 关键词：水通道蛋白4脑出血脑水肿
- 酸敏感离子通道蛋白与组织型激肽释放酶相互作用的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:观察酸敏感离子通道蛋白(ASIC1a、ASIC2a)与组织型激肽释放酶(TK)之间是否存在相互作用。方法:RT-PCR分别获得小鼠TK、ASIC1a、ASIC2a全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/Myc-his中,脂质体法分别将pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共转染至人胚胎肾细胞(HEK293T),免疫共沉淀分别用抗Myc及抗TK抗体观察两者间有无相互作用。将ASICs融合蛋白与TK(100μg/mL)共孵育,SDS-PAGE分别用抗Myc及抗TK抗体检测蛋白表达。结果:pcDNA3.1-TK和pcD-NA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共转染后,SDS-PAGE显示抗TK抗体检测后在转染细胞内见有56 kDa的TK条带出现,但抗Myc抗体作用未见ASICs目的条带出现。纯化的ASIC1a、ASIC2a融合蛋白与TK共孵育后,SDS-PAGE显示抗Myc抗体检测后在约66 kDa处有融合蛋白表达条带,但抗TK抗体检测后在56 kDa处无条带出现。结论:TK与ASIC1a、TK与ASIC2a之间无相互作用。
- 苏敬敬董强
- 关键词：酸敏感离子通道相互作用重组质粒
- 丝氨酸蛋白酶调控酸敏感离子通道及上皮钠离子通道机制研究进展
- 2009年
- 苏敬敬董强
- 关键词：酸敏感离子通道剪切
