黄光焰
- 作品数：8 被引量：24H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- Notch信号在胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞与成纤维细胞共培养体系中的表达
- 2007年
- 目的建立肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)与肺成纤维细胞(LF)共培养模型,检测胎鼠AECⅡ共培养和单独培养时Notch1、3受体表达的变化。方法应用Millipore插入式培养皿和Costar六孔板构建AECⅡ/LF共培养模型,将未接种LF的Millicell2PCF插入式细胞培养皿置于接种有AECⅡ的培养板为AECⅡ单独培养组。光镜、透射电镜观察共培养与单独培养条件下AECⅡ大体形态、超微结构;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其AECⅡ增殖活力;反转录PCR法检测其AECⅡ分泌表面活性蛋白C(SP-C)功能,并用荧光定量PCR法检测其AECⅡNotch1、3mRNA的表达。结果AECⅡ/LF共培养组较AECⅡ单独培养组稳定保持了其立方形结构和细胞表型并克隆样生长,增殖活力强。电镜下可见单独培养48hAECⅡ呈现AECⅠ样改变,而共培养AECⅡ维持其正常生理形态。与单独培养组比较,共培养组AECⅡ分泌SP-C明显增多(P<0.05),Notch1 mRNA表达显著升高(P<0.05),而Notch3 mRNA显著降低(P<0.05)。结论AECⅡ同型细胞培养时转分化为AECⅠ,不同型细胞(AECⅡ/LF)共培养抑制其转分化,此转分化过程受Notch信号分子调控。
- 汪鸿常立文卢红艳李文斌蔡成黄光焰陈燕
- 关键词：肺成纤维细胞共培养NOTCH转分化
- 硫氧还蛋白在早产鼠高氧肺损伤中的动态表达及其临床意义被引量：6
- 2007年
- 目的研究高氧肺损伤早产鼠肺组织硫氧还蛋白(Trx)的表达及其临床意义。方法早产新生SD大鼠128只,生后d1随机分为空气组和高氧组,每组64只。分别于d1、4、7、10、14提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx mRNA水平;免疫组织化学方法检测肺组织切片凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3);HE染色观察肺组织病理变化。结果高氧组肺发育明显受阻,与空气组比较,高氧暴露后Trx mRNA表达显著增强,且于d10时达高峰(P<0.05,0.01)。Caspase-3表达显著升高(P<0.05,0.01)。结论高氧上调早产鼠肺组织Trx mRNA的表达;肺组织Trx mRNA的表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发生发展中发挥重要保护作用。
- 陈燕常立文刘伟李文斌汪鸿黄光焰蔡成
- 关键词：高氧硫氧还蛋白半胱氨酸蛋白酶类肺损伤
- 三磷酸腺苷合成酶6、8与早产新生大鼠高氧肺损伤的相关性
- 2007年
- 目的探讨线粒体呼吸链三磷酸腺苷合成酶6、8(ATPase6、8)与早产新生大鼠高氧肺损伤的关系。方法早产新生SD大鼠生后1 d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中,氧体积分数>850 mL/L;空气组置于同一室常压空气中。二组分别于实验后1、4、7、10和14 d提取其肺组织RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ATPase6、8 mRNA表达。结果1.与空气组比较,高氧暴露1 d ATPase6 mRNA表达显著增强(P<0.05);4、7、10 d时无显著性差异(Pa>0.05);14 d又显著增强(P<0.01)。2.高氧组与空气组比较,ATPase8 mRNA表达于1、4、10 d时无显著改变(Pa>0.05);7、14 d时明显增强(Pa<0.05)。结论高体积分数氧暴露诱导线粒体呼吸链中ATPase6、8异常表达,这种变化可能参与早产新生大鼠高氧肺损伤的发病过程。
- 蔡成常立文李文斌刘伟陈燕黄光焰汪鸿
- 关键词：早产高氧肺损伤逆转录聚合酶链反应
- 高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NADH脱氢酶亚单位4、5表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC Ⅱ）还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）脱氢酶亚单位4、5表达的影响.方法 原代培养Sprague-Dawley（SD）胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至接近汇合状态时随机分为高氧组和正常对照组,高氧组持续暴露于常压高浓度氧中（氧浓度〉90%.CO2浓度5%）,正常对照组仍置于5%CO2培养箱中,两组均继续分别培养6、12、24h;采用免疫细胞化学染色SP法检测NADH脱氢酶亚单位4（DN4）蛋白的表达.采取半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ND4、NADH脱氢酶亚单位5（ND5）mRNA的表达.结果 （1）SP法结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达增强,12h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达减弱,但差异均无统计学意义（均P〉0.05）,24hAEC Ⅱ ND4蛋白的表达显著减弱（P〈0.05）;（2）RT-PCR检测结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA表达增强,差异均无统计学意义（均P〉0.05）.12、24h AECⅡ ND4、ND5 mRNA表达显著减弱（P〈0.05）.结论 持续高氧下调胎鼠AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA和AEC Ⅱ ND4蛋白的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程.
