方袁梦梦
- 作品数：4 被引量：10H指数：1
- 供职机构：西南交通大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家级大学生创新创业训练计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 决明聚酮合成酶基因的克隆、表达与生物信息学分析
- 蒽醌是决明中的有效成分,具有降血压、降血脂、保肝和抑菌等功效。文献报道,决明中蒽醌经聚酮途径合成,其中聚酮合成酶是其合成途径的第一个酶。为了研究决明中蒽醌合成机制,从分子水平上调控决明中蒽醌的代谢合成,我们首先测定了决明...
- 方袁梦梦
- 关键词：聚酮合成酶克隆
- 文献传递
- 决明查尔酮合成酶的同源模建和分子模拟对接被引量：1
- 2013年
- 查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是植物中类黄酮生物合成途径的关键酶,其催化对-香豆酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A发生缩合反应。本研究以苜蓿CHS的晶体为模板,利用同源建模构建决明CHS的三维模型。经过动力学优化后,决明CHS的三维模型与苜蓿CHS的结构极为相似,主要由α-螺旋和β-折叠构成,其中有13个α螺旋,占32.82%,15个β折叠,占19.23%,无规则卷曲占47.95%。模型验证结果表明决明CHS的三维模型具有合理的立体化学性质与氨基酸相容性。决明CHS含有两个重要的结构域:对-香豆酰辅酶A结合域与丙二酸单酰辅酶A结合域。决明CHS与对-香豆酰辅酶A、丙二酸单酰辅酶A的结合主要通过氢键与范德华力。决明CHS中Cys164、His303与活性中心的H_2O能够形成电子传递体系,参与对-香豆酰辅酶A形成CHS-对-香豆酰基中间产物。本研究结果为利用此类CHS三维模型研究其催化机理和分子工程改造奠定基础。
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- 关键词：查尔酮合成酶同源模建分子对接决明类黄酮
- 决明查尔酮合成酶全长cDNA的克隆及其原核表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 从决明子叶中提取查尔酮合成酶(Chalcone synthase)总RNA,经过RT-PCR获得查尔酮合成酶cDNA,纯化后与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌Top10,获得了查尔酮合成酶全长基因序列。序列测定表明,查尔酮合成酶全长核苷酸长度为1173 bp,编码390个氨基酸。与GenBank中已发表序列EU430077进行比较,核苷酸同源性为100%。将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/Chalcone synthase,所获重组质粒经过双酶切、PCR和序列测定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为查尔酮合成酶的进一步表达奠定了基础。
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- 关键词：决明查尔酮合成酶克隆原核表达载体
- 决明查尔酮合成酶全长基因序列的克隆与分析被引量：7
- 2013年
- 从决明(Cassia tora)的新鲜子叶中提取基因组DNA作为模板,利用一对特异引物进行PCR扩增,然后克隆测序得到决明查尔酮合成酶(CHS)的基因全长。测序结果表明,决明CHS基因全长为1 766 bp,含有2个外显子和1个内含子。将其提交GenBank,登录号为(JX676773)。决明CHS基因的内含子位于188-765 bp之间,长度为578 bp,内含子的剪切符合GU-AG规律,含有多个酶切位点和顺式调控元件,可能与决明CHS基因的表达调控有关。CHS基因内含子具有多态性,可能是由不同植物存在多样性的生活史与生活环境导致的。决明CHS基因外显子2较为保守,编码几乎所有CHS的功能位点。构建外显子2编码氨基酸序列的NJ系统发育进化树,能够正确反映不同植物的亲缘关系,可用于不同植物的遗传分化和分子进化研究。
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- 关键词：决明查尔酮合成酶内含子基因克隆
