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S-腺苷甲硫氨酸合成酶的组成型表达、产物纯化及鉴定被引量：6: 2010年; 将大肠杆菌(E.coliK12)S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因克隆至质粒pBR322中,获得的重组质粒pBR322-SAMS转入大肠杆菌JM109菌株,构建了能高效组成型表达SAMS的重组菌E.coliJM109(pBR322-SAMS)。将重组大肠杆菌破碎后上清液经20%～40%硫酸铵分级盐析、Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析和Q-Sepharose Fast Flow离子交换层析,即可得到纯度提高5倍,比活为48.7μ/mg的SAMS,三步纯化的总回收率为62%,纯度达到92%。SAMS表达量为1176μ/L,占到菌体可溶性总蛋白的20%。重组酶的最适反应pH为8.5,4℃下在pH7.5的缓冲液中保温10h酶活性几乎不改变。重组酶反应的最适温度为55℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃。重组酶的KmL-Met为0.22mmol/L,VmaxL-Met为1.07mmol/(L.h),KmATP为0.52mmol/L,VmaxATP为1.05mmol/(L.h)。; 田林奇牛卫宁左晓佳钦传光; 关键词：S-腺苷甲硫氨酸合成酶大肠杆菌组成型表达纯化酶学性质

固定化重组大肠杆菌催化合成S-腺苷甲硫氨酸: S-腺昔甲硫氨酸((SAM)被广泛地用于肝炎、抑郁症以及关节炎等疾病的治疗。在该研究中，从大肠杆菌中克隆出SAM合成酶基因，构建了重组大肠杆菌。对重组菌表达SAM合成酶的条件进行了研究，结果表明在30℃下培养12h，该重...; 牛卫宁左晓佳钦传光; 关键词：S-腺苷甲硫氨酸药物合成固定化细胞生物催化

细胞穿膜肽作为药物载体的研究进展被引量：25: 2010年; 生物大分子在许多疾病的治疗中发挥着重要的作用,但由于细胞膜的天然屏障作用,只有分子质量小于600Da的分子才能穿透细胞膜进入细胞内。这使得一些有治疗价值但无细胞膜穿透性的分子在细胞生物学、药学等领域的应用受到极大的限制。近年来发现的一些具有细胞穿透功能的短肽(少于30个氨基酸)即细胞穿膜肽(CPPs),能够有效地将蛋白质、多肽、核酸片段等以多种方式导入多种哺乳动物细胞,其转导效率高且不会造成细胞损伤。CPPs的发现为生物大分子在细胞生物学、基因治疗、药物体内转运、临床药效评价以及细胞免疫学等研究领域等均具有良好的应用前景。本文就CPPs的种类特点、内化机制、应用及其存在的问题进行讨论和评述。; 任锦钦传光徐春兰王秋雨左晓佳

固定化E.Coli JM109(pBR322-MAT)细胞催化合成S-腺苷蛋氨酸被引量：9: 2009年; 通过PCR从大肠杆菌(E.Coli-K12)基因组DNA中扩增出甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)基因,构建了能高效表达MAT的重组大肠杆菌E.ColiJM109(pBR322-MAT)。选择海藻酸钙(CA)凝胶包埋固定化重组大肠杆菌,研究发现最佳ρ(CA)为20g/L的水溶液,最适细胞包埋量为0.15 g(湿细胞)/mL(凝胶),连续反应5批次后固定化细胞酶活力为初始最高酶活力的91%。对于固定化细胞催化合成SAM,在最佳条件下底物ATP的转化率超过95%。; 牛卫宁左晓佳尚晓娅丁焰钦传光; 关键词：固定化细胞 S-腺苷蛋氨酸重组细胞全细胞催化

S-腺苷甲硫氨酸制备方法的研究进展被引量：9: 2009年; S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是生物体内重要的生理活性物质,参与多种生化反应,临床上被广泛用于治疗抑郁症、神经紊乱、肝病、关节炎等。综述了SAM制备方法的研究进展,述及的SAM制备方法包括化学合成法、微生物发酵法、体外酶促合成法以及全细胞催化法。; 牛卫宁左晓佳王丽衡钦传光; 关键词：S-腺苷甲硫氨酸微生物发酵法全细胞催化

大肠杆菌细胞固定化方法研究进展被引量：2: 2010年; 固定化大肠杆菌细胞因其低成本、易操作等优势,越来越多地应用于催化合成批量产物。综述了常用的大肠杆菌细胞固定化方法、固定化载体材料的选择原则,并列举了国内外在药物生产、工业废水处理、能源开发以及大宗化学品制备等方面应用固定化重组大肠杆菌细胞的概况。; 左晓佳牛卫宁田林奇钦传光; 关键词：大肠杆菌固定化细胞全细胞催化

丙烯酸/甲基丙烯酸甲酯低温快速共聚反应体系的研究被引量：3: 2009年; 比较了常规乳液聚合和无皂乳液聚合对丙烯酸(AA)/甲基丙烯酸甲酯(MMA)共聚物性能的影响,探讨了各种氧化还原引发体系、氧化剂用量、单体配比、搅拌速率以及还原剂的滴加速率对单体转化率的影响。研究结果表明,采用无皂乳液聚合法,以过硫酸钾(KPS)/亚硫酸氢钠(SHS)为氧化还原引发体系,当引发反应温度为50℃、m(KPS)∶m(SHS)=1∶2、氧化剂KPS用量为0.15～0.25g、m(MMA)∶m(AA)=10∶1、搅拌速率为450r/min和还原剂SHS溶液滴加时间为30min时,AA/MMA无皂自乳化聚合反应能够快速顺利进行,并且能获得单体转化率较高、性能较好的稳定乳液。; 徐庶左晓佳周桓张秋禹; 关键词：氧化还原引发剂无皂乳液聚合转化率

重组大肠杆菌全细胞催化合成S-苷甲硫氨酸被引量：11: 2009年; 从大肠杆菌(E.ColiK12)基因组DNA中克隆出甲硫氨酸腺苷转移酶基因,构建了能高效表达甲硫氨酸腺苷转移酶的重组大肠杆菌E.ColiJM109(pBR322-MAT)。将重组大肠杆菌细胞用于催化合成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的研究中。实验发现,用φ(甲苯)=2%的水溶液对重组细胞进行通透化处理后,能大幅提高SAM的产率。探讨了底物浓度、温度、pH、反应时间以及菌体密度对反应转化率的影响。最佳反应条件为:底物浓度(ATP)30 mmol/L,反应温度35℃,pH=7.0,反应时间8 h,细胞密度80 g湿细胞/L反应液。在此条件下,底物ATP的转化率超过95%。; 牛卫宁左晓佳丁焰尚晓娅钦传光; 关键词：全细胞催化 S-腺苷甲硫氨酸重组细胞医药与日化原料

一种促进微生物全细胞催化合成腺苷甲硫氨酸的方法: 一种促进微生物全细胞催化合成腺苷甲硫氨酸的方法，涉及利用微生物全细胞催化合成高价值化合物的技术领域。技术特征在于：以能表达腺苷甲硫氨酸合成酶的重组大肠杆菌细胞作为酶源，通过向催化合成SAM的反应体系中直接加入低浓度的有机...; 牛卫宁钦传光左晓佳丁焰尹春丽尚晓娅王莉衡; 文献传递

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左晓佳