高丽芳
- 作品数：39 被引量：119H指数：7
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- RNAi沉默STAT3对前列腺癌及黑色素瘤的生长抑制作用
- 目的：探讨应用RNAi技术沉默肿瘤高表达Stat3的抗肿瘤效应。方法：以基因重组技术构建psilencer1.0-U6-siRNA-stat3质粒;应用真核细胞转染技术转染人前列腺癌细胞株PC3及LNCaP，及小鼠黑色素...
- 高丽芳
- 关键词：STAT3RNA干涉前列腺癌黑色素瘤基因重组技术
- 文献传递
- RNA干扰技术沉默STAT3对人前列腺癌细胞生长的抑制作用被引量：21
- 2005年
- 目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达对人前列腺癌细胞PC3及LNCaP的生长抑制作用.方法:针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒,转染PC3及LNCaP细胞;采用Western印迹、Northern印迹等技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响;用MTT法观察重组质粒对PC3及LNCaP细胞体外生长抑制作用;用流式细胞术(FCM)及吖啶橙染色检测重组质粒诱导细胞凋亡.结果:成功构建pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒,并成功转染PC3及LNCaP细胞;Western印迹,Northern印迹结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制STAT3基因表达,抑制率为60%～75%;MTT及FCM结果证明上述重组质粒可显著抑制PC3及LNCaP细胞的体外生长并诱导PC3细胞凋亡.结论:pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3可抑制STAT3在人前列腺癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞的生长,促进其凋亡.
- 高丽芳徐德启邵月婷赵丹赵雪俭
- 关键词：前列腺癌RNA干扰STAT3
- 华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选被引量：2
- 2009年
- 为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因，首先利用λZAP载体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库：即从我国东北疫区（镇赉县）家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫，采用Trizol Reagent提取其总RNA，Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA，反转录合成第1链eDNA及第2链cDNA，用CHROMASPIN-400柱离心层析纯化后，与载体xZAPExpress连接，体外包装后成功获得我国东北疫区华支睾吸虫成虫cDNA表达文库。文库容量为1．5×10^6pfu，重组率为99％，插入片段长度在0．4～2．0kb之间，扩增文库的滴度为1．5×10^10 pfu／mL。然后利用免疫学方法对该cDNA表达文库进行筛选：以自然感染华支睾吸虫的人血清为抗体探针，从2．0×10^5个重组噬菌体筛选强反应原性抗原基因，对筛选出的强反应原性克隆进行测序，利用相关分子生物学软件进行序列分析。共获得41个阳性克隆，测序结果分析表明，这些cDNAs根据其编码的蛋白可分为以下几种，即与来自华支睾吸虫的甘氨酸-2、脯氨酸-2及Cs44抗原高同源的基因及分别与来自Nematostella vectensis的未知蛋白、转录延伸因子及果蝇CG3446基因编码蛋白较低同源性的基因。本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定了理论基础和实验依据。
- 吴秀萍高丽芳张玲邓洪宽刘相叶叶春艳王子见王学林王峰刘明远
- 关键词：华支睾吸虫成虫CDNA文库
- RNAi沉默STAT3基因对人前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用被引量：3
- 2007年
- 目的 探讨pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 采用裸鼠前列腺癌模型模拟siRNA—STAT3基因治疗实验，观察siRNA—STAT3重组质粒的抗瘤疗效，Western blot法检测重组质粒对STAT3基因表达的影响，HE及Tunel染色方法观察肿瘤组织形态及细胞凋亡情况。结果 肿瘤接种后第49天重组质粒组肿瘤体积为（391±56）mm^3，盐水对照组为（1111±182）mm^3，空质粒对照组为（981±169）mm^3，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；重组质粒抑制瘤体内STAT3及pTyr-STAT3基因表达率分别为77％及68％，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。HE染色证实重组质粒组出现大片细胞核固缩、破碎等凋亡征象，Tunel染色显示癌组织出现大量细胞凋亡。结论 pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤的生长，具有良好的应用前景。
- 高丽芳徐德启李峰邵月婷张灵孟艳赵雪俭
- 关键词：前列腺肿瘤基因沉默
- 基于冰核蛋白的狂犬病毒糖蛋白细菌表面展示被引量：3
- 2010年
- 为验证冰核蛋白表面展示系统的可行性与优越性,将编码狂犬病毒(Rabies virus,RV)主要免疫保护性抗原糖蛋白G基因片段融合到丁香假单胞菌冰核蛋白截断的N端,构建表面展示载体pET28a-INP-RVG。转化大肠埃希菌BL21(DE3)后16℃低温诱导表达,SDS-PAGE检测表明在约78 ku和56 ku处有明细的蛋白带出现,大小与理论值相符。完整细胞ELISA实验结果表明,重组蛋白在大肠埃希菌表面成功展示。为进一步研制基于沙门菌的多抗原表位展示性重组疫苗、新型狂犬病疫苗奠定基础。
- 郭恒刘娟李慧萍王学林孙树民张茂林高丽芳徐德启刘明远
- 关键词：狂犬病毒大肠埃希菌
- 一种用于治疗前列腺癌及黑色素瘤的重组质粒
- 本发明涉及一种用于治疗前列腺癌及黑色素瘤的重组质粒，属于生物技术领域，GRIM19表达序列位于载体PcDNA3.1(+)的CMV启动子下，通过KpnI及EcoRI酶切位点相连，U6启动子-siRNA-stat3特异序列位...
