高颖
- 作品数：60 被引量：112H指数：7
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学环境科学与工程更多>>
- MLCK调控平滑肌收缩分子机制的生物学研究
- 高颖赵莹崔颖魏晓晴吕广艳王辉高船舟
- 平滑肌广泛分布于人体消化、呼吸、血管和泌尿生殖系统,阐明平滑肌收缩的调节机制对于揭示生命过程以及相关疾病的防治具有重要的理论意义。肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase，MLCK)是平滑肌收缩的关...
- 关键词：
- 关键词：平滑肌血管性疾病疾病防治
- Ca2+/CaM调节平滑肌肌球蛋白轻链激酶非激酶活性研究
- 肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在有Ca与钙调蛋白(Ca/CaM)存在的情况下磷酸化肌球蛋白20KD调节轻链,从而使肌球蛋白与肌动蛋白之间相互作用。此外,MLCK还具有非激酶活性,在用肌球蛋白包被的盖玻片上我们观察到MLCK...
- 张月赵莹崔颖魏晓晴高颖
- 关键词：MLCK肌球蛋白肌动蛋白
- 文献传递
- 肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体对肌球蛋白ATP酶活性的影响
- 2009年
- 目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)钙调蛋白(CaM)结合位点突变体对肌球蛋白ATP酶活性的影响。方法:构建牛胃重组全长野生型MLCKCaM结合位点突变型蛋白(△CaM/MLCK);孔雀绿方法检测△CaM/MLCK对肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性的影响。结果:在无Ca2+/CaM存在时,随着△△CaM/MLCK浓度的增加,非磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性明显增加;而磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性明显降低。结论:△CaM/MLCK对肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性的影响表明MLCK具有非激酶活性。
- 赵莹张月吕广艳王辉崔颖魏晓晴陈海波高颖
- 关键词：MLCK肌球蛋白ATP酶活性
- 平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体对ATP酶活性的调节作用
- 2009年
- 目的:探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制。方法:利用编码MLCK全长的pColdI表达载体对其ATP结合位点进行定点突变,获得无激酶活性的MLCK突变体;应用Glycerol-PAGE鉴定肌球蛋白磷酸化水平;应用孔雀绿方法检测重组MLCK对肌球蛋白ATP酶活性的影响。结果:MLCK/△ATP(突变型)失去磷酸化肌球蛋白轻链的激酶活性;重组MLCK(野生型)和MLCK/△ATP(突变型)均可以在非钙条件下激活非磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性,抑制磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性,而且激活与抑制作用均随着MLCK浓度的增加而增大,但二者对肌球蛋白的ATP酶活性的作用没有显著差异(P>0.05)。结论:平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体具有激活非磷酸化肌球蛋白ATP酶活性的作用。
- 崔颖谢策吕广艳王辉赵莹魏晓晴曲淑贤曹晶萍高颖
- 关键词：平滑肌收缩肌球蛋白
- ERK介导幽门螺杆菌HSP60感染胃上皮细胞的IL-8分泌被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨幽门螺杆菌热休克蛋白60(H.pylori-HSP60)感染胃上皮细胞后ERK与白介素-8(IL-8)分泌的关系。方法:利用ELISA技术,对活菌(IntactH.pylori)、死菌(Heat-killedH.pylori)及H.pylori-HSP60刺激胃上皮细胞KATOⅢ的IL-8蛋白分泌水平进行分析,观察IL-8随以上抗原浓度梯度的变化及ERK抑制剂PD98059对其分泌量的影响;利用Westernblot技术,观察KATOⅢ细胞中磷酸化ERK随IntactH.pylori、Heat-killedH.pylori及H.pylori-HSP60刺激时间的变化状况。结果:IL-8的分泌随着IntactH.pylori、Heat-killedH.pylori及H.pylori-HSP60刺激浓度的升高而增高;H.pylori刺激KATOⅢ细胞1h后ERK开始表达,其中IntactH.pylori在9h时表达达到高峰,Heat-killedH.pylori在24h时达到高峰,而H.pylori-HSP60刺激KATOⅢ细胞6h后ERK开始表达,9h时达到高峰;PD98059抑制了H.pylori-HSP60诱导的IL-8的分泌。结论:ERK介导了H.pylori-HSP60感染的胃上皮细胞的IL-8的分泌。
- 赵莹魏晓晴吕广艳高颖金海威
- 关键词：ERK胃上皮细胞
- miR-3568对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制的研究
- 动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是严重威胁人类健康的慢性炎症性疾病,其中平滑肌细胞位于管壁中层,是血管中维持管壁张力重要细胞.平滑肌细胞的病变是动脉粥样硬化疾病发生发展的重要环节.因此,研究平滑肌细胞...
