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卵巢癌细胞与巨噬细胞共培养对B7-H1表达的影响及机制被引量：4: 2013年; 为了探讨卵巢癌细胞与巨噬细胞共培养后对B7-H1表达的影响及其可能机制,利用佛波酯(PMA)诱导THP-1或外周血单核细胞分化为巨噬细胞后,与人卵巢癌细胞株SKOV3体外非接触共培养24 h,qRT-PCR、Western blot以及流式细胞术分别检测SKOV3与巨噬细胞B7-H1的表达;进一步利用NF-κB、JAK2/STAT3、p38 MAPK信号通路的抑制剂作用于共培养体系,检测B7-H1表达的变化,以探讨其机制。结果显示,共培养24 h后,SKOV3及巨噬细胞B7-H1 mRNA和蛋白的表达较非共培养组均显著升高(P<0.05),而阻断NF-κB、JAK2/STAT3、p38 MAPK信号通路后,B7-H1的上调均明显被抑制(P<0.05)。SKOV3与巨噬细胞共培养后B7-H1的表达升高(P<0.05),其机制可能涉及到NF-κB、JAK2/STAT3、p38 MAPK信号通路的激活。; 熊海玉马婷婷王秦董晋豫梁勤东李紫微张维理涂植光; 关键词：卵巢癌 B7-H1 肿瘤相关巨噬细胞

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞微小RNA的差异表达被引量：6: 2013年; 目的探讨强直性脊柱炎患者和健康对照组外周血单个核细胞已知微小RNA（miRNA）差异表达。方法分别构建10例强直性脊柱炎患者和9例健康对照组外周血单个核细胞小RNA文库，并运用新一代高通量Solexa测序技术，进行外周血单个核细胞已知miRNA的检测；运用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）进一步验证部分差异miRNA表达。结果在强直性脊柱炎患者与对照组中小RNA文库中，共获得小RNA总量分别是7511859和10178958，比对上基因组部分小RNA分别是6052911（80．58％）和8476243（83．27％）；已知miRNA分别是267和231个，通过miRNA差异性分析，129个上调miRNA和28个下调miRNA，其表达水平差异有统计学意义（P〈0．05）；FQ—PCR进一步验证了let-7b-3p、miR-146a-5p、miR-155—5p、let-7g-5p和miR-323a-5p差异表达水平与Solexa测序结果相似趋势。结论强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞miRNA的差异表达，可能与强直性脊柱炎发病密切相关。; 蔡安季戴勇李武县李紫微涂植光; 关键词：强直性脊柱炎微小RNA 外周血单个核细胞高通量测序

卵巢癌相关抗原CA125单克隆抗体的制备: 2013年; 目的制备卵巢癌相关抗原CA125R单克隆抗体,并进行鉴定。方法将CA125一段串联重复序列(CA125R)基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-CA125R,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-CA125R融合蛋白。表达的融合蛋白经GST亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备CA125单克隆抗体,Western blot法鉴定抗体的特异性,单克隆抗体亚类测定试剂盒分析单抗的亚类。腹水诱生法大量制备单抗,SDS-PAGE分析单抗的纯度,间接ELISA法检测单抗的效价。结果重组原核表达质粒pGEX-CA125R经双酶切及测序,证实构建正确;纯化的GST-CA125R融合蛋白相对分子质量约44 000,纯度约为95%,可与小鼠抗GST单克隆抗体发生特异性反应;获得1株可稳定分泌抗CA125单克隆抗体的杂交瘤细胞株3-B2,其分泌的单抗能特异识别GST-CA125R融合蛋白和天然CA125糖蛋白,其抗体亚型为IgG2a型;纯化的腹水单抗纯度约为90%,效价达1×106以上。结论成功获得1株能特异性识别天然CA125糖蛋白的单克隆抗体细胞株,并经腹水诱生法大量制备了抗体,为CA125临床检测试剂盒的研发奠定了基础。; 梁勤东马婷婷董晋豫李武县汪先桃李紫微王秦熊海玉涂植光; 关键词：卵巢癌肿瘤相关抗原 CA125 单克隆抗体

