时娜
- 作品数：12 被引量：45H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院阜外心血管医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市重大科技计划项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人细胞骨架调节蛋白基因Nelin N端片段的原核表达被引量：2
- 2003年
- [目的 ]构建Nelin基因N端片段的原核表达载体并表达此蛋白 .[方法 ]设计带有BamHI/EcoRI酶切位点的引物 ,以已构建好的质粒pGEX 5X Nelin为模板 ,用PCR扩增Nelin基因N端片段 ,并用BamHI/EcoRI酶切PCR产物和原核表达载体 pGEX 5X 1,然后用T4DNA连接酶将其连接 ,得到重组表达质粒 pGEX 5X Nelin 1,经双酶切鉴定和测序验证 .重组表达质粒转化大肠杆菌BL 2 1,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,以SDS PAGE进行分析 .[结果 ]成功构建并表达了分子量约为 43KD的NelinN端片段的融合蛋白 .[结论 ]所表达的蛋白为蛋白纯化。
- 尤昕曹慧青时娜王震赵秀文丁金凤孟宪敏
- 关键词：基因表达原核表达抗体
- 论实验室仪器设备的管理被引量：4
- 2007年
- 仪器设备的管理是实验室的重点工作内容之一,如何进行管理,不同实验室有自己独特的方式。本文仅就如何对仪器设备进行分类管理进行了初探。
- 叶珏刘冬青时娜宋莉王来元孟宪敏
- 关键词：分类表
- 专科医院科研平台的建设与管理被引量：6
- 2006年
- 中国医学科学院阜外心血管病医院是集医疗、教学、科研于一身的心血管病专科医院。根据院所发展目标和科研体制改革方案，本着安全、科学、规范、和谐的原则组建了我院的科研平台-中心实验室。在以人为本的理念指导下，探索合理的管理模式，使中心实验室在科学研究、人才培养中发挥双重作用，成为连接临床与基础的桥梁。
- 孟宪敏时娜刘冬青王来元曹也丁
- 心肌特异表达基因p93在四种心血管疾病中血清水平的差异及其意义被引量：3
- 2006年
- 目的研究心肌特异表达的新激酶基因p93在冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)、扩张性心肌病(DCM)、先天性心脏病(CHD)和风湿性心脏病(RHD)中的作用。方法以杂交瘤技术制备p93单克隆抗体;应用酶联免疫吸附测定(ELISA)直接法检测正常人与上述4种疾病患者血清中p93的表达状况及血清浓度的差异。结果成功制备了人p93单克隆抗体,效价达1:100 000;正常人及CAD、DCM、CHD、RHD患者血清中均有p93的表达;正常人血清水平对数值为2．32±0．19;4种疾病患者的p93血清水平(对数值分别为2．46±0．22,2．47±0．20,2．58±0．26,2．49±0．19)均高于正常人(P<0．05)。其中CHD组明显高于正常对照组及CAD组(P<0．05)。结论p93基因与这4种疾病均有密切关系,以CHD尤为突出。推测该基因可能在上述各疾病的发生、发展过程中起着重要作用,但其机制亟待进一步探讨。
- 郑晓静刘冬青时娜曹慧青田野王来元孟宪敏
- 关键词：心血管疾病基因酶联免疫吸附测定细胞凋亡
- 心肌特异表达基因p93的原核表达及鸡卵黄抗体的制备被引量：5
- 2005年
- 目的在大肠杆菌中高效表达心肌特异表达基因p93,以此作为抗原免疫产蛋母鸡,制备抗p93蛋白鸡卵黄抗体(IgY)。方法将p93基因分别插入原核表达载体pGEX-5X-1、pBV220、pET28a(+)中,选取表达量最高的载体进行表达纯化,其产物免疫产蛋母鸡。结果插入pET28a(+)中N端带有His标签的p93表达水平最高,且以包涵体形式存在,从含有pET28a-p93质粒的1L培养的菌液中可获得3mg纯化的p93蛋白。免疫产蛋母鸡,末次免疫后其卵黄抗体最高滴度达到1∶64000,Westernblot结果显示该抗体具有高度特异性。结论此抗体的制备为新基因p93的检测提供了良好的工具。
