王景宇
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 聚合酶链式反应变性温度与产物假阴性的研究
- 2009年
- 背景:虽然聚合酶链反应方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速的特点,但同时也发现用聚合酶链反应技术进行生物化学实验和医学检验时,经常会出现假阴性的现象。目的:探讨聚合酶链反应变性温度与产物假阴性关系。设计、时间及地点:观察实验,于2008-03在吉林大学第二医院中心实验室完成。材料:重组质粒pUC-19(含有HBV完整基因组)和大肠杆菌JM109由吉林大学第二医院中心实验室提供。质粒DNA小量抽提试剂盒购自爱思进AXYGEN生物技术(杭州)公司。方法:以含有HBV完整基因组的重组质粒pUC-19为模板进行聚合酶链反应扩增,人为改变聚合酶链反应循环变性温度,观察其对聚合酶链反应扩增结果的影响。主要观察指标:以不加模板的反应体系为阴性对照,以加2倍于正常反应体系的模板反应体系为阳性对照,肉眼在紫外灯下观察不到产物判为阴性。结果:随着变性温度的降低,聚合酶链反应扩增效率降低,产物量明显减少。当变性温度低至85℃及85℃以下,琼脂糖凝胶电泳肉眼观察不到扩增产物。结论:较低的变性温度可导致扩增效率降低甚至假阴性的结果。
- 冉姝华泽钊王景宇
- 关键词：聚合酶链式反应假阴性耗散结构理论
- 引物末端不同碱基对聚合酶链反应产物影响被引量：1
- 2010年
- 目的探索引物末端3′端不同碱基对聚合酶链反应产物的影响。方法以含有乙肝病毒(HBV)完整基因组的重组质粒pUC-19为模板,利用3′端碱基分别为A,T,C,G的下游引物,在相同的上游引物和退火温度下进行聚合酶链反应。结果不同的反应体系在相同退火温度下目的产物和引物二聚体形成不同;A表示上游引物,P表示下游引物;下游引物共计4条,分别用P1、P2、P3、P4表示,其3′端碱基分别为T,G,A,C。上下游引物共4对,分别用AP1、AP2、AP3、AP4表示;退火温度为50℃时,AP1和AP4有明显的扩增产物,AP3扩增产物稍少,AP2产物肉眼观察不到,有非特异性产物生成;退火温度升至55℃时,AP1和AP2有明显的扩增产物,AP4少量扩增产物,P3产物肉眼观察不到,AP1和AP4反应体系引物二聚体生成情况基本相同,AP2和AP3引物二聚体生成较少;退火温度升至62℃时,AP1和AP2有明显的扩增产物,AP4扩增产物稍少,AP3产物肉眼观察不到,可观察到引物二聚体生成稍多。结论3′端不同碱基对聚合酶链反应产物有很大影响。
- 冉姝华泽钊王景宇
- 关键词：聚合酶链反应退火温度碱基对
- 聚合酶链式反应变性及退火温度与产物假阴性之间的关系被引量：1
- 2008年
- 目的探讨聚合酶链式反应(PCR)变性及退火温度与产物假阴性之间的关系。方法以含有HBV完整基因组的重组质粒pUC-19为模板进行PCR扩增,人为改变PCR循环的变性或退火温度,探讨其与产物假阴性之间的关系。结果随着变性温度的降低和退火温度的升高,PCR扩增效率降低,产物量明显减少。当变性温度降低至85℃及85℃以下,退火温度升高至72℃时,琼脂糖凝胶电泳肉眼观察不到扩增产物。结论过低的变性温度和过高的退火温度会导致PCR产物出现假阴性。
- 冉姝周国燕王景宇李红卫华泽钊
- 关键词：聚合酶链式反应退火假阴性
- 聚合酶链式反应(PCR)量热学的实验研究被引量：2
- 2009年
- 聚合酶链式反应(PCR)是一种人工体外扩增特异DNA片段的技术。PCR反应的三个过程都是热过程。本文首次利用差式扫描量热仪(DSC)模拟PCR反应。试验表明PCR反应变性过程是吸热过程;退火和延伸过程是放热过程;并且获得了这些过程的量热学数据。这些研究结果对分析和判断PCR临床检验的假阴性是有用的。
- 冉姝华泽钊王景宇
- 关键词：量热学聚合酶链式反应假阴性
