邓海莹
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西大学科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 水牛胎儿成纤维细胞的体外分离与培养
- 本研究的目的是摸索出一套简单，高效的水牛胎儿成纤维细胞分离培养方法，建立稳定的细胞系。结果显示，组织块培养法培养原代成纤维细胞生长较慢，汇合形成单层的生长需12-14天，胰酶消化法培养的戍纤维细胞生长相对较快，8天可汇合...
- 陈凌声崔奎青邓海莹陈会娟石德顺
- 关键词：细胞培养细胞形态水牛胎儿成纤维细胞
- 文献传递
- 水牛miR-302s真核表达载体的构建及生物信息学分析
- 2019年
- 试验旨在克隆并构建水牛miR-302s慢病毒真核表达载体(bbu-miR-302s),对其进行生物信息学分析,并尝试将该载体应用于水牛体细胞重编程中。以水牛基因组DNA为模板扩增得到bbu-miR-302s前体序列,测序正确后将其连入pLVX-IRES-ZsGreen1构建重组慢病毒真核表达载体。重组的慢病毒真核表达载体经过酶切鉴定正确后,采用脂质体转染方法包装慢病毒颗粒,通过感染HEK-293T细胞及猪和水牛体细胞,检测重组慢病毒载体的有效性。bbu-miR-302s有效感染水牛胎儿成纤维细胞(BFF)后,经诱导培养,检测能否产生水牛诱导多能干细胞(iPSC)。采用CoGeMiR数据库查询法和SnapGene Viewer软件进行miR-302s家族在基因组中的定位分析;利用ClustalX 1.83软件分析miR-302s序列保守性;利用TargetScan和miRWalk软件预测bbu-miR-302s主要的靶基因,并运用DAVID程序对靶基因进行信号通路富集。测序结果显示,扩增获得的序列是水牛miR-302s家族,包装的重组慢病毒滴度为7.2×10 6 TU/mL,并可以有效感染3个物种的体细胞。bbu-miR-302s病毒感染BFF后,细胞经历形态变化并发生聚集形成克隆样,碱性磷酸酶检测阳性,但多能基因及表面抗原检测结果均为阴性,说明单因子miR-302s不足以完全重编程BFF为水牛iPSC,但促进了重编程进程。CoGeMiR数据库检索发现,miR-302s家族主要位于LARP 7基因的内含子区;SnapGene Viewer软件进一步分析发现,bbu-miR-302s位于水牛7号染色体LARP 7基因的内含子区。序列同源性分析表明,miR-302s家族成员间及miR-302s簇成员在不同物种间均高度保守。水牛miR-302s主要靶基因共255个,这些靶基因主要集中在33个信号通路中,其中PGK信号通路与胰高血糖素信号转导及调控干细胞信号通路最为显著。本研究结果为后续开展miR-302s簇在体细胞重编程中的作用奠定基础。
- 乔树叶黄时海邓彦飞邓海莹罗婵石德顺李湘萍
- 关键词：生物信息学分析
- 基因工程在转基因动物领域的应用现状及展望被引量：5
- 2008年
- 本文阐述了基因工程和转基因技术研究的原理、基本路线,介绍了转基因技术和生产转基因动物的方法,总结转基因技术在哺乳动物领域的应用,提出了转基因动物面临的问题,并对转基因技术及转基因动物的前景进行了展望。
- 黄雅琼邓彦飞邓海莹谭世俭石德顺
- 关键词：基因工程转基因动物
- piggyBac转座子生产转基因动物研究进展
- 从PB转座子应用于制备转基因动物以来，PB转座子就以其本身无可比拟的优势在转基因技术家族中占据了一席之地;从生产转基因昆虫到其在哺乳动物细胞中的高效转座的研究，它在不断的发展和完善。本文概述了PB转座子生产转基因动物的原...
