李旭宏 作品数:41 被引量:173 H指数:6 供职机构: 重庆三峡中心医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 重庆市卫生局科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
靶向腺病毒载体介导的EGFP基因在甲胎蛋白阳性肝癌细胞的特异表达 被引量:4 2005年 目的建立一种在甲胎蛋白(AFP)阳性的肝癌细胞中靶向表达目的基因的重组腺病毒载体。方法基于腺病毒载体Adeno-XTMExpressionsystem,以300bpAFP特异启动子替换穿梭质粒Pshuttle中CMV启动子,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因亚克隆至Pshuttle,HEK293细胞包装腺病毒,收集病毒后分别转染人正常肝脏LO2细胞,人肝癌HepG2细胞及HeLa细胞;通过Northern杂交检测EGFP基因在3种细胞中的转录水平,荧光显微镜下观察3种细胞中绿色荧光蛋白的表达。结果Northern杂交显示,HepG2细胞中有大量EGFP基因的转录,而正常肝细胞LO2和HeLa细胞中仅能检测到微量基因的转录;荧光显微镜检测发现HepG2细胞内有强绿色荧光表达,而在LO2以及HeLa细胞内见极弱绿色荧光。结论在AFP特异启动子作用下,腺病毒携带的目的基因在AFP阳性的肝癌细胞中得到显著转录和表达,而在非AFP阳性细胞仅微量转录,蛋白表达极弱。该腺病毒载体可作为AFP阳性的肝癌基因靶向治疗的适宜载体。 石毓君 刘长安 龚建平 李旭宏 彭勇 梅英 米粲 霍艳英关键词:甲胎蛋白类 腺病毒载体 白细胞介素-1受体相关激酶-4短发夹RNA阻断库普弗细胞激活效应的实验研究 被引量:4 2005年 目的探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)特异性短发夹RNA(shRNA)阻断内毒素诱导的库普弗细胞(KCs)激活效应的可行性。方法构建两对表达IRAK-4-shRNA的阳性载体质粒(pSⅡRAK-4-A,pSⅡRAK-4-B)及一对阴性载体质粒(pSⅡRAK-4-C)。分离培养小鼠KCs,分为正常对照组,RNA干扰(RNAi)对照组(转染pSⅡRAK一4 C)与RNAi抑制组(转染pSⅡRAK-4-A, pSⅡRAK-4-B)。质粒转染后24 h,加入0.1 μg/ml脂多糖(LPS)。6 h后,蛋白免疫印迹法及逆转录-聚合酶链反应测定IRAK-4蛋白和mRNA表达水平;酶联免疫吸附法检测0、1、3、6、12 h后KCs的核因子- κB(NF-κB)活性及培养上清液中肿瘤坏死因子α含量。结果RNAi抑制组IRAK-4表达水平,以及LPS刺激后NF-κB活性、肿瘤坏死因子α峰值均明显低于正常对照组和RNAi对照组,t值分别为22.50, 4.18及958.49,P<0.01;尤其是pSⅡRAK-4-A组,抑制效果明显优于pSⅡRAK-4-B,t值分别为12.60, 3.36及256.39,P<0.01。结论以IRAK-4为靶点的shRNA能有效的阻断内毒素诱导的KCs激活效应。 刘作金 李生伟 刘长安 游海波 彭勇 李旭宏 陈先锋 龚建平关键词:库普弗细胞 白细胞介素-1受体 短发夹RNA 细胞激活 相关激酶 阻断 阻断Kupffer细胞TIM-4功能对小鼠肝移植排斥反应的影响 2017年 目的探讨阻断Kupffer细胞(KCs)TIM-4功能对诱导小鼠原位肝移植术后免疫耐受的产生以及相关机制的研究。方法建立小鼠原位肝移植急性排斥反应模型,随机分为Sham组、Control mAb组、TIM-4 mAb组,术后组化检测KCs活化,提取KCs,Western blot和PCR检测肝脏TIM-4表达,检测血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总胆红素,ELISA检测肝组织匀浆肿瘤坏死因子α、干扰素γ、CC族趋化因子2,激光共聚焦检测KCs TIM-4表达,苏木精伊红染色(HE)染色观察肝组织排斥反应,Western blot检测肿瘤坏死因子α、干扰素γ、CC族趋化因子2、p-P65、p-P38表达,流式检测CD25+Foxp3+T细胞的产生。