- 尤昕时娜赵秀文柳明洙刘冬青曹慧青孟宪敏
- 关键词：大肠杆菌蛋黄
- 心肌特异表达基因p93的激酶及丝氨酸结构域在大肠杆菌中的高效表达被引量：3
- 2004年
- 目的 在大肠杆菌中高水平表达并分离纯化心脏特异表达基因p93的激酶与丝氨酸结构域片段。方法 利用DNA重组技术 ,构建C末端带有 6×His标签的p93激酶与丝氨酸结构域(p93 C)片段的原核表达载体pET2 8a p93 C。对诱导表达条件和包涵体洗涤条件优化后 ,用Ni2 +金属螯合吸附层析柱纯化。结果 成功构建了pET2 8a p93 C原核表达载体 ,诱导后摇床转速在 35 0r/min下表达量最高 ,包涵体洗涤在超声条件下较好 ,分离纯化后从 10 0ml菌液中可获得 2 5mg蛋白。结论建立了高效稳定的p93 C原核表达体系以及较好的包涵体洗涤方法。
- 尤昕时娜柳明洙曹慧青刘冬青孟宪敏
- 关键词：原核表达
- 小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养及饲养层制备被引量：3
- 2013年
- 目的建立小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层,用于胚胎干细胞的培养。方法取孕13～15d的昆明种小鼠,分离原代成纤维细胞,在37℃时,用0.25%胰蛋白酶(含0.04%EDTA)消化组织块5min,重复消化多次,24h首次换液,培养3d后传代。采用10μg/mL丝裂霉素C处理胚胎成纤维细胞3h,制备出的饲养层细胞能有效地抑制胚胎干细胞的分裂,且不影响其活力。结果胎鼠分离原代成纤维细胞经10μg/mL丝裂霉素C处理后,细胞仍保持分泌多种生长因子的能力,在10d内既不增殖,也不死亡,能够很好的维持胚胎干细胞克隆的生长。结论该方法制备的饲养细胞层适用于胚胎干细胞的培养。
- 叶珏张燕婉时娜杨子鹤宋莉孟宪敏徐瑞霞
- 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞丝裂霉素C饲养层胚胎干细胞
- 实验室常用计量仪器的使用与维护被引量：7
- 2009年
- 论述了实验室中常用的几种计量仪器:电子天平、酸度计和分光光度计。从理论上阐明了仪器的工作原理和正确的使用方法,分析和讨论了影响这几种计量仪器使用的几种因素,以及仪器的日常维护知识,以此提高实验室计量仪器的管理水平。
- 张燕婉叶珏时娜孟宪敏
- 关键词：计量仪器天平酸度计分光光度计
- 以人为本,构建和谐的规范化实验室被引量：3
- 2006年
- 中国医学科学院阜外心血管病医院心血管病研究所中心实验室是根据院所发展目标和科研体制改革方案而建立的,它是以分子生物学研究为基点,为全院提供实验场所和技术支持的服务指导型科室。本文就如何坚持以人为本,构建科学化、制度化的和谐的现代实验室,并将如何进行规范化管理进行了初步的探讨。
- 孟宪敏时娜曹也丁刘冬青
- 关键词：建设管理
- 人细胞骨架调节蛋白基因Nelin的原核表达与分离纯化被引量：5
- 2006年
- 目的:原核表达并分离纯化人细胞骨架调节蛋白基因Nelin。方法:利用DNAstar软件预测Nelin的B细胞表位,选择Nelin基因B细胞表位较多、特异性最强的片段。用DNA重组技术,将此片段插入原核表达载体pET28a(+),构建C末端带有His6标签的原核表达载体pET28a-Nelin,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,产物用Ni2+金属螯合吸附层析柱纯化。结果:成功构建了pET28a-Nelin表达载体,IPTG诱导后表达分子量约为17000的可溶性蛋白,Nelin-His6蛋白的表达量占菌体总蛋白的18%,经Ni2+金属螯合层析柱纯化,得到了电泳纯的Nelin-His6蛋白。结论:建立了稳定的Nelin基因的表达体系,为其功能研究奠定了基础。
- 尤昕时娜柳明洙曹慧青刘冬青孟宪敏
- 关键词：原核表达分离纯化B细胞表位
