孙燕燕
- 作品数：13 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技部农业科技成果转化资金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 胶体金免疫层析试纸条快速检测鸭坦布苏病毒方法的建立被引量：4
- 2014年
- 为建立一种快速检鸭坦布苏病毒检测方法,应用胶体金免疫层析技术,研制了一种鸭坦布苏病毒免疫胶体金快速检测试剂条。将羊抗兔IgG、兔抗鸭坦布苏病毒多克隆抗体和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和胶体金结合垫上,包被后的硝酸纤维素(NC)膜、样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试剂条。结果表明,该试纸条与禽流感和新城疫无交叉反应。本试验研制的免疫层析试纸条试纸条方法简单,操作简便,进一步研究可以用于临床诊断。
- 朱玉婵孙继国林密孙燕燕蒋韬朱启运
- 关键词：胶体金
- 一种口蹄疫O、A、AsiaⅠ型抗体多重管式化学发光检测试剂盒
- 本发明涉及一种口蹄疫O、A、AsiaⅠ型抗体多重管式化学发光检测试剂盒，属于抗体检测技术领域。本发明所述试剂盒包括口蹄疫O型抗体的化学发光反应体系和血清标准品，口蹄疫A型抗体化学发光反应体系和血清标准品，口蹄疫AsiaⅠ...
- 林密蒋韬包艳芳马军武陈夏辉李峰松李昕孙燕燕杨光何继军
- 文献传递
- O、A、Asia 1型口蹄疫病毒胶体金定量检测免疫层析方法的建立被引量：3
- 2021年
- 旨在建立口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗原血清型的快速分型和定量的检测方法,利用双抗体夹心法,将口蹄疫病毒的兔抗及豚鼠抗体作为标记胶体金与NC膜检测带的原料,分别制备出检测O、A、Asia 1血清型的3种层析试纸卡。通过对标定的抗原标准品146S检测,拟合出定量标准曲线。免疫层析方法的质量验证通过特异性、敏感性、重复性及与蔗糖密度梯度法(sucrose density gradient, SDG)的相关性进行评价。结果显示:建立的快速定量检测方法,3种血清型口蹄疫病毒间无交叉反应,同时与其他非口蹄疫病毒,如塞内卡病毒A型(SVA)、猪水疱病病毒(SVDV)、猪水疱性口炎病毒(VSV)无非特异反应;敏感性研究,对O、A、Asia 1型病毒的最低检出量分别为0.567、0.693、0.219μg·mL^(-1),拟合的3条标准曲线的线性相关系数R~2>0.97,新建立方法与蔗糖密度梯度法检测结果的相关系数均>0.9, 3种层析试纸卡的变异系数均小于10%。综上表明,建立的口蹄疫O、A、Asia1型病毒胶体金免疫层析定量检测试纸卡方法,可以用于口蹄疫病毒抗原快速鉴别、血清分型与146S定量检测。
- 李昕孙燕燕林密陈夏辉李峰松包艳芳杨光蒋韬
- 关键词：口蹄疫病毒胶体金免疫层析
- 胶体金免疫层析试纸条快速定量检测Asia 1型口蹄疫病毒含量方法的建立被引量：3
- 2014年
- 采用胶体金为标记物制备了快速定量检测Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫层析试纸条,拟合检测曲线,用金标分析仪进行定量检测。应用实验室与田间的样品检测证实其有较好的敏感性和特异性。对Asia 1型FM—DV抗原定量检测可以在15 min内完成,灵敏度为0.78μg·mL^(-1),线性范围在0.78~7.84μg·mL^(-1);变异系数在0.2%~5%;回收率在91%~102%,证明定量检测、准确度高。结果表明,本研究建立的定量检测Asia 1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法能简便、廉价、快速、灵敏、特异、准确地定量检测样品中的Asia 1型口蹄疫病毒。
- 朱玉婵林密孙燕燕孙继国蒋韬
- 关键词：ASIA胶体金
- Pt-Pd合金纳米颗粒标记口蹄疫A型病毒抗体检测的免疫层析方法被引量：1
- 2021年
- [目的]为建立一种新型、高灵敏度,可直观与定量分析的快速检测方法,本研究创新使用具有氧化还原酶活性的合金纳米材料,将其作为标记物制备免疫层析试纸。待反应结束,使用TMB显色剂对免疫反应进行级联放大,可以显著提高检测的灵敏度,不仅可直观判断,也可精确定量分析,这为免疫层析技术标志物筛选与敏感性提高开拓了新的思路与方法。[方法]采用超声水浴法,通过抗坏血酸(AA)还原K2Ptcl4和Na2Pdcl4成功出制备Pt-Pd合金纳米颗粒,将其用于标记口蹄疫A型纯化抗原FMDV-146S,作为捕获抗原纳米标记物,再将纯化的A型表达抗原及其抗体(FMDV-146S-Ab)包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线(T线)和质控线(C线),经条件优化,建立口蹄疫A型病毒抗体Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条检测方法。对该免疫层析检测技术进行方法学考核,检测结果定量分析并建立标准曲线,同时与LPB-ELISA进行结果比对。[结果]该试纸条可在10 min内完成定性和定量检测,定量检测灵敏度为1:28/test,线性范围1:26/test—1:29/test;检测A型FMDV阳性血清,敏感性为98%,检测FMDV阴性血清、O型和Asia 1型的FMDV阳性血清以及其他动物常见病毒病阳性血清,特异性为94.8%;该试纸条重复检测效果良好;与OIE推荐LPB-ELISA法比较,相关性好,相关系数为0.9112。[结论]本研究开拓采用Pt-Pd合金纳米颗粒为标记物建立免疫层析方法,并首次应用于口蹄疫病毒抗体检测,结果证实其具备较高灵敏度,相比胶体金灵敏度可提高24倍,同时具备可操作性与重现性。该研究是快速免疫层析技术的新尝试,为合金类纳米材料应用提供新的思路,未来具有实践应用前景。
- 孙燕燕李昕林密李峰松包艳芳陈夏辉杨光曾巧英蒋韬
- 关键词：免疫层析法过氧化物酶
- 口蹄疫病毒定量检测试纸卡及其制备方法
- 本发明涉及口蹄疫病毒定量检测试纸卡及其制备方法，属于口蹄疫病毒快速检测技术领域。本发明所述试纸卡包括卡壳、PVC衬板、吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫，所述金标垫上标有兔抗O型、A型或亚洲I型口蹄疫病毒抗体；所述硝酸...
