王小军
- 作品数：13 被引量：35H指数：4
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 前药5-FC联合胃泌素拮抗剂CI-988对转CD基因大肠癌SW480细胞的杀伤作用
- 目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响.方法...
- 李金茂王小军马庆久赖大年鲁建国何显力黎成金
- 关键词：胞嘧啶脱氨酶大肠癌胃泌素胃泌素拮抗剂
- 文献传递
- 胞嘧啶脱氨酶对表达不同水平癌胚抗原的大肠癌细胞株的杀伤作用被引量：4
- 2003年
- 目的:探讨特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对表达不同水平癌胚抗原(CEA)的大肠癌细胞株的选择性杀伤作用。方法:用脂质体法将逆转录病毒载体G1CEACDNa和pCD2分别转导入大肠癌LoVo和SW480细胞株。将转染成功pCD2、G1CEACDNa及未转基因之LoVo和SW480细胞分别接种到BALB/c裸鼠皮下。成瘤2周后,每天腹腔注射500mg/kg的5-FC,观察治疗效果。治疗21d后处死动物,肿瘤标本称重后,以RT-PCR法检测目的基因在肿瘤组织中的表达;显微镜下观察肿瘤病理学变化。结果:目的基因在肿瘤组织中获稳定表达。治疗21d后,在LoVo细胞肿瘤中,G1CEACDNa阳性组和pCD2阳性组肿瘤分别重(60.8±15.3)mg和(410.5±56.3)mg,与未转基因组[(3018.5±453.5)mg]比较均有明显差异(p<0.01,t=4.512; P<0.01,t=3.320);G1CEACDNa阳性组与pCD2阳性组比较,亦有显著差异(P<0.05,t=2.375)。在SW480肿瘤细胞中,G1CEACDNa阳性组和pCD2基因阳性组肿瘤分别重(356.5±23.5)mg和(463.5±56.9)mg,与对照组[(3263.5±450.6)mg]比较有显著差异(P<0.01,t=4.547;P<0.01,t=4.475),但G1CEACDNa阳性组与pCD2基因阳性组之间无明显差异(P>0.05)。
- 黎成金马庆久赖大年鲁建国武永忠王小军李金茂
- 关键词：大肠癌胞嘧啶脱氨酶癌胚抗原5-氟胞嘧啶
- 胃泌素拮抗剂增加CD自杀基因对结直肠癌细胞的杀伤作用被引量：5
- 2003年
- 目的:研究联合应用胃泌素拮抗剂和胞嘧啶脱氨酶(CD)的基因治疗对结肠癌细胞的杀伤作用.方法:脂质体法转染G1CEACDNa至LoVo细胞.用含1mmol/L 5—FC或/和1× 10^(-8)mmol/L CI-988的100ml/L胎牛血清的RPMI1640培养基培养细胞,测生长曲线;MTT法测细胞杀伤率;透射电镜观察细胞的超微结构;流式细胞仪annexin V和PI双重染色行凋亡相关检查;Balb/c裸鼠背部皮下接种 CD^+LoVo细胞,5-FC(500 mg/kg)腹腔注射或/和CI-988(10 mg/kg)灌胃处理20 d,处死裸鼠后肿瘤称重,病理切片HE染色,瘤组织透射电镜检查,结果:用 5—FC或/和 CI-988处理 6d后 CD^+LoVo细胞抑制率分别为90％和 50％,二者合用于 3 d和 6 d抑制率分别为40％和97％;MTT法检测联合应用5—FC和CI-988较单用任何一种处理对 CD^+LoVo 细胞杀伤作用更强,有统计学差异(0.53± 0.05 vs 0.49±0.02,0.38± 0.06,F=29.5536,n=5,P<0.01);电镜和流式细胞仪分别显示CD/5—FC和CI-988结合处理72 h后细胞有凋亡现象;用5-FC(500 mg/kg)腹腔注射和 CI-988(10 mg/ke)灌胃处理荷瘤裸鼠均可出现明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为69.4％和49.5％,二者合用抑瘤较单用任一种处理更明显,有统计学意义(0.42±0.12vs 0.69±0.11,1.22±0.22,F=33.1709,n=5,P<0.05),抑瘤率达81.5％,电镜下见瘤组织内有凋亡小体.结论:联合应用胃泌素拮抗剂CI-988可以提高CD/5-FC对结肠癌细胞的杀伤作用.凋亡相关过程可能是这种协同作用的原因.
