高安健
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：深圳大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 斑节对虾抗菌肽Penaeidin基因的克隆及其序列分析
- 2012年
- 目的克隆斑节对虾Penaeidin抗菌肽基因,构建克隆载体,测序后进行序列分析。方法从斑节对虾采集血淋巴后提取总RNA,经反转录得到cDNA,用特异性引物进行PCR扩增得到具有双酶切位点的重组Penaeidin目的基因片段。将其连接至PMD18-T载体,转化至Top10克隆菌进行克隆并测序,用生物信息学软件进行序列分析。结果测序结果表明斑节对虾Penaeidin抗菌肽基因全长225bp,编码74个氨基酸。将克隆所得的斑节对虾Penaeidin基因序列与NCBI数据库中的斑节对虾Penaeidin基因(FJ686016,AF475082)同源性为100%,与其它物种虾的Penaeidin基因同源性为48%～92%。分子进化树显示斑节对虾Penaeidin抗菌肽和印度对虾Penaeidin抗菌肽聚为一大枝,而圣保罗对虾、小褐美对虾、巴西美对虾、白滨对虾Penaeidin聚为一大枝,南方滨对虾Penaeidin则自成一枝。二级结构预测表明本次克隆得到的斑节对虾Penaeidin信号肽区为β折叠片,成熟肽主要为β折叠片和转角结构。成熟肽的N端和C端亲水性较强,N端为柔性区域。其中氨基酸序列30-40和60-70表现为潜在的T细胞抗原表位。结论成功克隆出斑节对虾Penaeidin基因,对其序列的分析结果将为后续的蛋白表达、工业化生产和理论研究奠定前期基础。
- 高安健赵若聪叶松曾硕果邬玉兰刘志刚王亚龙
- 关键词：斑节对虾抗菌肽克隆
- 罕见胸肌变异一例被引量：1
- 2013年
- 临床本科学生于解剖实践中，发现一具成年男性尸体的少见的胸前壁肌肉变异。现报道如下：该尸为成年男性，52岁，身长168cm，体重80kg，体胖。
- 蔡洁玲黄俊杰何勇彭佩燕高安健刘健华赵振富
- 关键词：胸肌男性尸体本科学生胸前壁成年
- 花生抗菌活性蛋白的分离、纯化和鉴定
- 2012年
- 目的从花生中分离、纯化具有抗真菌活性的蛋白。方法提取花生粗提液,通过Affi-Gel Blue Gel亲和层析和SuperdexTM75分子筛层析,纯化得到目的蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE、抗真菌活性检测鉴定该蛋白对不同真菌的抑制活性。结果对花生总蛋白进行SDS-PAGE电泳分析结果显示,其相对分子质量为12 000～70 000。组份C对绿色木霉有抑菌活性,对落花生褐斑病菌、黑曲霉、白地霉、产黄青霉均无抑菌活性。活性组份C层析得到的组份23对绿色木霉有抑菌活性。对活性组份23进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析结果显示,组份23相对分子质量为24 000。结论花生中存在抗真菌活性蛋白。
- 贾梦阳徐栋梁高安健闫浩夏立新刘志刚
- 关键词：花生离子交换层析
- 粉尘螨Der f5克隆表达、纯化和免疫原性鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的克隆表达粉尘螨第5组变应原(dermatophagoides farinae,Der f5)基因,并鉴定纯化蛋白免疫原性。方法根据Der f5基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出Der f5基因片段,PCR产物克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希菌Top10,经PCR和酶切鉴定并测序。将上述所得阳性克隆菌株扩大培养,碱裂解法提取质粒,所得重组质粒pMD18-T-Der f5和空质粒pET-32a同时用限制性内切酶Bam HⅠ与HindⅢ双酶切,经纯化后连接并转化至大肠埃希菌Top10。构建的重组质粒pET32a-Der f5,经PCR、酶切和测序鉴定后,再转化至大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化重组质粒pET32a-Der f5表达产生的组氨酸重组蛋白。结果构建了重组质粒pMD18-T-Der f5和pET32a-Der f5。SDS-PAGE结果表明Der f5基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,SDS-PAGE结果显示单一条带。该蛋白以尘螨过敏患者血清进行Western blotting,结果表明具有良好的IgE结合活性。结论克隆、表达并纯化了具有良好尘螨致敏患者IgE结合活性的Der f5,为粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了基础。
- 袁小惠高安健邬玉兰刘志刚
- 关键词：粉尘螨F5蛋白表达纯化免疫印迹
- 基因工程抗菌肽关键技术研究与应用
- 刘志刚赖仞夏立新李永新李荔杨海龙潘韵邓利李建许刘晓宇张森刘欢田芳李东升高安健
- 课题来源与背景:随着人类对抗生素的长期使用以及滥用，"无毒，无残留，无耐药性"的抗菌肽是新一代抗菌制剂的发展趋势和要求.该成果是由国家863计划、国家自然科学基金、深圳市科技计划项目等共同资助完成，历时8年.技术原理及性...
- 关键词：
- 关键词：基因工程抗菌肽
