张少平
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 豆豉纤溶酶的分子生物学被引量：5
- 2009年
- 豆豉纤溶酶是从豆豉中发现的新型纤溶酶,无论作为抗血栓药物还是预防血栓栓塞性疾病的保健食品,都具有十分重要的开发价值。本文对豆豉纤溶酶的来源、基因同源性、基因克隆和表达、分子改造等分子生物学研究进展进行了综述,并对其研究前景进行了展望。
- 张少平郭勇
- 关键词：豆豉纤溶酶同源性分析
- 豆豉纤溶酶定向进化及突变酶基因的表达研究
- 豆豉纤溶酶(Douchi fibrinolytic enzyme,DFE)是从中国传统发酵食品豆豉中发现的新型纤溶酶,具有开发成新一代溶栓药物和相关功能食品的巨大潜力。本文从产纤溶酶的枯草芽孢杆菌DC12中克隆豆豉纤溶酶...
- 张少平
- 关键词：豆豉纤溶酶定向进化基因表达发酵条件优化
- 文献传递
- 豆豉纤溶酶的定向进化被引量：5
- 2010年
- 为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率(kcat)是野生型的2.57倍.
- 张少平崔堂兵陈亮郭勇
- 关键词：枯草芽孢杆菌豆豉纤溶酶易错PCR定向进化
- 豆豉纤溶酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化(英文)被引量：3
- 2010年
- 豆豉纤溶酶是从豆豉中发现的新型纤溶酶.从枯草杆菌DC-12中提取总DNA,PCR法扩增pro-DFE基因.将pro-DFE基因插入载体pET-32a,构建表达质粒pET-pro-DFE,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌株进行变温诱导表达,重组菌株于37℃培养至OD600为0.6时,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG于24℃进行诱导,SDS-PAGE显示可溶性重组融合蛋白约占重组蛋白的60%.且少量融合重组蛋白发生自切割,形成成熟的豆豉纤溶酶,破菌上清中含有成熟的豆豉溶栓酶,纤溶活性为200IU/mL.重组酶经纯化后比酶活为1280IU/mg.
- 张少平陈亮郭勇
- 关键词：豆豉纤溶酶可溶性表达大肠杆菌
