田淑芳
- 作品数：24 被引量：95H指数：6
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 截短血小板生成素cDNA在中华仓鼠卵巢细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 将具有全长血小板生成素 (TPO)活性的N端截短血小板生成素cDNA(T1 84)作为目的基因 ,在中华仓鼠卵巢细胞 (CHO)中成功表达。方法 将N端截短血小板生成素cDNA克隆入以二氢叶酸还原酶 (DHFR)为筛选扩增基因的 pDC B真核表达载体 ,通过不断提高MTX浓度 ,促进N端截短血小板生成素在CHO细胞中的表达。结果 构建了N端截短血小板生成素cDNA的真核表达质粒 ,并能在CHO细胞中高效表达。结论 N端截短血小板生成素cDNA在CHO细胞中成功表达 ,其产物具有全长TPO的活性。
- 王志云田淑芳楚雍烈阮力
- 关键词：血小板生成素基因表达
- 含S(主蛋白)和前S1(大蛋白)乙肝表面基因工程融合抗原的纯化工艺
- 工艺所属技术领域为生物技术和蛋白质纯化本发明建立了哺乳动物细胞CHO－dhfr－表达的含S和前S1乙肝表面融合抗原的纯化工艺流程:细胞培养原液→离子交换柱层析→疏水柱层析→分子筛柱层析,该工艺乙肝表面抗原S1和前S蛋白回...
- 李军阮力陈红王文田淑芳杨芙蓉宗芳张陵林
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究被引量：16
- 1991年
- 使用本研究室以前构造的双拷贝乙肝病毒重组DNA质粒pSV_2DHBR2-32经改造构成pSV_2DHBR1-32。用此质粒转化CHO-dhfr^-细胞,经克隆、选择、加压增殖建立7个高产HBs-Ag的细胞系,其中首选B43对其生物学性状研究的结果说明,未发现微生物污染,无致瘤性,遗传稳定,纯度满意,核酸杂交试验说明该细胞是整合型,每个细胞约有200个左右的S基因拷贝,转瓶培养研究B43细胞分泌HBsAg的最佳条件为转瓶容积4升,表面积1300cm^2,细胞长成单层后换维持液150ml,其后每48小时收、换液1次,在36℃每小时8转,连续收液60天左右, 每升收液最高产HBsAg为7.5mg。此细胞可用作乙肝基因工程疫苗生产的候选细胞系。
- 任贵方阮薇琴田淑芳梅雅芳阮力杨安道杨芙蓉王申王秀平朱既明
- 关键词：乙肝病毒
- CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响被引量：11
- 2002年
- 为了研究CpG -寡脱氧核苷酸 (CpG -OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组 (CHO细胞 )疫苗 (简称乙肝疫苗 )免疫效果的影响 ,以乙肝疫苗加Al(OH) 3 、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH) 3 与CpG3三种配伍方式 ,通过腹腔、皮下或肌内 3种不同途径免疫Balb/c小鼠 ,观察不同免疫途径和不同配伍的免疫效果。同时又将疫苗与CpG混合后在4℃存放 6个月再免疫小鼠 ,观察CpG的稳定性。结果表明 :① 3种免疫途径中以肌内注射效果最好 ,这在使用CpG的实验组尤为明显 ,在该组肌内免疫的ED50 比腹腔的低了 10倍 ,而诱发的抗体滴度提高了 3倍 ;②疫苗与CpG、Al(OH) 3 联合使用的免疫效果最好 ,在肌内免疫时联合使用的免疫效果比疫苗 +Al(OH) 3 提高 4倍 ,比疫苗+CpG提高 7倍 ;③疫苗 +Al(OH) 3 免疫时 ,表现为IgG1抗体亚型占优势 ,而再加入CpG后则IgG1和IgG2a均升高 ,以IgG2a最显著 ;④疫苗与CpG混合后 4℃保存半年 。
- 王四清田淑芳许洪林郭斐王文陈红王秀平王世峰阮力
- 关键词：CPG乙型肝炎基因重组CHO细胞疫苗免疫效果
- 高效表达乙肝表面S（主蛋白）和前S1（大蛋白）融合抗原的转基因哺乳动物细胞系
- 在乙肝表面抗原PreS1(21－47)基因片段与S基因的第223位相连的基础上，在其下游引入RNA加聚A信号AATAA、乙肝病毒增强子1(En1)和增强子2(En2)，及突变的x基因(mX)构成pCHBSS1G质粒。将p...