- 王小军马庆久赖大年黎成金李金茂武永忠王青
- 关键词：胃泌素拮抗剂CD自杀基因结直肠癌细胞杀伤作用胞嘧啶脱氨酶脂质体法
- 转染自杀基因G1 CEACDNa致SW480细胞死亡的机制
- 2003年
- 目的 研究转染了逆转录病毒载体G1CEACDNa致SW 480肠癌细胞的死亡机制。方法 脂质体法转染G 1CEACDNa至SW 480细胞。行RT PCR间接验证CD基因的表达情况。细胞计数测量生长曲线 ;用含 1mmol/L 5 -氟胞嘧啶 ( 5 FC)的 164 0培养基培养细胞 ,MTT法测生长抑制率和旁观者效应 ;透射电镜观察细胞的超微结构 ;流式细胞仪annexinV和PI双重染色行细胞凋亡检查。结果 RT PCR产物电泳显示在 1.5kb处可见相应的显影条带。MTT比色实验示 1mmol/L 5 FC作用下CD+SW 480细胞在 48h开始生长抑制 ,72 ,96,12 0h抑制率分别约为 3 0 .0 % ,5 0 .0 % ,80 .0 %。电镜下可见凋亡的早、中、晚期细胞及凋亡小体 ,同时可见部分细胞呈坏死改变。流式细胞仪显示 48h开始有少量细胞出现凋亡 ,72 ,96h细胞群凋亡和坏死的比率分别为 2 0 .2 % ,3 0 .7%和 19.6% ,2 1.1%。结论 转染G 1CEACDNa的SW 480细胞给予 5 FC处理后 ,其细胞死亡机制为坏死和凋亡并存 ,细胞凋亡过程的诱导可能是该治疗过程中的旁观者效应。
- 王小军马庆久赖大年黎成金鲁建国李金茂邓琰高德明
- 关键词：SW480细胞自杀基因转染
- 大肠腺癌5-FU门静脉插管化疗临床研究被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨 5 - FU门静脉插管 (port vein infusion,PVI)化疗对大肠腺癌患者的疗效 .方法 将 97例大肠腺癌患者 ,随机双盲分为根治性切除加门静脉化疗组 (治疗组 )和单纯根治性切除术组 (对照组 ) ;对照组住院期间不辅助化疗 ,治疗组在根治术后立即行门静脉插管化疗 ,术后第 1日开始每天持续滴注 5 - FU 1g,肝素 5 0 0 0 U / 10 0 0 m L ,共 7d.两组患者出院后系统辅助化疗相同 ,随访 5 a,观察患者术后转移及生存情况 .结果 治疗组肝转移发生率明显低于对照组(15 .4 % ,36 .4 % ,P<0 .0 5 ) ,其术后 3a生存率 (84 .4 % ,6 0 .4 % ,P<0 .0 5 )、5 a生存率 (71.1% ,5 1.1% ,P<0 .0 5 )显著高于对照组 ,术后局部复发率及其他器官转移率无明显差异 ,两组术后并发症发生率、住院时间无明显差异 .结论 对大肠腺癌患者术后进行门静脉化疗可安全有效地降低肝转移发生率 ,提高生存率 .
- 赖大年黎成金王小军王青高德明李金茂
- 关键词：大肠腺癌5-FU门静脉插管化疗5-氟尿嘧啶
- 转自杀基因CD的LoVo细胞死亡机制的研究
- 2004年
- 目的 研究转染逆转录病毒载体 (G1CEACDNa)的肠癌细胞LoVo株的死亡机制。方法 脂质体法转染G1CEACDNa至LoVo细胞。TRIzol试剂提取总RNA ,行RT -PCR间接验证CD基因的表达情况。用含 1mmol·L-15 -FC的 164 0培养基培养细胞 ,MTT法测细胞生长曲线和旁观者效应 ;透射电镜观察细胞的超微结构 ;流式细胞仪annexinⅤ和PI双重染色行凋亡相关检查。结果 RT -PCR产物电泳显示在 1 5kb处可见相应的显影条带。MTT比色实验示 1mmol·L-15 -FC作用下CD+ LoVo细胞 48h开始生长抑制 ,72h、96h、12 0h抑制率分别约为 3 0 %、5 0 %、80 %。电镜下可见凋亡的早、中、晚期细胞及凋亡小体 ,同时可见部分细胞呈坏死改变。流式细胞仪显示 48h开始有少量细胞出现凋亡 ,72h、96h细胞群凋亡和坏死的比例分别为 2 3 8%、3 5 1%和 2 0 4%、2 6 0 %。结论 转染G1CEACDNa的LoVo细胞给予 5 -FC治疗 ,其细胞死亡机制为坏死和凋亡并存 ,凋亡相关过程的诱导可能是该治疗过程中旁观者效应的重要机制。
- 王小军赖大年马庆久黎成金武永忠王青
- 关键词：LOVO细胞凋亡小体旁观者效应细胞死亡总RNA双重染色
- 围手术期胃癌患者IL-12监测及其意义被引量：1
- 2002年