内源性β干扰素维持M1型巨噬细胞极化状态抑制肝癌细胞增殖和侵袭被引量：3: 2016年; 目的研究内源性β干扰素(IFN-β)对M1型巨噬细胞极化状态及M1型巨噬细胞介导抗肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外建立单核系肿瘤细胞U937来源的M1巨噬细胞U937-M1模型,用实时定量PCR、ELISA及流式细胞术鉴定其表型。通过干扰IFN-β1基因或用抗体中和IFN-β,检测M1/M2巨噬细胞表型标志物表达的变化;用实时定量PCR和Western blot法检测干扰素调节因子1(IRF1)及IRF5的表达。收集不同处理组的U937-M1细胞培养上清为条件培养基(CM),分别培养Hep G2细胞及SMMC-7721细胞,用CCK-8法和TranswellTM侵袭实验分别检测CM对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。结果与未激活型U937-M0细胞相比,U937-M1细胞白细胞介素12p35(IL-12p35)、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CD86表达显著增强;而两组均低表达CD206。阻断內源IFN-β作用后,与U937-M1细胞相比,上述M1型巨噬细胞相关表型标志物表达明显减弱;反之,M2型巨噬细胞表型标志物IL-10和CD206表达增强;且IRF1及IRF5表达均减弱;阻断IFN-β作用后,M1型巨噬细胞对肝癌细胞增殖及侵袭的作用从抑制转变为促进。结论阻断內源IFN-β后,M1型巨噬细胞极化状态以及U937-M1介导抗肝癌效应受到抑制;IFN-β可能参与调节IRF1和IRF5的表达,维持M1型巨噬细胞极化状态和功能。; 谢昌利郭变琴刘翠颖林艳吴碧涛王秦李紫微涂植光; 关键词：增殖

唐氏综合征胎儿脐带血单个核细胞microRNA差异表达研究被引量：2: 2012年; 目的检测唐氏综合征(Down syndrome,DS)胎儿和正常胎儿脐带血单个核细胞全基因组microRNA(miRNA)的差异表达。方法运用Solexa高通量测序技术对6例DS胎儿(DS组)和6例正常胎儿(对照组)脐带血单个核细胞miRNA表达水平进行检测,比较分析2组miRNA表达的差异,并用Stem-loop qRT-PCR对Solexa测序结果进行验证。结果 2组样本显著性差异表达miRNA有167种,8种miRNA在DS组样本中表达上调,159种miRNA表达下调;还有38种和139种miRNA分别特异性表达于DS组和对照组样本中;21号染色体上5个miRNA,除miR-802在DS组中高表达外,miR-99a、let-7c、miR-125b和miR-155均低表达。结论 DS胎儿和健康胎儿脐带血单个核细胞miRNA的表达差异显著,可能与DS胎儿免疫系统的发育缺陷及DS胎儿循环T、B淋巴细胞数目的减少有关;差异显著和特异性表达的miRNA可作为DS胎儿潜在的产前筛查诊断指标。; 李武县徐勇李紫微乔王敏曾君戴勇涂植光; 关键词：微RNAS 唐氏综合征胎血

环氧化酶-2基因shRNA重组腺病毒的构建及鉴定: 2013年; 目的构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签的环氧化酶-2(cyclooxyge-nase-2,COX-2)基因shRNA重组腺病毒,并观察其对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响。方法将前期构建的真核表达质粒pGenesil-1-COX-2-shRNA及阴性对照质粒pGenesil-1-HK的表达启动子U6及shRNA序列亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAdTrack-U6-HK-EGFP,酶切及测序鉴定正确后,经PmeⅠ线性化,转化感受态AdEasier,构建重组腺病毒质粒pAd-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAd-U6-HK-EGFP,经PacⅠ线性化,转染AD293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP和Ad-U6-HK-EGFP,经3轮扩增后,测定滴度。RT-PCR和Western blot法检测感染细胞中COX-2基因mRNA的转录及蛋白的表达,MTS法观察重组腺病毒对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响。结果重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAdTrack-U6-HK-EGFP及重组腺病毒质粒pAd-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAd-U6-HK-EGFP经酶切和测序鉴定均构建正确,并成功转染AD293细胞,经包装和3轮扩增后,重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP和Ad-U6-HK-EGFP的滴度分别为1.4×1012和2.0×1012pfu/ml。重组腺病毒感染的SMMC-7721细胞中COX-2基因mRNA、蛋白相对表达量及细胞增殖能力均明显低于空白对照组及阴性对照组(P均<0.05)。结论成功构建了COX-2基因shRNA重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP,且可显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,为进一步研究COX-2作为肝癌基因治疗靶点及机制奠定了基础。; 董晋豫王秦梁勤东李武县马婷婷熊海玉李紫微涂植光; 关键词：环氧化酶-2基因短发夹RNA 腺病毒基因治疗

