赵开弘
- 作品数：94 被引量：143H指数：8
- 供职机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省科技攻关计划武汉市青年科技晨光计划更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程农业科学化学工程更多>>
- 基于light-oxygen-voltage(LOV)结构域光敏剂的细胞毒性研究
- 2025年
- 目的光敏剂被特定波长的光激发后,产生的活性氧类能破坏细胞组织,介导细胞死亡,对微生物感染、肿瘤等相关疾病的治疗具有重要意义。方法基于粳稻类向光素1B(Oryza sativa japonica phototropin-1B-like)的LOV(lightoxygen-voltage)结构域,设计得到光敏剂LovPSO2及其突变体LovPRO2。在445 nm、70μmol·m^(-2)·s^(-1)蓝光照射下,每隔2 min测量LovPSO2和LovPRO2的单线态氧产量,持续10 min,每隔1 min测量其超氧阴离子产量,持续5 min,并研究温度、光照对其稳定性的影响,最后将其转入E.coli BL21(DE3)和HeLa细胞中表达并分析光毒性效果。结果在445 nm、70μmol·m^(-2)·s^(-1)蓝光照射下,LovPSO2是一种能产生大量单线态氧的Ⅱ型光敏剂(ΦΔ=0.61),LovPRO2是一种能够同时产生单线态氧和超氧阴离子的光敏剂。蛋白质稳定性分析结果表明,LovPSO2和LovPRO2具有较好的温度稳定性,其中LovPRO2的光稳定性更好。蛋白质的光毒性分析结果表明,445 nm、30 mW/cm^(2)蓝光照射30 min后,LovPSO2和LovPRO2对E.coli BL21(DE3)菌株有较好的光毒性,致死率高达90%。结论LovPSO2和LovPRO2可作为抗菌光敏剂,在食品和医疗等方面均有较为广阔的应用前景。
- 许爽万奔沙娜赵开弘
- 关键词：光敏剂单线态氧超氧阴离子
- 藻蓝蛋白裂合酶CpeS色氨酸定点诱变及体内重组功能研究
- 2006年
- 为了研究藻蓝蛋白β亚基Cys-84裂合酶CpeS结构与功能的关系以及色氨酸残基对于该酶功能的影响,构建了藻蓝蛋白β亚基Cys-84裂合酶CpeS的两个色氨酸突变体,分别为CpeS(W 14 I)和CpeS(W 75S)。通过体内重组检测酶活性的变化,研究色氨酸残基的突变对裂合酶催化活性的影响。重组结果显示:突变体CpeS(W 14 I)的催化活性几乎完全丧失,为野生型的8%;突变体CpeS(W 75S)的催化活性为野生型的76%。由此推测,第14位色氨酸可能是CpeS酶活性的必需氨基酸,其所处的位置可能是裂合酶CpeS的活性位点。
- 张晓刚周明胡勋赵开弘
- 关键词：定点诱变活性位点
- 别藻蓝蛋白的聚集态研究
- 2008年
- 为了研究鱼腥藻PCC7120(Anabaenasp.PCC7120)中别藻蓝蛋白(APC)α和β亚基(α-APC和β-APC)中藻蓝胆素(PCB)与脱辅基蛋白的生物合成,并在蓝藻体外对这两种色素蛋白PCB-ApcA和PCB-ApcB合成时聚集过程进行分析,通过多种组合的质粒在大肠杆菌体内共同表达进行重组。色素蛋白的吸收和荧光光谱以及Zn电泳表明,在大肠杆菌体内同时得到色素蛋白PCB-ApcA和PCB-ApcB,并且体内重组色素蛋白的细胞荧光光谱显示,色素蛋白以三聚体的形式存在,而破碎细胞后所得上清液所显示的光谱特征为单聚体的特征。
- 苏平赵金梅赵开弘周明
- LOV蛋白突变体及其应用
- 本发明属于生物材料技术领域，尤其涉及LOV蛋白突变体及其应用。本发明公开了一种生物相容性好，与细胞内黄素自动组装形成高效荧光探针的基因与蛋白的制备方法，以及能将细胞内黄素组装形成高效荧光探针的方法和应用。这一系列类型荧光...