氯膦酸二钠脂质体(CL)可耗竭肝脏KCs,用CL处理移植模型,HE染色观察肝组织排斥反应。结果肝移植术后KCs的活化随着时间变化逐渐增加,术后1、3、7 d TIM-4蛋白以及m RNA表达水平明显高于Sham组(P<0.05),术后7 d谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总胆红素、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、CC族趋化因子2水平高于Sham组(P<0.05),HE染色TIM-4 mAb组小鼠肝病理改变排斥活动指数平均得分为2.67±0.75,集中于轻度排斥反应,明显低于Control mAb组病理改变排斥活动指数得分8.17±0.69(P<0.05),且TIM-4mAb组小鼠平均存活时间53.8±6.4 d明显长于Control mAb组平均存活时间14.5±2.9 d(P<0.05)。CL处理供体小鼠,HE染色CL+TIM-4 mAb组和CL+Control mAb组病理改变排斥活动指数平均得分分别为8.01±0.64、7.93±0.56,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot检测TIM-4 mAb组KCs p-P65以及p-P38蛋白,明显低于Control mAb组(P<0.05)。流式示TIM-4 mAb组肝脏i Treg细胞明显增多。结论阻断KCs TIM-4可能通过核转录因子κB以及分裂原激活的蛋白激酶通路减少移植后排斥反应发生,诱导i Treg细胞的生成,致使宿主对移植物产生免疫耐受。 李学强 李旭宏 段世刚 徐雪松 刘一鸣 李金政 龚建平 吴皓关键词:KUPFFER细胞 经皮胆囊穿刺造瘘术联合腹腔镜胆囊切除术治疗亚急性胆囊炎 被引量:13 2017年 目的探讨经皮胆囊穿刺造瘘术联合腹腔镜胆囊切除术(LC)治疗亚急性胆囊炎的临床效果。方法回顾分析涪陵中心医院肝胆外科2010年10月至2015年9月收治的143例亚急性胆囊炎患者的临床资料,其中75例采用经皮胆囊穿刺造瘘联合LC治疗,68例采用急诊LC治疗,比较两组的治疗效果。结果与急诊LC组相比,联合组术中胆囊炎症水肿明显减轻(P<0.01),手术时间明显缩短(P<0.01),术中出血明显减少(P<0.01),中转开腹及手术并发症发生率明显降低(P<0.05)。结论经皮胆囊穿刺造瘘术能有效减轻胆囊的炎症水肿,使亚急性胆囊炎患者的LC手术具有更高的成功率和安全性。 陈先锋 李旭宏关键词:腹腔镜 胆囊炎 胆囊切除术 胆漏 库普弗细胞内毒素耐受时白细胞介素-1受体相关激酶-4的表达变化 被引量:3 2006年 目的观察库普弗细胞(KCs)内毒素耐受形成后白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)表达的变化,探讨KCs内毒素耐受形成的相关机制。方法分离培养Balb/c小鼠KCs,分为非内毒素耐受组与内毒素耐受组[给予脂多糖(LPS)10ng/ml预处理24h]。用LPS 100ng/ml刺激后,蛋白免疫印迹法及逆转录聚合酶链反应法测定两组细胞IRAK-4蛋白及mRNA的表达水平;酶联免疫吸附法检测两组细胞核因子-kB(NF-kB)活性及培养上清液肿瘤坏死因子α(TNFα)含量。结果 LPS刺激在两组细胞均引起IRAK-4 mRNA表达及NF-kB活性增强、TNFα释放增加,但内毒素耐受组3种指标的高峰值明显低于非内毒素耐受组(t值分别为12.4、17.4、138.9,P值均<0.01)。结论 LPS预处理可诱导KCs形成内毒素耐受状态,IRAK-4表达受到抑制可能是KCs内毒素耐受形成的机制之一。 李生伟 刘作金 刘长安 李旭宏 游海波 陈先锋 龚建平关键词:库普弗细胞 内毒素类 RNA干扰-ds RNA介导的基因沉默 被引量:7 2004年 李旭宏 龚建平 刘长安关键词:RNA干扰 SIRNA 转录后基因沉默 TPN联合生长激素对胃肠道恶性肿瘤患者术后应激反应的抑制作用 被引量:3 2006年 目的探讨胃肠道恶性肿瘤患者术后完全胃肠外营养(TPN)基础上给予生长激素(GH)促进机体合成代谢的机理。方法将94例胃肠道恶性肿瘤手术患者按随机数字表法随机均分为TPN组和TPN+GH组,术后第1、3及7d分别测定其TNFα、IL1、IL6及C反应蛋白(CRP)值。