- 孙立梅李采张晨旭王靖宇赵莹高颖
- 关键词：AS平滑肌细胞PDGF
- miR-1290对IL-8诱导的血管内皮细胞黏附、凋亡的影响及其分子机制的研究
- 动脉粥样硬化(Atheroserosis,AS)是发生在动脉血管壁以脂质代谢为特征的慢性炎症性疾病。内皮功能障碍是动脉粥样硬化的早期阶段,进而引发炎症反应。基于本课题组前期研究,我们发现MLCK与AS的发生发展相关联,通...
- 徐宏鑫崔颖高颖赵莹
- 关键词：动脉粥样硬化IL-8血管内皮细胞细胞增殖细胞黏附
- 肌球蛋白轻链激酶和Rho激酶在兔脑血管平滑肌细胞迁移中的作用被引量：8
- 2008年
- 目的探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和Rho激酶在颅内血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用。方法体外培养兔大脑中动脉VSMC。构建携带反义MLCK cDNA的腺病毒载体并转染VSMC以降低MLCK表达。应用Rho激酶特异性抑制剂Y-27632来抑制Rho激酶的活性。免疫印迹法测定细胞内MLCK和Rho激酶的表达水平;改良Boyden小室法检测血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)诱导的VSMC迁移;甘油凝胶电泳和免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平。结果反义MLCK cDNA转染后,MLCK表达量较LacZ基因转染组下降(84.6±5.8)%(P<0.01),但ATⅡ刺激引起的MLC磷酸化和VSMC迁移未受明显影响(P均>0.05)。Y-27632预处理反义MLCK cDNA转染后的VSMC可明显降低基础水平以及ATⅡ刺激引起的MLC磷酸化,并部分阻断VSMC迁移(P均<0.05)。结论颅内、外动脉VSMC迁移的分子机制不同,在ATⅡ诱导的颅内VSMC迁移中MLCK作用有限,而Rho激酶可能通过非钙依赖型MLC磷酸化途径发挥重要作用。
- 李胜高颖雷阳齐中华王莹崔颖
- 关键词：颅内动脉硬化肌球蛋白轻链激酶RHO激酶迁移
- 重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体的构建及表达
- 2009年
- 目的构建重组全长平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP结合位点突变体,以研究平滑肌MLCK的结构与功能。方法利用试剂盒对MLCKATP结合位点进行定点突变,构建全长平滑肌MLCKATP结合位点突变体重组表达载体pCold/BsMLCK/△ATP,在大肠杆菌中表达;利用SDS-PAGE鉴定表达的重组全长平滑肌MLCKATP结合位点突变体在细胞中的分布;运用亲和层析及凝胶过滤分离纯化重组全长MLCK并利用SDS-PAGE鉴定表达MLCK的纯度。结果重组全长MLCK/△ATP(突变型)在大肠杆菌中以可溶的形式大量表达;在样品的上清和沉淀中均有重组全长MLCK/△ATP表达;经CaM-Sepharose4B和Superose6HR纯化,SDS-PAGE鉴定得到单一的表达条带。结论重组全长MLCK/△ATP(突变型)可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达;SDS-PAGE结果显示重组全长MLCK/△ATP可以通过亲和层析和凝胶过滤纯化得到单一的条带。
- 崔颖谢策魏晓晴赵莹吕广艳王辉高颖
- 关键词：MLCK突变体
- 指导研究生游离细胞扫描电镜样品制备的体会
- 2009年
- 扫描电镜是用于观察组织细胞表面的超微结构，与透射电镜不同。透射电镜是利用穿透标本的电子进行成像，是观察样品的内部结构。而扫描电镜则由于电子束冲击样品，利用从样品表面发射的二次电子成像。这样所观察的就不是样品的内部结构，而是表面的特征。指导研究生游离细胞扫描电镜样品制备。目的是注重培养学生的操作技能，参与意识，掌握扫描电镜制样的要领。真正做到教学相长。
- 曲淑贤吕广艳魏晓晴高船舟高颖
- 关键词：扫描电镜透射电镜内部结构电子束超微结构