- 目的 探讨将胃癌患者术前、术后血清 IL - 12水平作为机体自主免疫功能状态的监测指标的可行性 .方法 收集本院 2 0 0 0 - 10 / 2 0 0 1- 12确诊为胃癌的连续住院病例 72例 ,按术后静脉支持治疗方案不同分为两组 ,分别于术前 1d、术后8d采血 .另外取同期消化性溃疡住院患者血清作为对照 .采用双抗体夹心 EL ISA法测定 IL- 12水平 ,用 DKT系列 m Ab间接荧光法由流式细胞仪测定 T淋巴细胞亚群 .结果 胃癌患者术后 8d CD4 + T淋巴细胞亚群测定 ,应用全胃肠外营养(TPN)组为 36 .81± 5 .37,较术前值 32 .11± 6 .5 2明显升高(P<0 .0 5 ) .术前血清 IL - 12水平两组分别为 (44 .8± 2 1.3)pg· m L- 1和 (43.2± 17.9) pg· m L- 1 ,较正常对照组 (10 9.5± 6 2 .9) pg· m L- 1 明显降低 (P<0 .0 1) ,术后 8d两组血清IL - 12水平不同程度升高 ,应用 TPN组为 (73.4± 18.6 ) pg·m L- 1 较术前明显升高 (P<0 .0 1) ,较非 TPN组水平 (5 2 .4±2 2 .4 ) pg· m L- 1明显升高 (P<0 .0 5 ) .结论 胃癌患者血清IL - 12水平较正常人低 ,术后随着机体免疫功能的恢复 ,血清IL - 12水平有所上升 .应用 TPN支持治疗有利于术后机体免疫功能恢复 ,IL- 12水平上升更明显 .血清 IL-
- 王小军赖大年苏建安鲁建国黎成金曹义战梅乐园高德明
- 关键词：胃肿瘤白介素-12胃肠外营养双抗体夹心ELISA法
- 前药5-FC联合胃泌素拮抗剂CI-988对转CD基因大肠癌SW480细胞的杀伤作用被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响。方法:将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中,依次分为实验组1、2、3及对照组,分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养。每天胰酶消化法计数各组4孔,共6d,绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率。按上述分组方法另接种培养4组细胞,于培养72h行MTT法检测490nm处吸光度A值,计算细胞杀伤率。结果:应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97;于培养72h时,实验组1、3细胞杀伤率较对照组有显著性差异(P<0.01);实验组2与对照组无显著性差异(P>0.05);实验组3较实验组1、2有显著性差异(P<0.01)。结论:CD/5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用,联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD/5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应。
- 李金茂赖大年鲁建国何显力王小军
- 关键词：胞嘧啶脱氨酶大肠癌SW480细胞胃泌素胃泌素拮抗剂
- 胃泌素与结直肠癌被引量：2
- 2003年
- 王小军赖大年
- 关键词：胃泌素结直肠癌肿瘤基因
- CD/5-FC系统对结肠癌细胞的杀伤作用被引量：12
- 2003年
- 目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对不同分泌癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)的大肠癌细胞LoVo和SW480的靶向杀伤作用.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G1CEACDNa及非组织特异性逆转录病毒载体pCD2分别转导入大肠癌细胞LoVo和SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后给予前药5-FC进行敏感试验.结果:LoVo-CEACD及LoVo-CD比LoVo对5-FC的敏感性明显提高(P<0.01,t=5.688,n=9;P<0.01,t=3.136,n=9),SW480-CEACD及SW480-CD比SW480对5-FC的敏感性明显提高(P<0.01,t=3.437,n=9;P<0.01,t=3.516,n=9),LoVo-CEACD比LoVo-CD对5-FC的敏感性明显增强(P<0.05,t=2.183,n=9),而SW480-CEACD对5-FC的敏感性小于SW480-CD,SW480-CEACD对前药5-FC的敏感性低于LoVo-CEACD(P<0.05,t=2.504,n=9),转CD基因之LoVo和SW480细胞体外实验均可观察到明显的旁观者效应.结论:组织特异性CD/5-FC系统对LoVo和SW480细胞均有明显的靶向杀伤效果,但对SW480细胞的杀伤作用小于LoVo细胞.
- 黎成金马庆久赖大年鲁建国王小军王青潘伯荣武永忠李金茂
- 关键词：结肠癌细胞杀伤作用脂质体法CD/5-FC系统