- 田淑芳阮力刘文军杨芙蓉宗芳李军陈红王文阮薇琴王秀平
- 文献传递
- 哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S+PreS1融合抗原的理化和生物学性状被引量：9
- 2002年
- 研究了哺乳动物细胞(转基因GdSS1-18细胞系)分泌的乙型肝炎(乙肝)病毒表面S+PreS1融合抗原(SS1)纯品的理化及生物学性状,结果表明:经HPLC柱层析呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS-PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝胶扫描分析其各条带分别各占22 3%、77 7%、0%;West ernblot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明S、PreS1是特异性条带;N-末端的氨基酸序列与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明:与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。
- 田淑芳宗芳陈红王文张陵林王秀平杨芙蓉阮力
- 关键词：分泌乙型肝炎病毒理化性状生物学性状免疫原性
- 二氢叶酸还原酶缺陷型中华仓鼠卵巢细胞偏爱密码子的研究
- 2006年
- 目的研究二氢叶酸还原酶缺陷型中华仓鼠卵巢细胞(CHOdhfr-)的偏爱密码子。方法建立CHOdhfr-细胞高丰度mRNA的cDNA文库,对该文库进行签定以获得合格的编码蛋白质的cDNA序列,统计密码子使用频率并与CUTG数据库中的中华仓鼠比较,同时对所获得的cDNA序列进行对应统计分析。结果获得了50个合格的CHOdhfr-细胞高丰度蛋白的cDNA序列,与中华仓鼠密码子使用频率比较,除了Pro,Arg外,其余氨基酸的最高使用频率的密码子在CHOdhfr-细胞和中华仓鼠中都相同。同时根据对应分析确定了能解释最多变量(14.7%)的第一主成分,确定了22个同义密码子为CHOdhfr-细胞偏爱密码子。结论CHOdhfr-细胞存在自身偏爱的密码子,提示密码子的偏爱性是不同哺乳动物细胞功能差异的因素之一,也为外源基因在CHOdhfr-细胞中通过优化密码子而获得高表达提供了新思路。
- 王志云田淑芳王秀平王世峰李仁清楚雍烈阮力
- 关键词：卵巢密码子
- 应用转瓶和生物反应器培养表达HBsAg的哺乳动物细胞系的比较研究
- 2002年
- 宗芳王文张陵林田淑芳阮力
- 关键词：转瓶生物反应器细胞培养乙型肝炎疫苗乙型肝炎病毒表面抗原
- HBsAg重组DNA转化中国地鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶阴性突变株的细胞染色体变化及致瘤性被引量：1
- 1989年
- 整合了含乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因和dhfr基因的CHO-dhfr^-细胞,其染色体的畸变率和畸变类型都比亲代CHO-dhfr^-细胞高。但转化前后两系细胞的重要特性都未发生变异,即两者的染色体总数无差别,都是20条。两系细胞株接种裸鼠,均未发现有致瘤性。
- 田淑芳任贵方梅雅芳王秀萍王申朱既明
- 关键词：HBSAG
- 乙型肝炎病毒S基因(包括PreS)和C基因在重组痘苗病毒中同时表达被引量：1
- 1993年
- 用重组痘苗病毒作载体,在11k、7.5k启动子控制下表达乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)大蛋白、核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)。S和C基因的同时表达与单独表达其表达水平基本接近。大蛋白不分泌,存在于细胞浆内,SDS-PAGE检测未发现中蛋白和主蛋白。核心抗原亦不分泌,但e抗原可分泌,并且表达量大大高于核心抗原。家兔一次性接种重组病毒后,50％以上能产生有关抗体。
- 张帆田淑芳阮力强东朱既明
- 关键词：乙型肝炎病毒痘苗病毒核心抗原
