王卫兵
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 重组携带hIL-10基因的腺病毒载体的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建携带人白细胞介素10(hIL-10)基因的腺病毒载体,体外细胞学鉴定其介导的基因表达。方法以pORF-hIL10质粒为模板,PCR扩增hIL-10基因,获得hIL10cDNA片段,酶切并插入线性化pUC19质粒,命名为pUC19-hIL10。再酶切pUC19-hIL10,插入pDC315-EGFP,置换EGFP序列,构建pDC315-hIL10。将质粒pDC315-hIL10和pDC315-EGFP分别共转染至293细胞,产生复制缺陷型重组腺病毒。pDC315-hIL10和pDC315-EGFP分别感染大鼠肝细胞,免疫学方法鉴定目的基因的表达。结果经PCR扩增、鉴定,证明已正确构建重组腺病毒Ad5-hIL10和Ad5-EGFP。pDC315-EGFP能够在大鼠肝细胞介导EGFP的表达,使细胞呈绿色荧光反应;pDC315-hIL10能够在大鼠肝细胞介导hIL-10的表达。结论成功构建了重组腺病毒质粒Ad5-hIL10和Ad5-EGFP,可用于IL-10基因对肝细胞损伤的保护作用的进一步研究。
- 程剑林彬钱前沈晓洁刘艳王卫兵
- 关键词：白细胞介素10腺病毒载体大鼠肝细胞
- 携带hIL-10基因的腺病毒对大鼠肝纤维化的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨在体内试验中携带人白介素(hIL)-10基因的腺病毒是否有较高的转染效率、能够发挥抗炎和抗纤维化的作用以及hIL-10表达时间的长短。方法向四氯化碳(CCl4)诱导的肝脏纤维化模型大鼠尾静脉中注射含携带hIL-10基因的腺病毒载体的林格液,观察其与不经过CCl4处理的肝脏纤维化模型大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝纤维化4项指标(血清透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原)以及病理结果对比;以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为荧光标记,观察腺病毒的转染效率;并使用ELISA、Western blot检测hIL-10在大鼠体内的表达情况。结果携带hIL-10基因的腺病毒有较高的转染效率;在大鼠体内,能够发挥抗炎和抗纤维化的作用;在血浆中,8h hIL-10的表达量达到最高,之后逐渐下降,1周之内代谢完全。结论携带hIL-10基因的腺病毒对肝病的治疗可能有广阔的应用前景。
- 钱前王卫兵程剑
- 关键词：人白介素-10腺病毒肝纤维化
