郑升
- 作品数：13 被引量：21H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市教育委员会重点学科基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人脂肪细胞新乙二醛酶的发现及结构功能分析被引量：2
- 2007年
- 目的通过蛋白组学技术筛选人脂肪细胞新蛋白,并对新蛋白的结构及功能进行分析。方法利用双向电泳及质谱技术观察人脂肪细胞蛋白表达谱,对发现的新蛋白先通过RT-PCR及原核表达证实该蛋白在脂肪细胞的表达,再利用生物信息学对新蛋白的结构,同源性及结构域进行预测。结果发现了脂肪细胞表达的新蛋白My027,证实了该蛋白的表达,生物信息学分析显示该蛋白定位于胞浆,具有高度保守的结构域。141-253氨基酸之间有一个完整的乙二醛酶(glyoxalse,GLO)功能域,与GLO的同源性为96.7%,144-244氨基酸序列与GLO I的同源性为95.7%。结论脂肪细胞表达的蛋白My027具有与GLO I基本相同的功能域,很可能具有同样的生理功能。
- 李晓华郑升刘优萍骆天红罗敏
- 关键词：脂细胞
- 胰岛素的长期作用对人脂肪细胞代谢的影响被引量：6
- 2005年
- 目的探讨胰岛素的长期作用对人脂肪细胞脂代谢的影响。方法 检测不同浓度胰岛素作用24h后脂肪细胞甘油释放率的基础值和刺激值,并使用RT-PCR检测脂肪分解的关键酶激素敏感性脂酶(HSL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果胰岛素的长期作用可增加脂肪细胞的甘油释放率,并呈剂量效应和时间效应,100、500、1000nmol/L的胰岛素可使甘油释放率的基础值和刺激值分别增加17%～147%和28%～241%(P<0.01)。胰岛素的长期作用对脂肪细胞的HSLmRNA表达无影响,TNF-αmRNA的表达明显增加。结论在体外胰岛素的长期作用与其短期作用有所不同,可增加脂肪细胞的脂肪分解,具脂肪分解作用的TNF-α表达增加可能发挥了一定的作用。
- 李晓华郑升刘优萍骆天红罗敏
- 关键词：胰岛素脂肪细胞TNF-Α脂肪分解代谢RT-PCR检测
- 人脂肪细胞新蛋白My027的发现及功能初步研究
- 目的寻找脂肪细胞表达的新蛋白及其功能的研究有助于拓宽思路,揭示脂肪细胞在疾病中的作用提供更多线索。方法利用双向电泳及质谱技术观察人脂肪细胞蛋白表达谱,对发现的新蛋白先通过RT- PCR,原核表达及质谱分析进行证实。再通过...
- 李晓华郑升刘优萍李华峰骆天红李杲罗敏
- 文献传递
- 脂肪分化相关蛋白基因致2型糖尿病分子机制研究
- 目的在细胞水平上对2型糖尿病家系D9S171附近的脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因外显子中的错义突变Thr394>Ala进行功能研究,以阐明该突变对ADRP基因功能的影响。方法从小鼠脂肪组织中提取mRNA,通过逆转录聚合...
- 骆天红赵萸张宏利李文毅许丽红张芹郑升李杲罗敏
- 文献传递
- 人内脏与皮下脂肪细胞蛋白表达谱的差异分析被引量：1
- 2007年
- 目的比较人内脏与皮下脂肪细胞蛋白表达的差异。方法采用双向凝胶电泳及质谱技术筛选差异蛋白。结果两组蛋白点的匹配率为r=0·71。灰度值有显著性差异的有82个点(P<0·05)。选择差异相差5倍以上的10个点用于质谱分析,确认了6个差异表达的蛋白质,分别与胰岛素信号转导、细胞分化及脂代谢关系密切。结论差异蛋白可能在腹型肥胖相关疾病中发挥一定作用,为进一步明确内脏脂肪的危害性提供了研究思路。
- 李晓华郑升刘优萍李华峰骆天红李果罗敏
- 关键词：脂细胞差异蛋白
- 脂肪细胞新蛋白My027原核表达、纯化及生物活性研究
- 2008年
- 目的通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性。方法RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,经亲和层析法获得融合蛋白,利用SDS-PAGE、Western印迹及质谱进行鉴定。在还原性谷胱甘肽存在的条件下,将纯化得到的融合蛋白作用于乙二醛酶Ⅰ的底物甲基乙二醛,通过分光光度法检测产物乳酸谷胱甘肽的生成。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠埃希菌BL-21胞浆中,纯化后的目的蛋白SDS-PAGE、Western印迹及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白质My027在pGEX-4T-2原核表达载体中可获高效表达,所纯化蛋白具有类似于乙二醛酶Ⅰ的作用。
