段豪
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
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- 利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子
- 利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,了解其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用....
- 何乙坤钟敏胡同乐王树桐段豪丁丽王亚南曹克强
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交
- 苹果ACLSV CP基因酵母双杂交诱饵载体构建及自激活鉴定
- 构建了用于苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorot(i)c leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)酵母双杂交试验的诱饵载体,并进行了自激活及毒性验证。以含有ACLSV ...
- 段豪王亚南曹克强
- 关键词：酵母双杂交诱饵载体
- 利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子被引量：2
- 2014年
- [目的]利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,利用生物信息学方法分析其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[方法]首先构建ACLSV CP的酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-CP,转化至酵母菌株Y2H gold中,测定转化菌在SD/-Trp、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上的生长情况,从而判断其在酵母双杂交过程中对报告基因的自激活活性。将p GBKT7-CP及p GBKT7分别转化至酵母菌株Y2H gold,培养不同时间后,用紫外分光光度计测定OD600值,分析p GBKT7-CP对酵母菌生长的影响;然后通过顺序转化的方法自前期已构建好的苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)c DNA文库中钓取与ACLSV CP互作的因子,最终在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上筛选生长良好的蓝色阳性菌落,测定序列,并在Gen Bank中对其进行BLAST分析,根据基因注释推断其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[结果]成功构建了酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-CP,转化至酵母菌株Y2H gold后,转化菌只能在SD/-Trp平板上正常生长,不能在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上生长,表明重组质粒自身不能激活报告基因His及Ade的表达,没有自激活活性。酵母双杂诱饵载体p GBKT7-CP与对照空质粒转化菌生长情况相似,证明诱饵载体对酵母菌没有毒性;筛选到了69个互作寄主基因,包括转录因子活性、碳固定活性、细胞内铁离子平衡、防御反应、水解酶活性、氧化酶活性、氧化还原酶活性、光系统II组件、绑定蛋白等10类蛋白,经生物信息学分析,其中8个寄主基因(Malus3-1、Malus4-2、Malus4q1、Malus31-3、Malus49q2、Malus15-1、Malus6-2、Malus91-4)可能在病毒与寄主互作过程中起重要作用。[结论]分析筛选到的重要寄主蛋白功能,推测ACLSV CP与BZIP类、MYB类转录因子、病程相关蛋白(PR-5、PR-8、PR-10)互作,可�
- 何乙坤钟敏胡同乐王树桐段豪丁丽王亚南曹克强
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交
- 利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子
- 利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,了解其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。...
- 何乙坤钟敏胡同乐王树桐段豪丁丽王亚南曹克强
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交
- 文献传递
- 苹果褪绿叶斑病毒互作寄主因子的筛选
- 苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV)是苹果生产上为害最大的潜隐性病毒之一，广泛分布于世界各地，该病毒单独侵染或与其它病毒混合侵染可致使树势衰弱，发生慢性病害，严重...
- 段豪
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交致病机制
- 文献传递
- 四种苹果病毒快速检测技术研究
- 王亚南赵绪生陶晡王树桐张维宏钟敏张瑜段豪冀志蕊曹克强胡同乐杨军玉杨毅清
- 课题开发了中国主要苹果病毒的快速检测技术。通过筛选检测苹果病毒的引物及內参基因引物组合、PCR体系及程序的优化、检测体系特异性及灵敏度测定、检测可靠性的验证，建立了能够同时检测苹果褪绿叶斑病毒、苹果花叶病毒、苹果茎痘病毒...
- 关键词：
- 关键词：苹果病毒病防治
- 苏俄苹果酵母双杂交cDNA文库的构建与评价被引量：1
- 2014年
- 以苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)组培苗为试材,构建了以真核表达载体pGADT7为基础的苹果酵母双杂交cDNA文库。通过异硫氰酸胍法提取总RNA,Oligotex-dT30mRNA Purification Kit分离纯化mRNA,利用SMART法反转录合成双链cDNA(dscDNA),酶切纯化后的dscDNA与库载体pGADT7连接电转大肠杆菌,经涂板检测,初始文库滴度为2.67×105 cfu/mL,库容量为4.0×106 cfu,随后将文库进行了百万扩增,扩增文库滴度为1.0×108 cfu/mL,库容为1.5×1010 cfu,在文库中随机挑取46个克隆,利用PCR方法测得文库插入片段75%大于1kb,重组率为100%,文库质量较高,符合文库构建的标准,为后续苹果分子生物学研究以及病毒与寄主互作研究奠定了基础。
- 段豪赵绪生钟敏胡同乐王树桐张瑜张珣王亚南曹克强
- 苹果褪绿叶斑病毒互作寄主因子的筛选与鉴定
- 王亚南赵绪生曹克强丁丽王树桐胡同乐陶晡张瑜何乙坤段豪
- 在搭建高效筛选与ACLSV互作寄主因子的酵母双杂交系统的基础上，以ACLSV 外壳蛋白和运动蛋白为诱饵，筛选苏俄苹果（R12740-7A）cDNA文库中能与其互作的蛋白131个，通过生物信息学分析，推测了13个重要蛋白在...
- 关键词：
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒生物信息学