- 赵雪俭徐德启高丽芳张灵
- 文献传递
- 沉默survivin抑制喉癌细胞Hep-2生长的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨沉默survivin对喉癌细胞Hep-2生长的影响.方法 将重组质粒（psi-survivin）和阴性对照质粒（psi-scramble）用脂质体包裹转染人喉癌细胞株Hep-2,分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）从mRNA和蛋白水平检测survivin的表达.四甲基偶氮唑蓝（MTT）观察喉癌细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.建立裸鼠喉癌移植瘤模型,将psi-survivin和psi-scramble注射于肿瘤周围,观察其抗肿瘤的效果.免疫组化法和Western blot法检测重组质粒对肿瘤Survivin蛋白表达的影响.末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记技术（Tunel）观察肿瘤细胞的凋亡.结果 psi-survivin不仅在mRNA水平（抑制率为54.4%）,而且蛋白水平也抑制Survivin表达,抑制率为37.0%.MTT证实psi-survivin明显抑制喉癌细胞的增殖,抑制率达71.7%.流式细胞仪结果显示psi-survivin组细胞凋亡明显增加,凋亡率达（13.05±0.56）%（（-x）±s,下同）.体内实验表明,质粒注射后第32天,盐水组瘤体积为（1443.9±230.5）mm3,psi-scramble组为（1348.5±198.4）Rim3,而psi-survivin组为（624.6±188.4）mm3,与对照组相比,差异有统计学意义（t=-5.917,P＜0.01）.psi-survivin能明显抑制肿瘤survivin的表达,抑制率为41.8%,与对照组相比,差异有统计学意义（t=-80.343,P＜0.01）.Tunel染色结果显示psi-survivin组肿瘤组织中出现较多凋亡细胞,而对照组未见凋亡细胞.结论 沉默survivin能明显抑制喉癌细胞Hep-2的生长.
- 文连姬高丽芳汲坤张赫佳富东娜杨景朴徐艳萍陈国威金春顺赵雪俭
- 关键词：基因沉默微管相关蛋白质类喉肿瘤
- 多肽PSA2在制备前列腺癌诊断试剂盒中的应用
- 本发明涉及一种人多肽PSA2在制备前列腺癌诊断试剂盒中的应用，属生物技术领域，可用于前列腺癌的早期诊断及治疗效果的评价。本发明公开的人重组多肽PSA2诊断试剂盒的制备包括下列步骤：抗体制备，抗体标记，包被抗体聚苯乙烯微孔...
- 潘玉琢赵雪俭刘艳波高丽芳张灵赵丽娟梁作文刘喜春于浩计国义何大澄
- 文献传递
- RNAi沉默STAT3基因对人卵巢癌细胞生长的抑制作用被引量：5
- 2011年
- 目的探讨RNA干扰沉默STAT3基因表达对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用。方法针对STAT3mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建重组质粒(pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3),转染SKOV3细胞进行体外研究;采用Western blot、实时聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学技术检测重组质粒对STAT3基因表达的作用;MTT法检测重组质粒对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)及吖啶橙染色检测重组质粒诱导的细胞凋亡。结果 (1)免疫组织化学技术证实卵巢癌细胞株SKOV3及癌组织中STAT3呈高表达;(2)成功构建pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒,并成功转染SKOV3细胞;(3)MTT法证实重组质粒抑制SKOV3细胞的增殖,流式细胞技术证明重组质粒诱导细胞凋亡;(4)RT-PCR与Western blot分析表明,重组质粒在mRNA及蛋白质水平特异的抑制STAT3的表达;(5)STAT3基因表达的下调抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3在人卵巢癌细胞SKOV3中的表达,并抑制肿瘤细胞的生长,促进其凋亡。
- 赵淑华赵凡郑晶莹高丽芳赵雪俭
- 关键词：卵巢癌RNA干扰STAT3
- 光活化的金丝桃素对人前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用被引量：11
- 2004年
- 目的 :探讨光活化的金丝桃素对人前列腺癌细胞 PC3M的抑癌作用。方法 :用生长抑制试验和流式细胞技术观察给予金丝桃素后 PC3M细胞的增殖、细胞周期和凋亡的变化。结果 :不同浓度的金丝桃素在体外可显著抑制 PC3M细胞增殖 (P<0 .0 5 ) ,药物浓度为 0 .5、 1 .0和 2 .0 m g· L- 1 时 ,抑制率分别为 2 1 %、 5 0 %和 91 % ;细胞周期出现 S期阻滞 ,由 S期进入 M2 期的比例为零 ,并诱导 PC3M细胞凋亡。结论
- 高丽芳孟艳赵雪俭刘兴吉
- 关键词：细胞分化
