曹文广
- 作品数：29 被引量：95H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>
- 犬假妊娠的防治
- 1995年
- 犬假妊娠的防治曹文广（北京农业大学实验动物研究所，１０００９４）在兽医临床上常会见到犬的假妊娠，如不给予适当治疗，则其假妊娠可能会持续较长时间，或者在恢复后复发，使动物长期处于乏情状况，不能配种繁殖，因此很有必要积极进行防治。一、发生机理在正常情况下...
- 曹文广
- 关键词：犬病假妊娠
- 绵羊多胎主效基因研究进展被引量：12
- 2011年
- 绵羊存在影响多胎性状的主效基因。BMPR-IB的突变体FecB对排卵数的增加具有增强效应,GDF-9的突变体FecGH和FecI及BMP-15的突变体FecXI、FecXH、FecXG、FecXB、FecXL和FecXR均为纯合子不育,杂合子增加排卵数,而GDF-9的突变体FecGE只有纯合子增加排卵数。Woodlands和Lacaune是遗传方式已知的多胎主效基因。Woodlands是与X染色体连锁的母系印迹基因,Lacaune与FecB类似对排卵数的增加具有增强效应。主效基因突变体单拷贝增加排卵数的效应具有差异性,FecB和FecXL的效应最高可增加1.5个,Woodlands最低可增加0.4个。研究绵羊多胎性状主效基因不仅有助于家畜的选种选育,提高绵羊繁殖力,而且为研究哺乳动物的繁殖机制开拓了新的方向。文章综述了绵羊多胎主效基因的来源、定位、表型、作用机制以及我国绵羊品种多胎主效基因的研究现状,旨在为深入研究绵羊多胎主效基因的作用机制及为绵羊多胎品种的选育提供参考。
- 王建起曹文广
- 关键词：绵羊多胎主效基因突变体
- 一种通过精原干细胞获得动物永久转基因的方法、重组质粒和永久转基因的生殖细胞
- 本发明一种通过精原干细胞获得动物永久转基因的方法、重组质粒和永久转基因的生殖细胞，属于基因工程技术领域。本发明所述的通过精原干细胞获得动物永久转基因的方法包括下述步骤：(1)扩增目的基因片段；(2)将扩增的目的基因片段与...
- 曹文广
- 文献传递
- 小鼠睾丸输出管注射法建立转基因小鼠的试验研究被引量：1
- 2013年
- 应用玻璃针将脂质体包裹的质粒pEGFP-C1通过睾丸输出管注射到4周龄昆明(KM)小白鼠睾丸曲精细管内。共注射6只小鼠,其中一只注射后马上做石蜡切片观察转染液注射入曲细精管内的情况,其他5只继续饲养,1周后取1只小鼠培养睾丸的支持细胞,观察是否有荧光出现。4周后,用PCR法检测剩余4只小鼠睾丸组织曲细精管基因组中的外源DNA,4只都显示为阳性。表明用睾丸输出小管注射法将外源基因导入小鼠睾丸是一条简便可行的新途径。
- 王鹤曹文广
- 关键词：小鼠转基因
- CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展被引量：18
- 2015年
- CRISPR/Cas9(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)是最近发现的一种新型的基因组定点编辑技术。CRISPR即成簇的、有规律的、间隔短回文重复序列,是人们在研究大肠杆菌编码的碱性磷酸酶基因时发现的,它原本是存在于细菌和古细菌基因组中含有多个短重复序列的基因位点,能够为自身提供一种特异性免疫保护机制,抵御外来病毒、质粒等遗传元件的入侵。CRISPR系统主要依赖cr RNA(CRISPR RNA)和tracr RNA(Trans-activating chimeric RNA)结合并导向Cas(CRISPR-associated system)蛋白来对外源DNA进行序列特异性降解。目前已经发现了3种类型的CRISPR/Cas系统:Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中Ⅱ型系统组分较为简单,主要依赖的是Cas9核心蛋白,在RNA的介导下,Cas9蛋白能够识别靶序列进行切割造成DNA的双链断裂(Double-strand breaks,DSB)。在此基础上,人们可以对基因组的特定位点进行基因打靶、基因定点插入、基因修复等各种遗传操作。这种新的基因组定点编辑技术比类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)和锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease,ZFN)技术设计更加简单、更容易操作,势必会有更广泛的应用。目前,利用该技术已在多个物种的细胞和个体水平上实现了遗传操作。文中将从CRISPR/Cas9的来源、结构、作用机理方面介绍其研究进展,为开展这一领域的研究工作提供参考。
- 李聪曹文广
- 锌指核酸酶及其应用研究进展
- 2014年
- 锌指核酸酶由锌指和非限制性切割酶两部分组成,锌指能特异性结合基因组双链DNA,非限制性切割酶能造成染色体上双链DNA的断裂,通过机体的修复机制可以使目的基因突变或外源基因插入,进而应用于转基因动物的制备。综述了锌指、切割酶及采用锌指核酸酶制备转基因动物的研究进展,主要包括锌指的发现、结构及与DNA结合时的碱基分布和结合方式,锌指的筛选和设计方法;切割酶的研究进展包括FokⅠ的发现及切割特点,基因修饰后的异源二聚体切割特异性等。