- 邓海莹张磊刘庆友张晓溪石德顺
- 关键词：转基因动物哺乳动物动物细胞
- 文献传递
- 水牛转录因子Klf4基因编码区序列克隆及在真核细胞中表达研究
- 2013年
- Krüppel样因子4(Klf4)在调控细胞增殖、分化和胚胎发育中有重要作用,也是生产诱导多能干细胞(iPSC)重要的转录因子之一。本研究对水牛Klf4进行克隆和表达研究,为生产水牛iPSC和研究其在体细胞重编程中的机理奠定基础。采用RT-PCR克隆并分析水牛Klf4编码区序列(CDS);mRNA水平和蛋白水平检测Klf4在水牛胎儿成纤维细胞(BFF)和胃上皮细胞(BSEC)中的表达情况;构建表达水牛Klf4的逆转录病毒载体(pMX-Klf4)、病毒感染BFF、免疫荧光技术分析外源Klf4在BFF中的表达情况。结果表明:水牛CDS全长1 434 bp,氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸序列的相似性分别为99%、97%、92%和92%,蛋白结构保守;内源Klf4在BFF和BSEC中都有表达,pMX介导的外源Klf4能在BFF中表达。
- 邓彦飞石德顺刘庆友邓海莹罗婵杨素芳
- 关键词：水牛KLF4真核表达
- 兽医硕士专业学位研究生教育现状与发展前景分析被引量：6
- 2016年
- 通过介绍近年兽医硕士专业学位研究生教育在招生规模、招生对象及培养过程中存在的相关问题,对兽医硕士专业学位研究生教育发展前景进行分析,指出我国教育体制改革、兽医体制改革及社会对兽医人才的需求是影响兽医硕士专业学位研究生教育发展的几个重要因素。
- 王秋华邓海莹胡庭俊曾芸
- 关键词：教育现状
- 水牛Oct4、Nanog基因的克隆及其在水牛胎儿成纤维细胞中的表达
- 2014年
- 【目的】转录因子Oct4、Nanog是调节干细胞多能性相关的转录因子,在干细胞的分化和胚胎发育中有重要作用。本研究旨在克隆水牛Oct4和Nanog基因、分析基因序列和蛋白结构、构建逆转录表达载体,并在水牛体细胞中表达,为进一步研究其在水牛早期胚胎发育中的作用,以及为建立水牛胚胎干细胞系和诱导多能干细胞系(iPSC)奠定基础。【方法】分别从水牛生殖嵴和体细胞中提取RNA和DNA,将RNA反转录成第1链cDNA,参照牛基因序列(Oct4:NM_174580,Nanog:NM_001025344)设计特异性引物,采用RT-PCR和PCR分别扩增Oct4和Nanog的编码区序列(the coding sequences,CDS)和DNA全长序列,其中Oct4全长DNA分3段扩增,Nanog全长DNA分2段扩增;利用生物在线分析软件对水牛Oct4和Nanog进行蛋白质结构预测和同源性比对;采用EcoRⅠ、XholⅠ和XholⅠ、NotⅠ双酶切,T4连接酶,将Oct4和Nanog的CDS连接到逆转录病毒载体pMX上,构建逆转录表达载体pMX-Oct4和pMX-Nanog;采用组织块法培养水牛胎儿成纤维细胞(buffalo fetal fibroblasts,BFFs),逆转录表达系统经过病毒包装后产生的病毒上清液感染BFFs,感染12—15h后,继续培养48 h;通过RT-PCR和免疫荧光技术检测转基因在BFFs中的表达情况。【结果】Oct4 CDS全长1 083 bp,编码361个氨基酸,DNA全长4 509 bp,包括5个外显子和4个内含子;Nanog CDS全长903 bp,编码301个氨基酸,DNA全长4 473 bp,包括4个外显子和3个内含子;将Oct4和Nanog基因序列提交到GenBank,分配的基因登录号分别为JN991003和JN991004;Oct4氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸的同源性分别为98%、96%、91%和81%,Nanog氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸的同源性分别为90%、81%、69%和47%;Oct4和Nanog蛋白结构与小鼠相应蛋白的结构相似,分别含有本家族特有的POU结构域和HOX同源结构域;成功构建表达Oct4和Nanog的逆转录病毒载体pMX-Oct4和pMX-Nanog;逆转录病毒系统pMX�
- 邓彦飞刘庆友邓海莹罗婵杨素芳石德顺
- 关键词：水牛NANOG基因克隆异位表达
- 水牛转录因子 c-Myc 克隆和表达研究被引量：3
- 2014年
- 原癌基因c-Myc是诱导多能干细胞(iPSC)生产中重要的转录因子之一。水牛c-Myc的克隆和表达,可以为下一步研究其功能和使用特异性转录因子生产水牛iPSC奠定基础。采用RT-PCR扩增水牛c-Myc编码区(CDS),RT-PCR和免疫荧光技术检测内源c-Myc在水牛胎儿成纤维细胞(BFF)和胃上皮细胞(BSEC)中的表达情况;构建表达c-Myc的逆转录病毒载体(pMX-c-Myc),病毒法转入BFF中,免疫荧光技术分析外源c-Myc在BFF中的表达情况。结果表明:c-Myc在水牛BFF和BSEC中都有表达;水牛c-Myc的CDS全长1 320 bp,氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应蛋白的同源性分别为98%、96%、91%和86%,与小鼠c-Myc蛋白的结构相似;逆转录病毒载体介导的c-Myc能在BFF中表达。
- 邓彦飞石德顺刘庆友邓海莹罗婵杨素芳
- 关键词：IPS细胞真核表达水牛
