李西华
- 作品数：8 被引量：49H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 骨保护素(Opg)基因敲除小鼠发生高转换型骨质疏松和动脉钙化(英文)被引量：27
- 2007年
- 骨质疏松以及动脉钙化均是危害极大的临床常见病变,骨保护素(OPG)可能是联系两者的分子之一.构建替换型载体pXpPNT-OPG,利用同源重组,将编码前3个蛋白质结构域的小鼠Opg基因组第二外显子序列剔除掉.通过胚胎干细胞(ES)基因打靶获得了正确重组的ES细胞克隆,ES细胞显微注射后获得嵌合体小鼠,交配传代获得杂合子和纯合子小鼠.RT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,纯合子小鼠没有Opg基因的表达.纯合子小鼠骨量丢失明显,骨生物力学指标明显下降,发生严重的骨质疏松,此外,还有50%以上的纯合子小鼠在早期出现动脉中层钙化.小鼠破骨功能亢进,与此同时,成熟成骨细胞数量增加,矿化功能强于野生型.Opg基因缺失小鼠骨中钙和磷大量流失,而血清中水平没有变化,这提示钙磷代谢异常不是OPG缺失导致动脉钙化的原因.对建立的Opg基因敲除小鼠模型进一步深入的研究,将有助于说明动脉钙化和骨质疏松症相互联系的分子机制,为防治骨质疏松症和动脉钙化的并发提供理论基础支持.
- 许勇杨桦乔建瓯李西华严兰珍王龙徐国江费俭傅继粱王铸钢
- 关键词：骨质疏松动脉钙化骨转换钙磷代谢
- 骨保护素基因敲除对小鼠左心室收缩功能的影响
- 2008年
- 目的探讨左心室收缩功能与骨保护素配体(RANKL)和雌激素在骨保护素(OPG)基因敲除小鼠引起骨质疏松之间的关系。方法建立OPG基因敲除小鼠模型,并设对照组;ELISA法检测小鼠血清OPG和RANKL水平,放射免疫法检测血清雌激素水平;利用心脏超声对心功能进行评价。结果与对照组比较,OPG基因敲除组小鼠的心脏质量、心脏质量与体质量的比值、左室心肌细胞的横切面积均明显增大(P<0.01),左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积也明显增大(P<0.05)。OPG基因敲除组小鼠血清RANKL浓度明显高于对照组(P<0.001),两组血清雌激素水平则无显著差异(P>0.05)。结论OPG缺乏导致血清RANKL水平升高,左心室心肌细胞肥大,但不影响血清雌激素水平。
- 李西华颜美珠许勇庞晓芬王铸钢
- 关键词：骨保护素骨保护素配体左心室小鼠
- 雷洛昔芬对骨保护蛋白基因缺失小鼠的抗骨质疏松作用被引量：1
- 2008年
- 目的利用骨保护蛋白（osteoprotegerin，OPG）基因剔除小鼠模型研究选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬对雌鼠和雄鼠的抗骨质疏松作用。方法取二月龄OPG基因剔除（OPG^-/-）的雌鼠和雄鼠各20只。随机分为雷洛昔芬组（3mg·kg^-1·d^-1）和安慰剂组，另取野生型雌鼠10只作为对照组，1个月后杀鼠取材。测量骨密度、骨生物力学、骨形态计量学，并进行骨组织病理学检查及破骨细胞染色，评价雷洛昔芬的疗效。结果OPG^-/-小鼠呈现明显的骨质疏松表型。雷洛昔芬组的雌鼠较安慰剂组腰椎、股骨骨密度明显增高（均P〈0．05）；骨生物力学结果显示腰椎和股骨最大载荷（P〈0.05或P〈0．01），弹性模量（P〈0．05或P〈0．01），结构韧性（均P〈0．01）均增高，提示骨折风险性下降；破骨细胞染色示腰椎和股骨破骨细胞面积明显减少（均P〈0．01）；HE染色示骨小梁数目增加，连接性上升；骨形态计量学结果显示骨形成率降低（P〈0．05）。雷洛昔芬组的雄鼠与安慰剂组相比较无上述改变。结论选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬在OPG基因缺失的情况下仍可改善雌鼠骨质疏松，其作用不完全依赖于OPG基因。雷洛昔芬对OPG^-/-雄鼠无效。
- 颜美珠庞小芬许勇李西华孔辉陆顺元巩云霞王萍赵咏桔
- 关键词：选择性雌激素受体调节剂骨保护素骨质疏松
- 进行性肌营养不良42例临床分析被引量：2
- 2009年
- 目的探讨进行性肌营养不良(PMD)的临床特点及血清肌酸激酶、肌电图、肌肉病理及免疫组织化学检查对其的诊断价值。方法对42例临床诊断为PMD的患儿的临床特征及肌酸激酶、肌电图、病理资料进行分析。结果42例患儿均为男性。39例有较典型的临床症状,3例为因其他疾病进行检查时偶然发现。所有患儿血清肌酸激酶均显著增高,≤4岁和>4岁且≤8岁组的血清肌酸激酶显著高于>8岁组(P值均<0.01)。34例肌电图检查呈肌源性损害,≤4岁组肌电图检查异常的构成比显著低于>4岁且≤8岁和>8岁组(P值分别为0.019 5、0.013 5)。10例患儿行左侧肱二头肌活组织检查,苏木精-伊红染色和免疫组织化学dystrophin染色均显示为Duchenne型进行性肌营养不良。结论PMD患儿中年幼儿的血清肌酸激酶升高更明显,年长儿的肌电图异常更明显,应重视婴幼儿运动发育迟缓,及早进行血清肌酸激酶筛查。