- 李万利李文清王明发王二耀曹文广
- 关键词：锌指切割酶锌指核酸酶显微注射转基因动物
- 转基因小鼠支持细胞体外重编程为诱导多能性干细胞的研究
- 2014年
- 试验旨在研究利用4种特定转录因子将转基因小鼠支持细胞体外重编程为诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)。通过逆转录病毒载体将4种特定转录因子Oct4、Sox2、c-Myc及Klf4导入转基因小鼠支持细胞,同时以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)空载体检测病毒感染情况。感染的支持细胞3d左右表达GFP蛋白,同时细胞开始缩小聚集,失去原有支持细胞形态,逐步形成突起样克隆,16d左右感染的支持细胞不表达GFP蛋白,形成具有典型干细胞特征的iPS细胞。碱性磷酸酶染色表明iPS细胞处于未分化状态;反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测iPS细胞可表达胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)特异性基因;体外悬滴培养可形成拟胚体(embryoid body,EBs),可分化为三胚层来源的多种细胞。
- 杜军慧曹文广
- 关键词：支持细胞
- 一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法被引量：2
- 2012年
- 尝试建立一种简便有效的成年小鼠精原干细胞分离培养及扩增的方法。从单只成年小鼠的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞,并在去除间质细胞、纯化后的支持细胞饲养层上培养与扩增,获得稳定增殖的精原干细胞系。此方法可显著提高建系成功率,保证细胞系的单一基因型,显著降低体外培养精原干细胞的成本。为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。
- 冉竞超曹文广孙红艳王令辛颖张智英
- 关键词：成年小鼠精原干细胞支持细胞间质细胞
- 应用H-Y单克隆抗体鉴定小鼠和家兔胚胎性别被引量：13
- 1993年
- 以C57BL/6雄性小鼠的脾细胞免疫同系雌性小鼠,选择免疫应答反应较好的雌性小鼠4只,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,融合后的杂交瘤细胞经过3次克隆,筛选出了2株能够分泌H-Y抗体的杂交瘤细胞系HYA1和HYA2,其分泌的相应抗体分别命名为HYa1和HYa2。琼脂双扩散试验表明,HYa1和HYa2分别属于IgM和IgG亚类。胚胎间接免疫荧光分析及胚胎细胞毒试验证明,H-Y单克隆抗体能与雄性胚胎表面的H-Y抗原结合,在有补体存在时,能够溶解雄性胚胎。在胚胎免疫荧光分析中,共分析了438枚8细胞期至桑椹期小鼠胚胎,其中特异性荧光胚胎和无特异性荧光胚胎分别占50.5％(219枚)和47.3％(207枚),不易分辨胚胎占2.7％(12枚)。在86枚家兔胚胎中,特异性荧光胚胎和无特异性荧光胚胎分别占48.8％(42枚)和45.3％(39枚),不易分辨胚胎占5.8％(5枚)。小鼠胚胎移植后,接受发特异性荧光胚胎的一组母鼠生了22只小鼠,其雌性率和雄性率分别为18.2％(4只)和81.8％(18只)。而移植无特异性荧光胚胎的一组母鼠生了19只小鼠,其雌性率和雄性率分别为89.5％(17只)和10.5％(2只)。
- 曹文广董伟毛尧伴
- 关键词：单克隆抗体胚胎性别小鼠
- 利血平和氟哌啶醇对奶山羊血浆促乳素水平的影响
- 1990年
- 本试验将20只体况相近、未孕、不泌乳的奶山羊,随机分为利血平1组(R_1)、利血平2组(R_2)、氟哌啶醇组(H组)和对照组,每组各5只羊。R_1组和R_2组分别按每kg体重肌注利血平0.02和0.04mg,H组按每kg体重肌注氟哌啶醇0.1mg,对照组肌注生理盐水。各组于注射前的5分钟和注射后的30分钟、1、2、4、6、8和12小时采血,分离血浆,应用RIA测定血浆促乳素(PRL)水平的变化。结果对照组血浆促乳素水平波动在22.8±5.9～79.831.6ng/ml之间。R_1组和R_2组在注射后的30分钟,血浆促乳素从注射前的20.5±5.6和26.3±8.3ng/ml,分别上升到39.5±11.8和74.9±30.1ng/ml,4小时达到峰值,分别为554.4±149.2和641.6±193.8ng/ml,以后缓慢降低,于注射后的12小时降至对照组水平。H组在注射后的30分钟,血浆促乳素水平从注射前的49.0±17.2ng/ml上升到435.0±71.2ng/ml,1小时达峰值606.2±129.7ng/ml,4小时降到147.9±49.8ng/ml,于注射后12小时降到对照组水平。
- 曹文广王建元
- 关键词：山羊血浆促乳素利血平氟哌啶醇
