王龙生
- 作品数：5 被引量：31H指数：2
- 供职机构：复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组双功能水蛭素的发酵、纯化和鉴定
- 目的:建立功能水蛭素(recombinant-RGD-Hirudin、r-RGD-Hirudin)的制备方法.方法:构建了重组双功能水蛭素cDNA的表达质粒RGD-Hirudin-pPIC9K,转化入毕赤酵母中,经筛选得...
- 莫炜张艳玲王龙生杨新英宋后燕
- 关键词：基因表达发酵培养分离纯化生物活性
- 文献传递
- 含人纤溶酶原K5基因的腺病毒载体制备和功能研究被引量：2
- 2003年
- 应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA基因 ,与真核表达载体pcDNA3重组 ,形成重组质粒pcDNA3K5 ,与穿梭质粒pShuttle重组得pShuttleK5 ,经与腺病毒DNA重组 ,PCR鉴定正确 ,即为pAd K5。脂质体法将其转染 2 93细胞后 ,制备细胞裂解液 ;噬斑分析法测定病毒滴度为 5× 10 8pfu mL。将病毒以不同的感染系数 (MOI)感染人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,MTT法检测两者的增殖情况 :ECV30 4细胞增殖受抑制 ,而MDA MB 2 31细胞增殖未受明显影响。将感染病毒的ECV30 4细胞接种于ECMatrixTM胶 ,显示内皮细胞分化和毛细血管管腔形成受抑制。表明所构建的含人纤溶酶原K5基因的重组复制缺陷型腺病毒具有抑制ECV30 4细胞增殖、分化和管腔形成的作用而对MDA MB 2 31细胞的生长则无影响。
- 杨健王跃祥官孝群马春姑王龙生宋后燕
- 关键词：腺病毒基因治疗肿瘤
- 重组双功能水蛭素的发酵、纯化和鉴定被引量：12
- 2004年
- 构建了重组双功能水蛭素 (Recombinant RGD Hirudin、r RGD Hirudin )cDNA的表达质粒RGD Hirudin pPIC9K ,转化入毕赤酵母中 ,经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过 3d发酵培养 ,其培养液上清经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析后 ,得到纯度大于 97%、比活性为 12 0 0 0ATU mg的r RGD Hirudin ,回收率大于 6 0 % ,发酵产率为 1g L。纯化后的r RGD Hirudin经过还原SDS PAGE ,抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集分析、质谱分析及等电聚焦分析等方法鉴定 ,证明该表达产物为水蛭素的衍生物 ,具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重功能。
- 莫炜张艳玲王龙生杨新英宋后燕
- 关键词：发酵纯化表达质粒毕赤酵母
- 新型血栓溶解剂-人组织型纤溶酶原激活剂的提纯和大量制备
- 宋后燕王结义贾海燕陈幼妹孙翠娥王龙生陈灏珠顾天
- 人血组织型纤溶酶原激活剂是高效特异的血栓溶解剂，是防治冠心病等血栓性疾病尤其是急性心肌梗塞的特效药。该研究首先从人体黑色素瘤细胞培液提纯和大量制备了ｍｔ－ＰＡ，经免疫鉴定等证明，所制备的ｍｔ－ＰＡ的免疫原性和纯度与ＷＨＯ...
- 关键词：
- 关键词：提纯激活剂心脏血管疾病血栓栓塞
- 重组双功能水蛭素抗凝防栓作用的实验研究被引量：17
- 2006年
- 目的研究注射用重组双功能水蛭素(RGD-Hirudin)抗凝防栓的作用。方法选用36只SD大鼠制备股动脉切断吻合模型,随机分成6组,每组6只。1．生理盐水(对照)组。2．肝素钠组(150U/ kg^(-1)·d^(-1))。3．野生型水蛭素组(0．5mg/kg^(-1)·d^(-1))。4．重组双功能水蛭素组(0．1mg/kg^(-1)·d^(-1))。5．重组双功能水蛭素组(0．2mg/kg^(-1)·d^(-1))。6．重组双功能水蛭素组(O．5ms/kg^(-1)·d^(-1))。术前30 min、术后60 min和术后72 h心脏取血,测定血小板聚集率、aPTT、PT、TT和血浆纤维蛋白原的含量。术后3 d,切取吻合口远、近端血管5mm,作病理切片分析。结果重组双功能水蛭素组(0．1mg/kg^(-1)·d^(-1))的血管通畅率与野生型水蛭素组的疗效相同,优于肝素钠组,随着剂量的加大,治疗效果越好,并有明显的量效关系。血液学指标证明：重组双功能水蛭素能抑制血小板聚集,显著延长aPTT、PT和TT,对血浆纤维蛋白原几乎没有影响。结论重组双功能水蛭素具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重活性,抗凝、防栓作用强。与野生型水蛭素相比,产生相同治疗效果所需剂量小,疗效优于肝素钠和野生型水蛭素。
- 张艳玲莫炜王龙生杨新英宋后燕
