王利勤
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
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- 猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化被引量：1
- 2011年
- 【目的】研究猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化,为了解猪有腔卵泡发育与闭锁的调控机理提供参考。【方法】从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡3类;再按卵泡直径大小分为大卵泡组（〉5 mm）、中卵泡组（3~5 mm）和小卵泡组（〈3 mm）3组,制作完整有腔卵泡的石蜡切片,HE染色后观察其形态学变化。应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况,放射免疫测定法（RIA）分析卵泡液中雌二醇（E2）和孕酮（P4）浓度的变化。【结果】不同大小健康卵泡内均存在少量的凋亡颗粒细胞,卵泡闭锁时颗粒细胞凋亡率显著增加,小卵泡表现尤为明显;晚期闭锁小卵泡中约有60%的颗粒细胞发生凋亡。健康大卵泡组E2浓度显著高于中、小卵泡组,P4浓度与中卵泡组无差异,但显著低于小卵泡组。卵泡闭锁时不同大小卵泡均表现出E2浓度显著下降和P4浓度显著增加。中、小健康卵泡的卵泡液中P4/E2〈5,而健康大卵泡中P4/E2〈1;早期闭锁大卵泡卵泡液中P4/E2〉1,而早期闭锁中、小卵泡中P4/E2在5~15;当P4/E2〉15时,卵泡则处于晚期闭锁状态。【结论】颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因,但卵泡闭锁程度因卵泡大小而异,小卵泡似乎更易发生闭锁;卵泡液中P4/E2可作为判定有腔卵泡质量的一个标准。
- 林鹏飞剧世强罗碧平郝元斌王利勤芮荣靳亚平
- 关键词：有腔卵泡颗粒细胞凋亡孕酮雌二醇
- 猪体细胞克隆胚胎体外发育过程中的凋亡规律被引量：1
- 2010年
- 本试验旨在研究比较猪体细胞克隆胚胎体外发育与凋亡变化规律,探讨其体外发育潜能与细胞凋亡间的关系。将体外成熟培养获得的猪MⅡ期卵母细胞随机分为2组,分别进行体细胞核移植(SNCT)与体外受精(IVF)处理,采用彗星试验(Comet assay)和Real-time RT-PCR技术对体外发育过程中各时期胚胎的细胞凋亡事件及抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达水平进行研究。结果表明,两组在卵裂率上无显著差异(77.6%vs 80.3%,P>0.05),在囊胚发育率上,SCNT组胚胎明显低于IVF组,但无统计学差异(18.9%vs 24.5%,P>0.05);随着胚胎发育,SCNT与IVF组胚胎的凋亡率均呈现不断增加的趋势,Bcl-2 mRNA表达量则逐渐下降;到16-细胞以后,SCNT组胚胎的凋亡率均显著高于IVF组,同时Bcl-2 mRNA表达量均显著低于IVF组(P<0.05)。本试验结果表明,猪克隆胚胎生产效率低下可能与胚胎发育过程中的细胞凋亡有关。
- 剧世强郭慧利王利勤林鹏飞卢庆芮荣
- 关键词：体细胞核移植发育凋亡基因表达
- 小鼠-猪种间体细胞克隆试验被引量：1
- 2010年
- 用3代~5代小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)作核供体细胞,体外成熟培养44 h^46 h、排出第1极体(PbI)的猪卵母细胞去核后,进行小鼠-猪种间核移植操作。Hoechst 33342染色检查去核效果,去核率为84.2%(27/32)。共培养68枚小鼠-猪种间核移植重构胚,其中48枚发生卵裂,卵裂率为70.6%,13枚胚胎发育至8-细胞,发育率达27.1%(13/48)。
- 王利勤郭慧利芮荣
- 关键词：小鼠胎儿成纤维细胞卵母细胞
- 猪卵母细胞第1极体与核相对位置变化对去核率的影响被引量：1
- 2010年
- 为探讨猪受体卵母细胞体外成熟过程中第1极体(pbⅠ)与细胞核相对位置的动态变化规律及其对去核效率的影响,准确判定受体卵母细胞去核"窗口期"提供试验依据。将体外采集的GV(Germinal vesicle)期卵母细胞随机分为3组,分别成熟培养42～44 h、44～46 h、46～48 h,并采用Hoechst33342荧光染色法对成熟过程中pbⅠ与细胞核相对位置进行检测判定。结果显示,随着体外成熟时间的延长,卵母细胞的成熟率呈逐渐增加的趋势,但pbⅠ与细胞核的位置发生偏离的比率逐渐增加,而去核率则表现为逐渐降低的趋势,pbⅠ偏离率与去核率之间呈现一定程度的负相关;体外成熟44～46 h,既能获得较高的卵母细胞成熟率(80.2%),又可以保证理想的去核率(81.2%)。说明延长体外成熟时间所造成的去核率显著降低与pbⅠ发生偏离有关,体外成熟44～46 h是该试验条件下猪受体卵母细胞去核的最佳"窗口期"。
- 剧世强郭慧利林鹏飞王利勤芮荣
- 关键词：体细胞核移植去核
- 小鼠-猪促间体细胞核移植研究
- 随着体细胞核移植(SCNT)研究的深入,种间体细胞核移植(iSCNT)开始受到越来越多的重视,并不断取得进展。大量研究发现,核供体细胞重编程不完全或者错误,可能是导致核移植失败的主要原因。种间体细胞核移植是研究核重编程分...
- 王利勤
- 关键词：体外培养体外发育
- 猪体细胞克隆胚胎体外发育过程中的凋亡规律
- (目的)本试验旨在研究比较猪体细胞克隆胚胎体外发育与凋亡变化规律,探讨其体外发育潜能与细胞凋亡间的关系。(方法)将体外成熟培养获得的猪MⅡ期卵母细胞随机分为2组,分别进行体细胞核移植(SNCT)与体外受精(IVF)处理,...
- 剧世强郭慧利王利勤林鹏飞卢庆芮荣
- 关键词：体细胞核移植发育凋亡基因表达
- 文献传递
- 小鼠—猪种间体细胞核移植研究
- 随着体细胞核移植(SCNT)研究的深入,种间体细胞核移植(iSCNT)开始受到越来越多的重视,并不断取得进展。大量研究发现,核供体细胞重编程不完全或者错误,可能是导致核移植失败的主要原因。种间体细胞核移植是研究核重编程分...
- 王利勤
- 关键词：小鼠体外培养体外发育存活率