- 周明赵开弘吴碧舟沙娜
- 集胞藻PCC6803细菌光敏色素体外重组和光化学活性研究被引量：4
- 2004年
- 采用聚合酶链式反应 (PCR)从集胞藻PCC680 3总DNA中扩增出细菌光敏色素全片段cph1及cph1(C 43 5) ,克隆于pBluescriptSK(+ ) ,然后插入表达载体pET3 0a进行高效表达。获得的脱辅基蛋白Cph1、Cph1(C 43 5)在合适的缓冲体系下分别与藻蓝胆素 (PCB)进行体外重组。光化学研究表明 ,两种脱辅基蛋白都能与PCB进行正确的重组 ,重组产物表现出 650～ 70 0nm可逆光致变色效应。锌电泳证实得到的细菌光敏色素辅基色素为PCB 。
- 董依然冉勇赵开弘周明
- 关键词：集胞藻PCC6803细菌光敏色素体外重组光化学活性藻蓝胆素
- 层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子F基因的克隆和表达被引量：9
- 2002年
- 以层理鞭枝藻总 DNA为模板 ,用 PCR技术扩增得到藻红蓝蛋白操纵子 F基因(pec F) ,然后克隆于质粒 p Bluescript sk(+)。将 pec F基因亚克隆于表达载体 p GEMD,所形成重组质粒 p GEMD- pec F在 E.coli BL2 1 (DE3 )中获得 1 0 %外源表达蛋白并形成包涵体。这个表达产物的分子量为 2 2 .5 k Da,与按 DNA序列预测的蛋白分子量一致。经藻红蓝蛋白α-亚基的重组实验证明 ,该 pec F基因编码的表达产物 Pec F与藻红蓝蛋白操纵子 E基因(pec E)的表达产物 Pec E共同存在时 ,具有藻红蓝蛋白裂合酶活性。
- 郑敏答亮邓明刚秦艺旻周明赵开弘
- 关键词：藻红蓝蛋白基因克隆基因表达层理鞭枝藻
- UV-C光催化纳米TiO_2对蓝藻生长影响的研究被引量：9
- 2007年
- 研究了UV-C光催化纳米TiO2对蓝藻生长的影响。从生理上分析了UV-C光催化纳米TiO2具有促进蓝藻中鱼腥藻7120体内活泼态氧化物O2,.OH和H2O2的产生,抑制藻体中过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)和超氧歧化酶(SOD)在内的抗氧化酶活性,降低可溶性蛋白(Soluble Pr)、藻蓝蛋白(C-PC)、叶绿素a(C-Chl a)和类胡萝卜素(C-Carotenoids)含量,最终表现为藻细胞生长代谢中光合速率和呼吸速率迅速降低,细胞增殖中遗传物质核酸含量下降,并出现几乎达到100%的细胞致死率;同时,通过显微镜观察发现,受试蓝藻细胞形态结构发生了明显变化。可以看出,UV-C光催化纳米TiO2能够有效抑制蓝藻生长。
- 廖兴盛汪星赵开弘周明
- 关键词：纳米TIO2鱼腥藻7120抗氧化酶
- 基因编码的红色荧光蛋白的分子设计方法
- 本发明涉及基因编码的红色荧光蛋白的分子设计方法，包括将血红素氧化酶基因hol和血红素还原酶基因pcyA融合后，得到相应的融合基因hol:pcyA，通过该融合基因能够编码合成藻蓝胆素PCB，融合基因hol:pcyA再次与结...
- 伍贤军周明张娟赵开弘
- 结合藻红胆素的藻蓝蛋白荧光探针的制备方法
- 本发明公开了一种结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，通过应用藻胆蛋白beta裂合酶催化藻红胆素与藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；本发明的方法应用生物过程生产新型的藻蓝蛋白类...
- 伍贤军赵开弘周明夏坤
- 鱼腥藻PCC7120细菌光敏色素缺失突变体的自催化重组研究被引量：1
- 2005年
- 采用聚合酶链式反应(PCR)从鱼腥藻PCC 7120 DNA中扩增出细菌光敏色素缺失突变体基因aphA(26-320)、aphA(27-320)、aphA(28-320)、aphA(29-320)和aphA(32-320),利用表达载体pET 30a进行高效表达,获得的A phA缺失突变体脱辅基蛋白在一定的反应体系下与藻蓝胆素进行了体外重组的研究。研究表明:A phA(26-320)体外重组获得的色素蛋白具有与植物光敏色素相似的可逆光致变色效应,同时酸性尿素变性实验和Zn2+荧光电泳实验显示藻蓝胆素和以上蛋白质发生共价连接。A phA(26-320)与藻蓝胆素重组产物的P r/P fr吸收峰处于660/610nm。其他4个缺失突变体,A phA(27-320)、A phA(28-320)、A phA(29-320)、A phA(32-320)和藻蓝胆素的重组产物中则没有发现可逆光致变色信号,表明这些缺失突变体不能和藻蓝胆素发生自催化重组。维系细菌光敏色素A phA与色素自催化连接的裂合酶结构域位于A phA(26-320)包含的肽链之中。
- 甘春晖冉勇赵开弘
- 关键词：细菌光敏色素缺失突变体体外重组
