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两种不同来源的EBVLMP1基因在Balb/c3T3细胞中的表达被引量：1: 2000年; 【目的】研究来源于鼻咽癌细胞株SUNE1及EBV标准株B95 - 8细胞中两种EBVLMP1基因在真核细胞Balb/c3T3中的表达 ,为进一步研究EBVLMP1基因的核酸疫苗打基础。【方法】将两种不同来源EBVLMP1基因的真核表达质粒 ,经脂质体法转染Balb/c 3T3细胞后 ,用Westernblot、免疫组化及PCR的方法检测不同转染细胞中EBVLMP1蛋白的表达及核酸片段。【结果】PCR结果表明在两种不同来源LMP1转染细胞中均有EBVLMP1基因序列 ,并均能表达 6 3ku的蛋白质 ,经Westernblot和免疫组化结果证实均为EBVLMP1蛋白。【结论】来源于B95 8细胞及鼻咽癌细胞SUNE1的两种EBVLMP1基因均能在真核细胞Balb/c 3T3中表达。; 陈元郭辉玉方丹云晏辉钧; 关键词：鼻咽肿瘤 E-B病毒

H7N9禽流感病毒感染人肺组织体外培养模型的研究: [目的]建立H7N9禽流感病毒感染人肺组织模型,探讨H7N9禽流感病毒感染肺组织模型后的病毒增殖、病理变化和免疫应答状况.[方法]将手术切除的人肺组织清洗后切成组织小块,加入肺组织培养液培养,并连续换液,使肺组织适应体外...; 郭晓兰周俊梅方丹云晏辉钧江丽芳

登革病毒致病与免疫机制的系列研究: 江丽芳魏惠永郭辉玉薛耀华洪帮兴周俊梅高阳晏辉钧曹艳英江振友方丹云曾祥凤; 该项目在细胞水平、分子水平和基因水平上对登革病毒致病与免疫机制进行了系列研究，研究结果初步阐明了登革病毒与人血管内皮细胞及单个核细胞的相互作用；首次证明了人血管内皮细胞表面存在登革病毒特异性受体；首次报道在酵母菌中高效表...; 关键词：; 关键词：登革病毒免疫

SARS冠状病毒的分离培养与鉴定被引量：12: 2003年; 采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用:电镜下可观察到冠状病毒样颗粒:RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100％。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。; 江丽芳赵卫晏辉钧方丹云周经姣龙北国吴义芳周俊梅梁瑜张文炳吴强郭辉玉; 关键词：传染性非典型肺炎 SARS冠状病毒

登革病毒2型prM蛋白的表达及其抗体的ADE作用研究被引量：3: 2013年; 目的建立登革病毒2型(DENV-2)前膜蛋白(prM)的原核稳定表达系统,并制备prM多克隆抗体,研究登革病毒特异性prM抗体的中和作用及抗体依赖性感染增强作用(ADE)。方法应用大肠杆菌表达系统表达全长DENV-2 prM蛋白,经电洗脱法纯化重组蛋白,免疫家兔,制备兔抗prM蛋白多抗;应用空斑减数中和试验(PRNT)和流式细胞术(FCM)分别检测prM兔多克隆抗体的中和作用和ADE效应。结果重组prM蛋白在原核系统可获得高效表达,prM蛋白的表达量占大肠杆菌全菌蛋白的15%左右;其免疫血清经Western blotting法证实为登革病毒特异性prM多克隆抗体,用ELISA法检测效价为1:800 000。PRNT表明,prM抗体对成熟和不成熟DENV-2感染C6/36细胞中和作用有限,最大中和程度分别为49.84%和50.22%;FCM结果表明,prM抗体能在较大的抗体稀释度范围(10-2～10-6)增强成熟和不成熟DENV-2感染,且在10-3稀释度时达到最高峰。结论重组DENV-2 prM蛋白有很强的免疫原性,其诱生的prM抗体对登革病毒仅有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE作用,揭示prM抗体是一种感染增强性抗体。; 冯俊杰罗雅艳周俊梅方丹云曾谷城晏辉钧江丽芳; 关键词：登革病毒2型

登革病毒大片段NS3基因扩增的方法探讨被引量：4: 1999年; 目的：探索一种快速、实用的扩增登革病毒大片段基因的方法。方法：用登革２型新几内亚Ｃ株（ＤＶ２，ＮＧＣ株）的核酸（ＲＮＡ）为模板，研究了在不同条件下（病毒和其变性液的量以及ｃＤＮＡ的浓度等）通过逆转录聚合酶链式反应技术扩增大片段ＮＳ３基因，并对扩增的目的基因用巢式ＰＣＲ进行了鉴定。结果：用大量的或小量的登革病毒培养上清中提取ＲＮＡ的方法在一定条件下均可扩增出大片段ＮＳ３基因。结论：小量登革病毒提取ＲＮＡ扩增大片段ＮＳ３基因法较大量登革病毒提取ＲＮＡ扩增大片段ＮＳ３基因快速、实用。; 晏辉钧江丽芳潘文彤李向群方丹云陈元郭辉玉; 关键词：登革病毒遗传学聚合酶链反应基因扩增

登革病毒感染对T细胞和NK细胞表达细胞因子的影响被引量：2: 2012年; 【目的】本文探讨登革病毒体外感染人外周血单个核细胞后对T细胞和NK细胞表达细胞因子的影响,并初步探讨登革病毒感染引起的免疫效应。【方法】用登革2型病毒(DEN-2)感染健康人外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测登革2型病毒后T细胞和NK细胞的表型及细胞因子的表达水平。【结果】DEN-2感染18 h后,T细胞明显表达CD69、IFN-γ、TNF-α和perforin,NK细胞表达CD69、IFN-γ和perforin;随着感染复数(MOI)增加,表达perforin和IFN-γ的T细胞数及表达perforin的NK细胞数上升;随着感染时间的延长,表达perforin和IL-4的T细胞数及表达perforin的NK细胞数逐渐上升,而表达IFN-γ的T细胞数及表达IFN-γ的NK细胞数逐渐下降;表达perforin的T细胞亚型主要为CD8+T细胞。【结论】发现登革病毒在体外能够诱导T细胞表达CD69、IFN-γ、TNF-α、perforin和IL-4,及NK细胞表达CD69、IFN-γ和perforin,提示T细胞、NK细胞可能在抗登革病毒感染或免疫损伤中起着重要的作用。; 庞贤武田疆曾谷城刘岩方丹云晏辉钧江丽芳; 关键词：登革病毒细胞因子 T细胞

Pr基因置换对登革病毒ADE作用的影响: [目的]构建乙脑pr/登革2型病毒全长cDNA克隆,研究其免疫血清的中和作用、ADE效应及免疫保护性.为进一步阐明登革病毒致病机制及新型疫苗研制提供实验基础.[方法]在前期己构建成功的DENV2全长感染性cDNA克隆的基...; 王颖周俊梅方丹云晏辉钧江丽芳

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晏辉钧