- 沈瑛吴洁刘彦龙李西华周敏杰葛欣刘晓青
- 关键词：进行性肌营养不良肌酸激酶肌电图免疫组织化学
- 一例Ⅰ型成骨不全家系的基因定位及突变检测被引量：13
- 2007年
- 目的对国内1例成骨不全(OI)家系进行基因突变及突变效应分析,为研究中国人群的成骨不全基因突变特点提供线索。方法对成骨不全Ⅰ型胶原基因COL1A1和COL1A2所在的17号染色体和7号染色体分别进行连锁分析,对致病基因做初步判断,然后用聚合酶链反应扩增致病基因外显子,并测序检出基因突变。结果该家系为COL1A1基因突变,所有患者在该基因的第8个内含子剪切受体位点处为AG→GG(IVS8-2A>G)突变。结论对比COL1A1基因突变数据库,该突变为一新发现突变。
- 吴晓林顾鸣敏崔斌李西华袁文涛陆振虞宋怀东王铸钢
- 关键词：突变分析成骨不全
- 脂联素基因剔除小鼠糖代谢和骨代谢的初步研究
- 2008年
- 目的:研究前期建立的脂联素基因剔除小鼠模型在基础状态的葡萄糖代谢及骨代谢状态。方法:采用长期追踪野生型和该基因剔除纯合子小鼠的体重和空腹血糖水平,并进行葡萄糖耐量(GTT)和胰岛素耐量(ITT)试验以评价该小鼠的葡萄糖代谢能力。对骨代谢的初步研究采用检测小鼠骨密度(BMD)的方式。结果:发现该基因剔除小鼠在6w时,出现空腹血糖比对照组显著低下的现象,而随着鼠龄的增长,血糖水平又趋于正常。GTT和ITT试验证明该基因剔除小鼠无糖尿病或胰岛素抵抗表型。BMD检测亦显示该小鼠在基础状态下无骨密度低下的现象。结论:脂联素基因剔除小鼠在基础状态下并无显著的糖代谢和骨代谢异常。
- 王芳李西华王铸钢
- 关键词：脂联素基因剔除空腹血糖糖代谢骨代谢
- Adiponectin基因剔除LacZ基因敲入小鼠模型的建立被引量：6
- 2006年
- adiponectin是脂肪细胞特异分泌的一种活性蛋白质,具有增加胰岛素敏感性、抗炎及抗动脉硬化等活性.建立adiponectin基因剔除β-半乳糖苷酶基因(LacZ)敲入小鼠模型,可为整体动物水平研究adiponectin基因功能及其表达调控机制等提供理想工具.根据生物信息学方法获得adiponectin基因组序列,设计基因剔除及敲入策略,在adiponectin基因第2和第3号外显子剔除的同时,在其ATG和信号肽序列后顺接LacZ基因完整编码序列,构建完成了Adipo-LacZ-XpPNT基因剔除质粒.通过电穿孔将打靶质粒转入ES细胞,以G418和ganciclovir进行药物筛选,获得药物抗性的ES细胞克隆,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组克隆.将同源重组的ES细胞克隆注入小鼠囊胚得到嵌合体小鼠,嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配产生杂合子小鼠,杂合子间交配获得adiponectin基因剔除LacZ基因敲入纯合子小鼠.经RT-PCR、RNA印迹和ELISA检测证实纯合子小鼠脂肪和血清中adiponectin基因表达呈阴性.RT-PCR、RNA印迹及蛋白质印迹检测发现,LacZ基因在突变小鼠脂肪组织中有特异性表达,其表达谱与内源性adiponectin基因的表达谱一致.但在脂肪组织及外周血中未能检测到LacZ活性,且血清中LacZ蛋白亦呈阴性.由此成功建立了adiponectin基因完全灭活及LacZ基因以内源性adiponectin基因表达谱表达的小鼠模型,为进一步研究该基因功能及其表达调控创造了有利条件.
- 任维华李西华王芳乔建瓯党素英孔辉王龙陆顺元孙霞徐国江傅继梁费俭王铸钢
- 关键词：ADIPONECTIN基因剔除基因敲入
- 免疫荧光法检测氧诱导小鼠视网膜的病变被引量：1
- 2008年
- 目的:观察氧诱导小鼠视网膜的病变情况。方法:出生7d的129Sv/C57BL6J小鼠随机分为实验组和对照组,各28只。实验组置(75±2)%高氧环境、室温(23±2)℃,日光照明,5d后返回空气环境;对照组置(23±2)℃空气环境中饲养。出生后第17d在视网膜平铺片及冰切片上通过免疫荧光法定量检测视网膜血管的增生情况,比较两组星型胶质细胞、小胶质细胞的差异,并通过TUNEL法检测细胞凋亡的情况。结果:出生后第17d实验组视网膜出现无血管区域,新生血管计数高于对照组(P<0.01);星型胶质细胞增多、密集,与相邻的血管间的联系紧密,其小胶质细胞出现活化和增殖,突起少而短,并有胞体肿胀现象;实验组小鼠视网膜存在细胞凋亡。结论:(75±2)%高氧环境、室温(23±2)℃成功诱导小鼠视网膜的病变。
- 赵晓萍陈燕姚怡心李西华沈淑坤陆振虞
- 关键词：免疫荧光新生血管形成星型胶质细胞小胶质细胞
