周华华
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金云南省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- <sup>99</sup>Tc<sup>m</sup>-（HYNIC-PI）（tricine）（TPPTS）的制备及其在正常和荷瘤裸鼠体内分布和显像研究
- 目的：探究99Tcm标记的乳腺癌特异性多肽PI (CASPSGALRSC)的制备方法并测定其体外稳定性和生物活性；研究标记物在正常昆明小鼠和荷人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠的体内生物分布情况；并结合单光子发射计算机断层...
- 周华华
- 关键词：锝同位素标记显像
- 乳腺癌特异性多肽介导的HSV-TK/GCV系统的构建及其靶向杀伤效应被引量：2
- 2011年
- 目的:研究乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外靶向杀伤作用。方法:以PCR从质粒pORF-HSV-TK中扩增目的基因PI-TK,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-PI-TK载体,转化宿主菌,经IPTG诱导表达PI-TK融合蛋白,利用His-Tag对其进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白。将不同质量浓度的PI-TK融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,联合更昔洛韦(ganci-clovier,GCV)作用后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖。结果:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-PI-TK,获得纯化的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白表达正确。单独PI-TK融合蛋白不影响MDA-MB-231细胞的形态和增殖,但PI-TK融合蛋白联合GCV能剂量依赖性靶向抑制MDA-MB-231细胞的增殖,200μg/ml PI-TK+10 mg/LGCV作用的抑制率达(68.9±7.57)%;PI-TK联合GCV抑制MDA-MB-231细胞的IC50值为152.64μg/ml。上述各作用对MDA-MB-435细胞均无影响(P<0.05)。结论:乳腺癌特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统可靶向杀伤MDA-MB-231细胞。
- 耿计伟董坚刘为青高嫦娥熊秋霞缪延栋周华华李秋恬李臣
- 关键词：MDA-MB-231细胞靶向性
- 乳腺癌特异性多肽介导生物大分子体内外效应
- 2012年
- 探讨乳腺癌特异性多肽PI携带外源性生物大分子靶向抗肿瘤的作用.将分离纯化获得的融合蛋白PI-EGFP与靶细胞MDA-MB-231体外共培养,探讨融合蛋白与靶细胞的结合能力;将此融合蛋白经尾静脉及肿瘤局部注射入荷瘤裸鼠体内,探讨其在肿瘤部位的聚集程度;利用分子克隆技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-pI-tk,诱导表达、分离纯化、鉴定获得的融合蛋白PI-HSV-TK,将不同浓度的融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,经更昔洛韦(ganciclovir,GCV)作用后,探讨PI-HSV-tk对细胞的靶向杀伤效应.荧光显微镜下观察,在靶细胞内可检测到绿色荧光信号,经尾静脉及局部注射融合蛋白PI-EGFP后,在不同组织器官可见不同强度的荧光信号,在尾静脉注射组的肾脏和肿瘤部位可检测到荧光信号,而局部注射组仅在肿瘤部位可检测到;成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-pI-tk;分离纯化获得高效表达的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定融合蛋白的表达正确;CCK-8法及流式细胞仪检测显示,GCV对转导融合蛋白的MDA-MB-231细胞有杀伤作用,IC50值为152.64μg/mL.乳腺癌特异性转导多肽能携带生物大分子进入靶细胞,并携带具有杀伤效应的物质,使其发挥靶向治疗作用,为进一步探讨该多肽作为靶向性载体奠定实验基础和理论依据.
- 耿计伟高嫦娥刘为青熊秋霞缪延栋周华华董坚
- 关键词：靶向治疗
- 细胞穿膜肽的研究进展与前景展望被引量：6
- 2012年
- 细胞穿膜肽(CPPs)是具有细胞膜穿透能力的小分子多肽,能携带大分子生物活性物质进入哺乳动物细胞,既不影响转导物质的生物活性且不会损伤细胞,其具体穿膜机制尚在研究,但并不影响其在生命科学研究领域中的应用。在穿膜肽研究的基础上,人们发现了包括肿瘤归巢肽,线粒体穿透肽,可活化细胞穿膜肽,嵌合肽,抗微生物肽等具有高效穿膜活性多肽片段,其作用更加广泛,他们给药物载体研究带来了机遇。然而,由于CPPs作为药物载体的应用过于复杂和难于控制,存在靶细胞摄取效率低及体内吸收、分布、生物利用度和毒性等方面问题,给其进一步研究和应用带来挑战。
- 周华华董坚
- 关键词：穿膜肽
- 99Tcm-（HYNIC-PI）(tricine)（TPPTS）的制备及其在正常和荷瘤裸鼠体内分布和显像研究
- 目的：探究99Tcm标记的乳腺癌特异性多肽PI (CASPSGALRSC)的制备方法并测定其体外稳定性和生物活性;研究标记物在正常昆明小鼠和荷人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠的体内生物分布情况;并结合单光子发射计算机断层...
- 周华华
- 关键词：锝同位素标记显像
- 结肠癌细胞CDH1基因启动子甲基化对E-上皮钙黏素和β-连接素表达的调控作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察结肠癌细胞中上皮钙黏素基因（CDH1）启动子甲基化对上皮钙黏素（E—cadherin）和β-连接素（β—catenin）表达的影响。方法通过甲基化特异性PCR（MSP）、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测DNA甲基化抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）干预前后人结肠癌HT-29细胞株CDH1基因启动子甲基化状态及E—cadherin mRNA的改变，并运用免疫荧光标记及激光共聚焦观察E—cadherin和β-catenin在细胞内的表达及分布。结果（1）HT-29细胞在用药前CDH1基因启动子甲基化扩增阳性，非甲基化扩增阴性，用5-Aza-CdR处理后CDH1基因启动子甲基化扩增阴性，非甲基化扩增阳性；（2）5-Aza—CdR处理前细胞RT—PCR不能扩增出E—cadherin mRNA特异性条带，5-Aza—CdR处理后则可检测到E—cadherinmRNA转录，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关，平均灰度比值1μmol／L时为0．491±0．011，2μmol／L时为0．568±0．013（P〈0．05：（3）5-Aza-CdR处理前细胞未见E-cadherin表达，13-catenin主要表达于细胞质及细胞核中，5-Aza—CdR处理后在细胞膜可见E—cadherin及-catenin表达。且随着5-Aza—CdR诱导E-cadherin的表达，β-catenin在细胞膜的分布增加，而在细胞质及细胞核的分布明显减少。免疫荧光双重染色显示β-catenin胞膜分布与E—cadherin一致。结论CDH1基因启动子甲基化可能是导致结肠癌细胞E—cadherin表达缺失及β—catenin异位分布的重要因素。
- 李臣任俊宇洪敏李少遂刘为青高嫦娥陈圣雄周华华陈明清董坚
- 关键词：上皮钙黏素Β-连接素结肠癌甲基化
