金大智
- 作品数：80 被引量：293H指数：9
- 供职机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学农业科学更多>>
- 多重荧光PCR结合Allglo探针技术检测艰难梭菌相关毒素基因被引量：12
- 2014年
- 目的采用多重荧光PCR结合Allglo探针技术，建立一种快速、特异、灵敏的鉴定艰难梭菌相关毒素基因的方法，并对浙江杭州地区腹泻患者的产毒型艰难梭菌感染现状进行调查研究。方法应用型研究。针对艰难梭菌毒素tcdA和tcdB基因设计引物和相应的Allglo探针，优化PCR扩增体系，并评价其特异性、灵敏度、重复性。收集2012年8至12月杭州市第一人民医院的门诊腹泻患者粪便标本共180份，对粪便中携带tcdA和tcdB基因的产毒型艰难梭菌进行鉴定，同时通过对tcdA和tcdB基因直接测序进一步验证荧光PCR检测结果的可靠性。结果本试验建立的结合Allglo探针的多重荧光PCR方法可同时、准确、特异地鉴定艰难梭菌tcdA和tcdB基因，灵敏度可达10CFU／mI。定量检测tcdA基因的循环阈值（Ct）值变异系数分别为2．30％、0．42％、0．81％，检测tcdB基因的ct值变异系数分别为1．91％、1．02％、1．18％，均小于5％。在180份腹泻粪便样本中，检测m26份阳性样本，阳性率为14．4％，其中tcdA和tcdB毒素基因均阳性的样本为23份（23／26，88．5％），仅tcdA毒素基因阳性的样本为2份（2／26，7．7％）；仅tcdB毒素基因阳性的样本为1份（1／26，3．8％）。同时，采用直接测序方法对样本进行扩增检测和序列比对，与荧光定量PCR结果完全一致。结果显示浙江杭州地区腹泻患者感染的产毒型艰难梭菌以同时携带tcdA和tcdB毒素基因的菌株为主。结论本研究建立的Allglo探针的多重荧光PCR方法可用于临床上快速、准确地检测产毒型艰难梭菌。
- 金大智罗芸罗丽张政叶菊莲张严峻吴方方小飞李辉王贤军
- 关键词：梭菌细菌毒素类肠毒素类细胞毒素类
- 艰难梭菌毒素A和毒素B羧基端抗原区段的表达及抗原性分析被引量：2
- 2015年
- 目的构建艰难梭菌毒素A和毒素B的原核表达载体,获得融合表达抗原,并鉴定其抗原活性。方法以ATCC43255菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得毒素A和B羧基端(C端)基因片段,并进行原核表达获得毒素A和B羧基端抗原区段。利用艰难梭菌毒素检测试剂盒对毒素A和B羧基端抗原区段的抗原性进行鉴定。结果成功构建了艰难梭菌毒素A和毒素B的原核表达载体,并获得能被相应特异性抗体所识别的毒素A和B羧基端抗原区段。结论获得毒素A和B羧基端抗原区段具有很好的抗原活性,为进一步制备相应抗体并建立艰难梭菌毒素A和B的免疫检测方法奠定了基础。
- 黄忱杨锡琴修冰水罗芸刘志强张旭辉赵琰枫金大智冯晓燕张贺秋
- 关键词：艰难梭菌细菌毒素类原核表达
- 鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法的建立及评价被引量：1
- 2015年
- 目的建立鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法。方法依据鼠疫菌、假结核菌特有的基因组序列[“疫岛（PeI）”和“假岛（Psi）”]，与已公布的12株鼠疫菌和4株假结核菌全基因序列进行比对，设计特异性的引物，对鼠疫菌、假结核菌和其他肠道细菌进行鉴定。结果用52株鼠疫菌、57株假结核菌和其他肠道菌株进行验证，结果显示，5对鼠疫菌的鉴定引物中，2对（PeI2和PeI11）仅在52株鼠疫菌中扩出目的条带，另3对引物（PeIl、PeI3和PeI12）除鼠疫菌外在部分假结核菌株中也扩出目的条带；5对假结核菌鉴定引物中，1对引物（Psi1）在52株鼠疫菌和57株假结核菌株中扩出目的条带，4对引物（Psi7、Psi16、Psi18和Psi19）仅在57株假结核菌株中均扩出目的条带，在鼠疫菌中未扩出目的条带。结论用鼠疫菌和假结核菌共有的Psil序列、鼠疫菌特有的PeI2和PeIll序列及假结核菌特有的Psi7、Psi16、Psi18和Psi19序列组成的基因鉴别方法，可以用于鼠疫菌和假结核菌的基因快速鉴别。
- 石国祥张政梅玲玲陈劲华梅盛华金大智张志凯王宇萌张孝和罗芸孙继民俞东征夏连续
- 关键词：鼠疫耶尔森菌假结核耶尔森菌基因
- 下呼吸道人博卡病毒感染患儿的荧光定量PCR检测被引量：2
- 2007年
- 引起小儿下呼吸道感染的病原微生物有相当部分是存在于自然界的病毒，其中包括呼吸道合胞病毒、流感病毒、腺病毒及冠状病毒等。迄今为止，约10％～39％的小儿下呼吸道感染的病因未知。人博卡病毒（human bocavirus）是最近从患儿下呼吸道感染分泌物中发现的一种新人细小病毒（parvovlrus），据报道由瑞典斯德哥尔摩卡罗林斯卡学院的Tobias Allander儿童医院的医生在对540例下呼吸道感染患儿进行治疗时发现的，将之命名为“人博卡病毒”。新发现的人博卡病毒被认为在引起患儿下呼吸道感染的病因中至少占5％。
- 曾爱平林峰郑敏巧林海燕郑昌华李桦陈弘吴锋杨宁敏杨恩金大智文思远
- 关键词：小儿下呼吸道感染荧光定量PCR检测患儿人细小病毒
- 一种抗生素耐药NDM-1基因的荧光检测试剂盒及检测方法
- 本发明提供了一种抗生素耐药NDM-1基因的荧光检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒中特异性引物和荧光探针序列如下：上游引物：5′-CAG CCA CCA AAA GCG ATG T-3′，下游引物：5′-CGG CCACAC...
