姚馨萦
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院病原生物学教研室更多>>
- 发文基金：高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫虫卵SjE16、SjPPIase和SjRobl基因的真核表达及其在诊断中的应用被引量：2
- 2013年
- 目的真核表达日本血吸虫虫卵蛋白,并评价其在血吸虫病免疫学诊断中的作用。方法提取日本血吸虫虫卵RNA,逆转录后获得cDNA。PCR扩增日本血吸虫虫卵特异性或高表达基因SJCHGC01695(SjE16)、SJCHGC00856(SjIMA8)、SJCHGC06249(SjTOR)、SJCHGC06324(SjP40)、SJEFTD02(SjSLP)、SJCHGC06679(SjP-PIase)和SJCHGC06529(SjRobl),亚克隆至真核表达载体pPIC9K。重组质粒电转至毕赤酵母GS115菌株后,甲醇诱导目的蛋白表达。镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化获取重组蛋白后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)对其进行分析鉴定。以血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl单用,3个重组蛋白两两伍用,及全部伍用作为包被抗原,ELISA法检测血吸虫感染小鼠血清、急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者血清中相应抗体的反应性。结果PCR扩增获得7个日本血吸虫虫卵高表达基因,经酵母重组表达和Ni-NTA亲和层析纯化后成功获得3个重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果显示,所获得的重组蛋白为目的蛋白。ELISA检测结果显示,血吸虫感染小鼠血清和血吸虫病患者血清中均可检测出被SjE16、SjPPIase和SjRobl识别的特异性IgM和IgG抗体。在急性血吸虫病患者中上述3种抗原IgM的检出率分别为80%、60%和80%,IgG检出率分别为40%、80%和70%。伍用组中,SjE16和SjRobl伍用抗原,检测急性血吸虫病患者血清中IgM抗体的敏感性为100%,高于其单独为抗原的敏感性。结论获得的3个日本血吸虫虫卵蛋白(SjE16、SjPPIase和SjRobl)均具有血吸虫病诊断的潜能,其中SjE16和SjRobl伍用抗原可提高急性血吸虫病诊断敏感性。
- 陈清吴琛耘冯艳吴健桦姚馨萦徐大刚王兆军
- 关键词：日本血吸虫真核表达免疫学诊断