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中急性时相反应蛋白的差异表达研究被引量：3: 2013年; 目的检测强直性脊柱炎外周血单个核细胞中急性时相反应蛋白表达水平,探讨其与强直性脊柱炎发病的关系。方法收集10例强直性脊柱炎患者和9例健康对照,提取外周血单个核细胞,采用相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中的急性时相反应蛋白表达水平,并运用Western blot方法进行验证差异表达的触珠蛋白(Hp)和铜蓝蛋白(Cp)。结果基于质谱分析的蛋白组学显示,19种急性时相反应蛋白在强直性脊柱炎外周血单个核细胞中蛋白表达水平明显升高(P<0.05),主要包括补体C3、纤粘蛋白(FN1)、血浆酶原(PLG)、转铁蛋白(TF)、Hp和Cp;Western blot检测Hp和Cp的表达水平与相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术检测结果具有相同的变化趋势。结论急性时相反应蛋白差异表达可能参与了强直性脊柱炎的发生、发展,有望作为强直性脊柱炎的临床生物标记物。; 蔡安季戴勇李武县李紫微涂植光; 关键词：强直性脊柱炎外周血单个核细胞

IRF1对M1巨噬细胞极化及其抗肿瘤效应的影响被引量：10: 2017年; 目的研究IRF1对M1巨噬细胞极化及M1介导的抗肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建单核细胞U937来源M1巨噬细胞模型(U937-M1),将细胞分为4组:用PMA诱导的未活化巨噬细胞组(M0),用PMA,IFN-γ和LPS处理的M1型巨噬细胞组(M1),用siRNA干扰IRF1的M1型巨噬细胞组(si IRF1)以及阴性干扰的M1型巨噬细胞组(si C)。用流式细胞术检测M1/M2特异表面标志物CD86/CD206的表达;q PCR检测M1/M2相关基因(IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α/IL-10)及IFNB1的表达;ELISA检测IL-12p70,IL-10及IFN-β的表达;Western blot检测IRF1及IRF5的表达;CCK8和流式细胞术分别检测Hep G2及SMMC-7721增殖和凋亡。结果与U937-M1组相比,干扰IRF的M1组CD86表达降低,但CD206升高(P<0.05);mRNA水平上,IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α以及IFNB1表达降低,但IL-10表达增高(P<0.01);蛋白水平上,IL-12p70,IFN-β及IRF5表达降低,但IL-10表达增高(P<0.05)。IRF1干扰后,M1巨噬细胞促进肝癌细胞增殖、抑制其凋亡(P<0.05)。结论干扰IRF1后,M1巨噬细胞极化状态受损,甚至部分向M2型转变;其抗肿瘤效应转变为促肿瘤效应;且IRF1可能参与调节IFN-β与IRF5的表达。; 谢昌利刘翠颖林艳吴碧涛王秦李紫微涂植光; 关键词：抗肿瘤

组织因子途径抑制物-2对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响被引量：1: 2013年; 目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)对人肝癌Hep3B细胞株裸鼠皮下移植瘤生长以及肿瘤血管生成的作用。方法:将TFPI-2稳定表达的Hep3B细胞(Hep3B-TFPI-2组)、转染空载体PCDNA3.1的Hep3B细胞(Hep3B-V组)及未进行转染的Hep3B细胞(Hep3B-P组)分别接种于裸鼠皮下,待皮下成瘤后,每隔3d测量1次肿瘤大小,并绘制出肿瘤体内生长曲线。3周后处死裸鼠,测定肿瘤体积,提取组织中总RNA和蛋白,实时荧光定量PCR(real-time uorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)检测肿瘤组织中TFPI-2和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA水平;蛋白质印迹法检测肿瘤组织中TFPI-2和VEGF蛋白表达水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织中TFPI-2蛋白表达水平和肿瘤微血管密度(micro vessel density,MVD)。结果:Hep3B-TFPI-2组最终肿瘤体积明显小于Hep3B-V组和Hep3B-P组(P<0.05)。Hep3B-TFPI-2组肿瘤组织的TFPI-2mRNA表达丰度和蛋白水平明显高于其余2组(P<0.05);而Hep3B-TFPI-2组VEGFmRNA表达丰度和蛋白水平明显低于其余2组,与2个对照组相比,VEGF蛋白表达抑制率分别为19.8%和23.5%(P<0.05)。Hep3B-TFPI-2组MVD计数明显低于其余2组(P<0.05)。结论:TFPI-2能抑制人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤血管生成。; 秦晓林李武县李紫微涂植光张莉唐景云陈敬波徐勇; 关键词：丝氨酸蛋白酶抑制剂异种移植模型抗肿瘤试验新生血管化组织因子途径抑制物-2

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李紫微

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