- 金大智张政罗芸程苏云
- 荧光定量PCR结合TaqMan-MGB检测食品中空肠弯曲菌被引量：1
- 2009年
- 目的:基于TaqMan-MGB探针的荧光定量PCR技术,研发出一种定量检测食品污染物中空肠弯曲菌的方法,为食品污染物调查提供快速、可靠的监测工具。方法:根据TaqMan-MGB探针原理,在空肠弯曲菌基因组保守区设计引物和探针,探针的5′端用FAM荧光标记,3′端标记MGB,建立基于TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法。并对其特异性、灵敏度、重复性进行评价,然后对收集的市场食品污染物调查样本进行检测,与常规方法做对照。结果:所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测空肠弯曲菌,最低检测限为10 cfu/ml;对50例市场污染物调查样本进行评价,结果显示6份食品污染物调查样本中空肠弯曲菌为阳性,其余为阴性,结果与常规培养检测结果一致。结论:空肠弯曲菌TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有结果可靠、操作简便等优势,比目前常规检测方法更灵敏,该方法可用于食物污染物调查、临床检验等多个方面。
- 金大智程苏云张政朱敏罗芸叶菊莲
- 关键词：实时荧光定量PCR空肠弯曲菌
- 熔解曲线分析方法甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7被引量：1
- 2012年
- 目的:采用熔解曲线分析技术,建立一种快速、简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7方法。方法:选取肠出血性大肠杆菌O157:H7编码脂多糖基因(rfbE)和编码鞭毛抗原基因(fliC)作为检测靶基因,建立荧光PCR反应体系。结果:通过多种标准菌株试验,结果显示所建立的熔解曲线分析法可特异性地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7;纯培养的灵敏度达到2.8×101cfu/ml;检测108例临床样本,其中18例肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性,3例为肠出血性大肠杆菌O157:非H7阳性,与常规培养方法的符合率达到100%。结论:本方法可简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7,结果可靠,通过进一步增加反应体系中引物的数量可同时对肠出血性大肠杆菌其他血清型进行鉴定。
- 金大智罗芸张政叶菊莲程苏云
- 关键词：熔解曲线肠出血性大肠杆菌O157:H7甄别
- 基因芯片技术检测3种肠道病原微生物方法的建立被引量：8
- 2007年
- 目的:建立一种运用多重PCR和基因芯片技术检测和鉴定伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌和单核细胞增生利斯特菌的方法。方法:分别选取伤寒沙门氏菌染色体ViaB区域中编码调控Vi抗原表达的基因(vipR)、痢疾杆菌编码侵袭质粒抗原H基因(ipaH)和单核细胞增生利斯特菌溶血素基因(hlyA)设计引物和探针,探针3'端进行氨基修饰,下游引物标记荧光素Cy3。在优化的PCR和杂交反应条件下,进行三重PCR扩增,产物与包括3种致病菌特异性探针的基因芯片杂交。在评价基因芯片的特异性和灵敏度之后,对临床样本进行检测。结果:只有3种目的致病菌的PCR产物在相应探针位置出现特异性信号,其他阴性细菌均无信号出现;3种致病菌的检测灵敏度均可达到103CFU/mL;检测30例临床样本的结果与常规细菌学培养结果一致。结论:所建立的可同时检测伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌和单核细胞增生利斯特菌的基因芯片方法快速、准确,特异性高,重复性好,为3种肠道致病菌的快速检测和鉴定提供了新方法和新思路。
- 李禾徐琦吴忠华金大智杨宁敏高爽
- 关键词：基因芯片多重PCR伤寒沙门氏菌痢疾杆菌
- 人博卡病毒外壳蛋白（VP3）的重组表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2007年
- 人博卡病毒（Human Bocavims）是2005年Tobias Allander等从小儿下呼吸道感染分泌物中分离到的新细小病毒，我们曾报道中国分离的人博卡病毒（WLL-1株）的全基因组序列。为了进一步检测分析人博卡病毒感染情况，我们重组表达了人博卡病毒WLL-1株的外壳蛋白（VP3）并建立了间接ELISA检测方法。
- 林峰曾爱平郑敏巧金大智吴锋
- 关键词：间接ELISA检测人博卡病毒外壳蛋白小儿下呼吸道感染
- 一种甄别霍乱毒素的细胞学检测试剂盒及检测方法
- 本发明提供了一种甄别霍乱毒素的细胞学检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒主要包括：Y1肾上腺皮质细胞，抗霍乱毒素中和抗体，多聚赖氨酸，96-E-plate，以及用于Y1肾上腺皮质细胞的细胞培养基。本发明提供了一种甄别霍乱毒素...
- 金大智罗芸张政
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