- 黄光焰常立文汪鸿陈燕蔡成
- 关键词：高氧胎鼠
- 高浓度氧暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨高浓度氧(高氧)暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-脱氢酶亚基4(ND4)表达的影响。方法原代培养早产Sprague-Dawley(SD)大鼠AECⅡ,待其在含50mL/L二氧化碳(CO2)培养箱中生长至接近融合状态时随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧体积分数>900mL/L,CO2体积分数为50mL/L;空气组仍置于含50mL/L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露6、12、24h提取细胞RNA,采取半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ND4 mRNA的表达;采用免疫细胞化学染色法检测细胞爬片ND4蛋白的表达。结果与空气组比较,免疫细胞化学结果显示高氧暴露6、12h ND4的表达无显著性差异(Pa>0.05),高氧暴露24h ND4的表达显著减弱(P<0.05);RT-PCR检测显示高氧暴露6h ND4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05),高氧暴露12、24h ND4 mRNA表达显著减弱(Pa<0.05)。结论高氧暴露下调早产SD大鼠AECⅡ ND4 mRNA和蛋白水平的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程。
- 黄光焰常立文汪鸿蔡成刘伟李文斌陈燕
- 关键词：高氧症早产
- 高氧对人肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的影响被引量：9
- 2008年
- 目的研究高浓度氧暴露对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)表达的影响,探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用。方法体外传代培养A549细胞系,待其在37℃、5%CO2培养箱中生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧浓度>90%,CO2浓度为5%;空气组仍置于含5%CO2培养箱中。两组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx-2 mRNA的表达;采用Western blot检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果①与空气组相比,A549细胞高氧暴露24 h Trx-2 mRNA表达显著增强(P<0.05);48 h后Trx-2mRNA呈下降趋势,其表达较空气组减弱,但两者差异无显著性意义(P>0.05)。②与空气组相比,A549细胞高氧暴露后12 h Trx-2蛋白表达水平显著增强(P<0.05),随后逐渐减弱,至48 h显著减弱(P<0.05)。结论高浓度氧暴露诱导A549细胞中Trx-2动态表达的变化,这种变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用。
- 蔡成常立文李文斌刘伟陈燕单瑞艳黄光焰汪鸿
- 关键词：高氧A549细胞肺损伤
- γ泌肽酶抑制剂对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Notch信号通路的影响被引量：4
- 2008年
- 目的探讨γ泌肽酶抑制剂在肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)与肺成纤维细胞(LF)共培养胎鼠模型中对Notch信号分子表达的影响。方法应用Millipore插入式培养皿和Costar6孔板构建AECⅡ/LF共培养胎鼠模型。应用免疫组织化学法分别检测其细胞表面标志物表面活性蛋白C(SP-C)鉴定AECⅡ、LF。锥虫蓝拒染实验检测AECⅡ、LF活力后将γ泌肽酶抑制剂加入最低必需培养基(MEM)(终质量浓度为0.2 g/L)作为实验组,未加入者为对照组。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)在基因和蛋白水平检测二组在培养24、48、72、96 h AECⅡNotch受体、转录调节因子DNA结合蛋白(CBF-1)及转录因子分裂增强子(HES-1)表达。采用SPSS11.5软件进行组间t检验和组内单因素方差分析。结果原代培养AECⅡ纯度(94.7±1.9)%,细胞活力为(96.2±2.5)%;LF纯度(97.2±1.4)%,细胞活力为(98.5±2.6)%。实验组CBF-1 mRNA及CBF-1蛋白在24、48、72、96 h与对照组比较均无显著变化(Pa>0.05),实验组Notch1 mRNA在24、48、96 h,Notch3 mRNA在48、72、96 h较对照组均显著降低(Pa<0.05),HES-1 mRNA及蛋白在各时间点均显著降低(Pa<0.05,0.01)。结论γ泌肽酶抑制剂可部分阻断胎鼠AECⅡ发育中的Notch信号通路传导,其机制可能通过非CBF-1依赖途径。
- 汪鸿常立文卢红艳李文斌蔡成黄光焰陈燕
- 关键词：共培养NOTCH
- 高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Notch受体的影响被引量：4
- 2008年
- 目的检测Notch 1在肺泡Ⅱ型上皮细胞（ACEⅡ）与肺成纤维细胞共培养的高氧损伤模型中表达的变化，初步探讨Notch信号在高氧肺损伤中的作用，为临床防治新生儿急、慢性肺损伤提供理论的依据。方法SpragneDawkey雌鼠12只，体质量200，220g，雄鼠3只，220～250g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。将共培养的AECⅡ随机分为高氧组和对照组。高氧组按3L／min通入950ml／L O2和250ml／L CO2，10min后，立即用封口胶密封培养板，置于37℃、50ml／L CO2培养箱。于给氧后24、48、72、96h，收获各组细胞，测氧仪检测培养瓶中的O2体积分数，将低于900ml／LO2的标本弃去。免疫组织化学法鉴定细胞，台盼蓝拒染实验计算细胞纯度，确认共培养造模成功。每24h更换培养基并给氧。每一时间点同时设对照组，置于37℃、50ml／L CO2培养箱中培养。MTT法检测AEC Ⅱ增殖活力，绘制生长曲线；免疫组织化学法定位Notch1蛋白；荧光定量PCR检测notch1 mRNA；流式细胞术双标记法检测AECⅡ、AECⅠ细胞百分率。结果免疫组织化学法显示高氧组Notch1活化人核受抑；高氧组各时间点Notch1 mRNA分别下降为对照组的0．43、0．29、0．11、0．03倍（置信限95％），通氧后AECⅡ百分率显著降低[24h高氧组vs．对照组：（68．92±6．88）％vs．（90．35±4．01）％，P=0．006；48h高氧组vs．对照组：（38．03±3．27）％vs．（61．47±4．81）％，P=0．000；72h高氧组vs．对照组：（20．13±4．45）％vs．（52．05±3．35）％，P=0．000；96h高氧组vs．对照组：（8．17±1．99）％vs．（52．59±2．93）％，P：0．000]。AECⅠ百分率除96h外均增高[24h高氧组vs．财照组：（0．11±0．03）％vs．（0．01±0．01）％，P=0．006；48h高氧组vs．对照组：（49．73±3．45）％vs．（16．13±2．13）％，P=0．000；72h高氧组vs．对照组：（52．43±3．14�
- 汪鸿常立文卢红艳李文斌蔡成黄光焰陈燕
- 关键词：高氧共培养NOTCH