- 蒋韬林密李昕孙燕燕李峰松包艳芳陈夏辉杨光
- 文献传递
- 一种免疫层析试纸及其制备、使用方法
- 本发明公开一种具备氧化还原酶活性的、由合金纳米粒子为生物标记物的免疫层析试纸，以及这种试纸的制备及使用方法。本发明试纸是在底板依次线性排列地设置样品吸收垫、包被有Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料构成的连接垫、...
- 蒋韬宋阳孙燕燕刘湘涛林跃和
- 文献传递
- A型口蹄疫病毒抗体金标检测试纸条的研制被引量：7
- 2016年
- 为快速、便捷地检测A型口蹄疫病毒(FMDV)抗体,将胶体金颗粒与口蹄疫A型疫苗株146S病毒粒子(FMDV-146S)结合,作为金标抗原(g FMDV-146S),与其抗体(FMDV-146S-Ab)分别作为检测带(T带)与质控带(C带)组装试纸条,通过检测已知各型FMDV阴性、阳性血清,水疱性口炎(VS)、猪水泡病(SVD)和羊传染性脓疱(CE)的阳性血清,验证其敏感性、特异性与稳定性;同时平行用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)方法进行对比检验。结果显示,该试纸条检测抗体效价最低达1∶128;SVD、VS、CE阳性血清及FMDV阴性血清的检测结果均为阴性,A型FMDV阳性血清100%显阳性,O型和Asia 1型的FMDV阳性血清仅出现10%的阳性率;该试纸条于4℃保存10个月,不同批次间、同一批次内的重复性检测结果差异不显著(P>0.01);与LPB-ELISA检测结果的相关性良好,以此建立该试纸条的半定量比色卡。本试验制备的A型口蹄疫抗体金标检测试纸条具有较好的灵敏度、特异性、稳定性,能够准确评价A型口蹄疫疫苗的免疫效果。
- 孙燕燕马米玲周广青林密曾巧英蒋韬
- 关键词：口蹄疫病毒胶体金
- 一种基于p30蛋白单域抗体的非洲猪瘟病毒管式化学发光免疫分析检测试剂盒及应用
- 本发明提供了一种基于p30蛋白单域抗体的非洲猪瘟病毒管式化学发光免疫分析检测试剂盒及其应用，属于体外诊断产品技术领域。本发明提供的试剂盒包括磁微粒混悬液、酶标抗体、稀释液、校准品、质控品、浓缩洗涤液和发光底物。本发明所述...
- 杨吉飞林密包艳芳殷宏何莉刘志杰李涛善关贵全潘晓乐赵亚茹蒋韬李昕孙燕燕杨光
- 口蹄疫A型病毒不同毒株抗原反应性
- 2021年
- 旨在对口蹄疫A型病毒(FMDV)3种毒株制备的不同抗原进行反应性比较分析,筛选最合适的免疫学诊断抗原,为进一步研究利用该抗原进行血清学诊断奠定基础。分别选择AF/72毒株、Re-A/WH/09毒株制备纯化146S抗原和VP1表达蛋白以及A/GD/MM/13毒株VP1表达蛋白作为备选抗原,利用间接ELISA检测方法与胶体金免疫层析检测方法(GICA),对100份背景清晰的田间样本血清进行平行检测,比较不同抗原的反应性。结果显示,A/GD/MM/13株抗原活性最低,间接ELISA方法检测AF/72株、Re-A/WH/09株纯化146S抗原和VP1表达蛋白对于A型阳性血清敏感性分别为90.00%、86.67%、78.33%和76.67%,与O型、Asia1型阳性血清和阴性血清特异性结果分别为95.00%、87.50%、75.00%和70.00%。GICA方法检测AF/72株、Re-A/WH/09株纯化146S抗原对于A型阳性血清敏感性分别为95.00%和83.33%,与O型、Asia1型阳性血清和阴性血清特异性结果分别为92.50%和87.50%。本研究通过FMDV-A型不同毒株抗原反应性的比较试验证实,AF/72株纯化146S抗原在间接ELISA和GICA 2种方法中均显示更好的敏感性、特异性,且在纯化过程中,收获量更多、浓度更高,为最合适的诊断用抗原,所建立的诊断方法可获得满意的检测结果。
- 孙燕燕陈夏辉李昕林密李峰松贺华丽包艳芳杨光蒋韬
- 关键词：抗原反应性间接ELISA免疫层析法