- 李晓华郑升刘优萍骆天红罗敏
- 关键词：原核表达生物活性
- 胰岛素瘤相关蛋白-2自身抗体酶联免疫吸附测定方法的建立被引量：1
- 2003年
- 目的:建立糖尿病患者血清中胰岛素瘤相关蛋白鄄2(IA鄄2)自身抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。方法:以链亲和素预包被的聚苯乙烯微量滴定板为固相载体,原核表达的生物素酰化IA鄄2胞内段融合蛋白为抗原,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG为二抗,2,2’鄄连氮鄄双鄄[3鄄乙基苯并噻唑啉磺酸](ABTS)为显色底物建立ELISA。结果:本方法的平均批内变异系数为8.8%,批间变异系数为7.7%。用该方法和Roche公司生产的“DiapletsAnti鄄IA鄄2”IA鄄2自身抗体酶联免疫试剂盒进行对比,共检测218例糖尿病患者,以Roche试剂盒的检测结果为准,本方法的诊断灵敏度为92.1%,特异度为98.9%。结论:本研究建立的IA鄄2自身抗体ELISA法有较好的灵敏度、特异度和精密度,且操作简单方便,有较广阔的应用前景。
- 贾秀娟谢晓雁张迪周文中刘优萍郑升杨键罗敏
- 关键词：自身抗体酶联免疫吸附测定糖尿病
- cDNA芯片研发及其在肥胖患者脂肪基因差异表达研究中的应用被引量：4
- 2004年
- 为了加快基因功能的研究 ,利用已有的来源于不同组织的cDNA克隆 ,并通过交换和购买补充了低丰度和染色体覆盖不完全的部分cDNA ,研制开发出具有相当代表性、覆盖较完全的高密度cDNA表达型基因芯片 ,每张芯片上含有 384个质控DNA和 12 6 30个cDNA探针 ,其中包括 12 5 0 8个Unigene和 12 2个表达序列标签 (EST) .利用这些芯片 ,对肥胖患者及正常人内脏脂肪组织基因表达谱进行了初步研究 ,并发现在肥胖患者内脏脂肪组织差异表达的基因 ,其中上调的有与凋亡相关的基因、与免疫有关的基因以及与能量代谢有关的基因等 ,而下调的主要是与脂肪酸及胆固醇合成有关的基因 。
- 赵萸骆天红王侃侃张济郑培烝赵春军刘优萍郑升顾燕云李果罗敏
- My027融合蛋白表达载体构建及其在大肠杆菌的表达
- 2008年
- 目的探索My027蛋白的体外表达,通过原核表达获得大量可溶性My027融合蛋白。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法获得融合蛋白,采用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)、Western印迹法及质谱进行鉴定。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠杆菌BL-21胞质中,纯化后的目的蛋白经SDS-PAGE、Western印迹法及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白My027在pGEX-4T-2原核表达载体可获高效表达,为进一步研究其功能奠定基础。
- 李晓华郑升刘优萍骆天红罗敏
- 关键词：融合蛋白原核表达
- ATP结合盒转运体A1基因多态性与2型糖尿病及肥胖的相关性
- 2006年
- 目的研究上海地区汉族人群中,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)基因位点rs2020927的单核苷酸多态性与2型糖尿病(T2DM)及肥胖发病的相关性。方法选取上海地区无亲缘关系的T2DM患者440例,根据体质量指数(BM I)分为肥胖组(n=252,BM I>25 kg/m2)和正常体质量组(n=188,BM I<25 kg/m2);另选取正常对照者315例。采用等位基因特异的实时PCR,对ABCA1基因位点rs2020927进行基因分型,并通过相关和Logistic回归分析,研究该位点与T2DM及肥胖的相关性。结果ABCA1基因rs2020927位点基因型频率在不同组间有显著性差异(P=0.001),其中AA、AG、GG基因型频率在对照组人群中分别为43.8%、35.9%和20.3%;在正常体质量的T2DM组中分别为33%、53.2%和13.8%;在肥胖的T2DM组中分别为40.9%、47.2%和11.9%。基因型GG在T2DM肥胖组和对照组中有显著性差异(P=0.009),而T2DM正常体质量组和对照组之间无显著性差异(P>0.05)。结论中国上海汉族人群中,ABCA1基因多态性位点rs2020927可能与T2DM及肥胖的发病相关。
- 张霞任颖刘伟郑升骆天红罗敏
- 关键词：2型糖尿病肥胖单核苷酸多态性胰岛素抵抗
