王蕾
- 作品数：6 被引量：8H指数：1
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省医学科技创新人才工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人MAGE-12基因的克隆与序列分析
- 2006年
- 目的克隆人MAGE-12基因并测序。方法从人肺癌组织中提取mRNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-12基因片段,对其进行PvuⅡ酶切鉴定;将扩增片段克隆于pGEM-Teasy载体中,转化JM109菌;进行蓝白筛选后,运用pGEM-Teasy质粒的T7/SP6作为引物对重组子鉴定,并进行DNA测序。结果PCR扩增得到944bp的基因片段,经PvuⅡ酶切初步证实为MAGE-12基因;阳性克隆经筛选鉴定连接有目的基因;目的基因测序结果与GenBank比较,结果完全相同,表明靶基因成功插入pGEM-Teasy。结论成功克隆MAGE-12基因,为MAGE-12用于肿瘤的生物治疗做出准备工作。
- 张国俊赵国强王华启张世杰王蕾楚荷莹
- 关键词：MAGE-12肿瘤抗原基因
- RNA干扰人胃癌BGC-823细胞中DNA聚合酶β基因表达的初步研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究RNA干扰DNA聚合酶β（polβ）基因对人胃癌BGC-823细胞生物学行为的影响。方法针对DNApolβ基因序列构建小干扰RNA（siRNA）真核表达载体，用脂质体介导转染人胃癌BGC-823细胞，G418筛选出稳定细胞株；采用荧光定量PCR和Western blot测定各组细胞的DNApolβ mRNA和蛋白表达水平；用流式细胞术和裸鼠体内成瘤检测各组细胞的增殖情况。结果成功构建了针对polβ基因的siRNA表达载体。转染polβ靶向siRNA的BGC-823细胞，其polβ mRNA和蛋白表达水平均明显降低，且载体pRNAT—U6．1-sipolβ2（抑制程度83％）的沉默抑制作用强于载体pRNAT—U6．1-sipolβ1（抑制程度56％）；与无关siRNA对照组、空载体对照组和空白对照组相比，转染pRNAT—U6．1-sipolβ1的细胞G0／G1期比例显著升高，S期比例及细胞增殖速度显著下降（P〈0．05）；转染pRNAT—U6．1-sipolβ2的细胞G0／G1期比例显著降低，S期比例及细胞增殖率显著升高（P〈0．05）。结论靶向DNApolβ的siRNA可以显著抑制polβ的表达；polβ的高表达和近乎完全抑制的超低水平表达都不利于维持细胞的生理状态；通过siRNA将BGC-823细胞中polβ表达沉默到合适的低水平，可能对肿瘤的生长起到抑制作用。
- 赵国强王蕾董子明
- 关键词：DNA聚合酶ΒSIRNA荧光定量PCR
- siRNA沉默DNA聚合酶β基因对胃癌BGC-823细胞增殖的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:观察siRNA沉默DNA聚合酶β(DNA polymerase β,polβ)基因后对胃癌BGC-823细胞增殖的影响。方法:用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测先前构建好的转染不同siRNA载体的各组细胞中polβ mRNA和蛋白质表达水平,用FCM法和裸鼠体内成瘤实验检测各组细胞的增殖情况。结果:转染polβ靶向siRNA的BGC-823细胞中polβ mRNA和蛋白质表达水平均明显降低,且siRNA载体pRNAT-U6.1-sipolβ2(抑制程度83%)的沉默抑制作用强于siRNA载体pRNAT-U6.1-sipolβ1(抑制程度56%);与无关siRNA对照组、空载体对照组和空白对照组相比,转染pRNAT-U6.1-sipolβ1组细胞的S期比例及细胞增殖速度明显下降,而转染pRNAT-U6.1-sipolβ2组细胞的S期比例以及细胞增殖则明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:DNA polβ高表达和近乎完全抑制的超低水平表达都不利于维持细胞的生理状态;BGC-823细胞中polβ表达通过siRNA沉默到合适的低水平,对肿瘤的生长可以起到抑制作用。
- 王蕾董子明赵国强
- 关键词：胃肿瘤DNA聚合酶ΒRNA小分子干扰
- MAGE3 siRNA表达载体的构建及其沉寂作用
- 2005年
- 目的构建针对人MAGE3基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对MAGE3基因的干扰作用。方法设计MAGE3靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPER.neo载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染胃癌细胞BGC823,采用RT-PCR检测MAGE3基因mRNA表达水平的变化。结果把针对MAGE3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pSUPER.neo载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;稳定转染人胃癌细胞BGC823后,RT-PCR检测显示,MAGE3基因的表达水平明显降低。结论成功构建了针对MAGE3基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制MAGE3基因表达。
- 李玲李怀洲王华启王蕾张国俊杨胜利赵国强
- 关键词：RNA干扰
- 老年性耳聋患者内皮祖细胞功能研究
- 背景和目的
耳聋是影响人类生活质量和导致终生残疾的主要问题之一。估计全球听力受损人数大约有2.78亿人,其中2／3在发展中国家。听力损害不仅对患者影响巨大,而且已成为一项严重的社会问题,成年的听力损害已是全球十大...
- 王蕾
- 关键词：老年性耳聋内皮祖细胞细胞集落细胞粘附细胞迁移
- 文献传递
