李刚
- 作品数：55 被引量：92H指数：6
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学金属学及工艺医药卫生生物学更多>>
- 一种制备副猪嗜血杆菌病菌影疫苗的方法及其产品和应用
- 本发明公开了一种制备副猪嗜血杆菌病菌影疫苗的方法及其产品和应用。本发明将突变的噬菌体裂解E基因Eprom（SEQ ID NO：1所示）与pBV220连接后得到高效裂解质粒载体pBV-Eprom。将pBV-Eprom转化到...
- 王春来张艳禾李刚谢芳
- 文献传递
- 氨基酸饥饿状态下(p)ppGpp调节猪传染性胸膜肺炎放线杆生物学特性研究
- 李刚谢芳王春来
- 含鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组火鸡疱疹病毒的构建被引量：4
- 2003年
- 采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因区 ,构建了一株含CIAVVP1、VP2基因表达单元的重组HVT(VP1VP2_rHVT)。体内、体外传代结果表明该重组病毒性状稳定。采用PCR扩增及Southernblot杂交检测 ,证实了CIAVVP1、VP2基因的插入。
- 刘长军王端秦运安鄢明华王笑梅代春铭李刚赵晓岩
- 关键词：鸡传染性贫血病毒重组火鸡疱疹病毒
- 一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原CdtB
- 本发明涉及一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原的鉴定、蛋白基因的分离、克隆以及它编码的蛋白在疫苗中的应用。本发明从副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)(菌种保藏编号：CVCC3361)中分离得到一个...
- 王春来李刚张艳禾谢芳
- 文献传递
- (p)ppGpp合成酶RelA对胸膜肺炎放线杆菌生理适应性影响
- 胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)是猪传染性胸膜肺炎的病原菌,该病是一种高度接触性、致死性的呼吸系统传染病.已有文献报道猪肺部上皮表层液体中除谷氨酸和天冬氨酸外大...
- 李刚谢芳张艳禾王春来
- 抗Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：7
- 2011年
- 为制备抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的DHV-1免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,按常规方法制备MAb,通过间接ELISA方法进行筛选获得4株能稳定传代并分泌抗DHV-1的MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为AF8、BF5、BG6和DB6。Dot-ELISA、间接免疫荧光试验和中和试验等结果表明4株MAbs效价为1∶1 600～1∶3 200,与新型DHV无交叉反应。其中,BF5和BG6具有中和活性。抗DHV-1的MAb的制备为DHV-1的生物学特性研究及其快速诊断方法的建立奠定了基础。
- 李晓军张婷婷孟凡依刘明李刚张云
- 关键词：单克隆抗体
- 一种副猪嗜血杆菌病亚单位疫苗组合物及应用
- 本发明提供一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原组合物，所述组合物包含七种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-7所示。本发明从副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)（菌...
- 王春来李刚张艳禾谢芳
- 文献传递
- PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠免疫保护效果的评价被引量：1
- 2023年
- 为评价猪圆环病毒2型-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗(以下简称二联苗)对小鼠的免疫保护效果,本研究将猪圆环病毒2型(PCV2)cap基因克隆至pMAL-c5X载体中,并通过原核系统表达了重组Cap蛋白(rCap)。通过western blot检测显示原核表达的rCap与PCV2单克隆抗体发生特异性结合,表明rCap具有良好的反应原性。利用本研究室已经纯化并保存的副猪嗜血杆菌(HPS)重组蛋白rCdtB、rAfua和rOPPA,与rCap蛋白以及佐剂ISA201VG混合乳化后制成PCV2-HPS二联亚单位疫苗,疫苗中各蛋白(rCdtB、rAfua、rOPPA、rCap)浓度均为50μg/300μL。将60只6周龄BALB/c小鼠随机均分成免疫组和对照组,采用背部多点注射方式免疫,首免后间隔14 d二免。一免后以及二免后的14 d分别通过颌下采血方法采血,通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的特异性抗体,结果显示,二免后14 d,免疫组小鼠血清中CdtB、OPPA、Afua抗体水平分别与PBS+ISA201VG对照组和免疫之前比较均极显著提高(P<0.0001);利用PCV2免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)抗体检测试剂盒检测各组小鼠血清抗体,结果显示在攻毒前PBS组均未检测到PCV2抗体,免疫组二免后14 d抗体水平为1∶800。二免后14 d,将免疫组和PBS组各随机分为3组(每组10只小鼠)进行攻毒保护试验,结果显示二联苗对PCV2攻毒组小鼠的免疫保护率为80%,对HPS5型HN10株攻毒组小鼠的免疫保护率为70%,与对照组比较差异极显著(P<0.01);对HPS13型ZD12株攻毒组小鼠的免疫保护率为80%,与对照组比较差异极显著(P<0.001)。上述结果首次表明,原核表达的rCap具有良好的免疫原性,PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠具有一定的保护效果,为后续PCV2-HPS二联亚单位疫苗的研究奠定了实验基础。
- 栾慧龚俊赵馨雨危艳武李刚刘长明刘思国张万江王春来
- 关键词：PCV2副猪嗜血杆菌亚单位疫苗
- 一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原AfuA
- 本发明涉及一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原的鉴定、蛋白基因的分离、克隆以及它编码的蛋白在疫苗中的应用。本发明从副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)(菌种保藏编号：CVCC3361)中分离得到一个...
- 王春来李刚张艳禾谢芳
- 文献传递
- 一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌双基因缺失株、其构建方法及应用
- 本发明公开了一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型双基因缺失株，属于细菌基因工程技术领域。本发明公开的一种胸膜肺炎放线杆菌的重组菌APPΔclpPΔapx II C，是采用定向同源重组技术将胸膜肺炎放线杆菌(Act...
- 王春来谢芳张艳禾李刚
- 文献传递
