张璐瑜
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤特异性锚定型α-gal模拟表位真核表达质粒的构建及功能研究被引量：2
- 2010年
- 目的构建Survivin启动子调控的、α-gal模拟表位序列和GPI锚定序列融合基因的真核表达质粒,研究该质粒在肺癌A549细胞表面锚定表达α-gal模拟表位及其抗肺癌细胞效应。方法 PCR法扩增gal-GPI融合基因,以pSGFP质粒为载体,构建Survivin启动子调控的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒。将其用脂质体瞬时转染A549细胞后,用荧光显微镜观察GPI锚定表达功能,分别用免疫组化法和Western-blot法对锚定表达的α-gal模拟表位进行定位和免疫反应性分析,并用新鲜人血清对表达α-gal模拟表位的A549细胞进行补体介导的溶细胞效应研究。结果 pSGFP-gal-GPI质粒转染细胞的绿色荧光不均匀分布在细胞膜周围,免疫细胞化学分析表明重组融合蛋白表达在细胞膜上,Western-blot结果表明重组融合蛋白与人IgG有良好的免疫反应性;人新鲜血清对表达该表位的A549细胞具有明显的溶细胞效应。结论成功构建了能在A549细胞膜锚定表达α-gal模拟表位的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒,为肺癌等靶向基因治疗奠定了基础。
- 郭荫广陈全郑毅候艳刘革力张璐瑜
- 关键词：肿瘤特异性真核表达质粒肺癌
- VEGF-SLC融合基因的克隆与原核表达
- 2011年
- 目的构建血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)-次级淋巴组织趋化因子(Secondary lym-phoid-tissue chemokine,SLC)融合基因(VEGF-SLC)的原核表达质粒,表达并纯化重组VEGF-SLC融合蛋白。方法利用GeneSOEing法扩增VEGF-SLC基因,将融合基因插入载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-SLC,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化。结果重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约28 000,诱导5 h表达量最高,约占菌体总蛋白的19%,主要以包涵体形式存在,可与鼠抗人VEGF单抗特异性结合;纯化的重组融合蛋白纯度可达90%以上。结论已成功在大肠杆菌中表达并纯化了重组VEGF-SLC融合蛋白,为进一步研究其生物学活性及其靶向抗肿瘤效应以及开发肺癌等肿瘤的靶向生物制剂奠定了基础。
- 蒋攀陈全郑毅刘革力张璐瑜
- 关键词：血管内皮生长因子类重组融合蛋白质类原核细胞