结果TPN+GH组的TNFα、IL1、IL6及CRP值在术后第1、3及7d均低于TPN组相应时相。结论外源性GH可抑制胃肠道恶性肿瘤患者术后TNFα、IL1、IL6及CRP的产生,进而阻断炎症因子诱导的GH不敏感反应所致的高分解代谢为特征的合成代谢障碍,促进机体合成代谢。 陈先锋 刘作金 李旭宏 游海波 龚建平关键词:生长激素 应激反应 完全胃肠外营养 氧化物酶体增殖物激活受体γ对炎症状态下C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇外流的影响 2017年 目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对巨噬细胞胆固醇外流的影响。方法 :建立高脂、急性炎症等不同病理状态的C57BL/6小鼠模型并分离培养其腹腔巨噬细胞,观察细胞PPARγ与IκB-α表达变化;采用PPARγ激动剂ciglitazone和PPARγ反义寡核苷酸预处理正常腹腔巨噬细胞,体外观察内毒素刺激对细胞胆固醇外流的影响。结果:高脂组和LPS组PPARγ蛋白表达较正常对照组均明显增高(P<0.05),高脂组IκB-α表达较正常组轻度降低,两种饮食经LPS刺激后IκB-α表达较正常组均显著降低(P<0.01)。胆固醇外流测定结果显示,高脂组细胞胆固醇外流较正常组明显增强(P<0.05),高脂及正常饮食组经LPS刺激后较正常对照组均明显减弱(P<0.05)。PPARγ激动剂预处理腹腔巨噬细胞,LPS刺激后PPARγ蛋白表达较正常对照组升高(P<0.05),IκB-α蛋白表达低于正常组(P>0.05)。PPARγ反义寡核苷酸预处理亦可导致巨噬细胞胆固醇外流受到抑制,但抑制程度高于正常对照组。结论:PPARγ激动剂可增强巨噬细胞胆固醇外流,而抑制PPARγ的表达则抑制C57小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇外流。 游海波 何堃 李钺 龚建平 李旭宏关键词:PPARΓ 炎症 小鼠 超声引导下经皮胆囊穿刺引流术治疗急性重症胆管炎31例临床分析 被引量:3 2015年 目的:探讨超声引导下经皮胆囊穿刺引流术治疗急性重症胆管炎的临床疗效和应用价值。方法对31例急性重症胆管炎患者治疗采用超声引导下经皮胆囊穿刺引流术。结果超声引导下经皮胆囊穿刺引流成功率为100%,无出血、胆漏及副损伤等相关并发症。术后1例死于多器官衰竭,另外30例临床症状快速缓解、全身情况显著改善。术后2~6周,根据患者的情况分别施行不同的二期手术,术后均康复出院。结论经皮胆囊穿刺引流术具有操作简便、微创、安全等优点,适用于伴有胆囊肿大的急性重症胆管炎患者的过渡性治疗,为二期手术治疗创造良好的条件。 何天时 李旭宏 薛浩 严骏 李祥 颜朗关键词:急性重症胆管炎 胆漏 IRAK-4活性在脂多糖预处理减轻肝脏缺血再灌注损害中作用的实验研究 2006年 目的:观察脂多糖(LPS)预处理后白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)表达水平在大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)早期的变化,探讨LPS预处理减轻肝脏缺血再灌注损害(I/R I)的相关机制。方法:雄性SD大鼠,随机分为正常对照组,缺血再灌注组(I/R组)和LPS预处理组(LPS组)。正常对照组未予任何处理;LPS组第1 d经尾静脉给予脂多糖0.1mg.kg-1,第2、3、4、5 d给予0.5 mg.kg-1;I/R组给予等体积0.5 mL无菌PBS液。第8 d,建立肝脏缺血再灌注模型。再灌注后0 m in、60 m in及180 m in,蛋白免疫印记法及逆转录-聚合酶链式反应测定肝组织的IRAK-4蛋白和mRNA表达水平;酶连免疫吸附法检测肝组织NF-κB活性及血清TNF-α含量。结果:再灌注0 m in,IRAK-4蛋白与mRNA表达水平依次为LPS组>I/R组>正常对照组(P<0.01),NF-κB活性以及TNF-α含量LPS组与I/R组差异无显著(P>0.05),但均高于正常对照组(P<0.01);再灌注后60 m in及180m in,LPS组的IRAK-4蛋白与mRNA表达水平,NF-κB活性以及TNF-α含量却明显低于I/R组(P<0.01)。结论:抑制IRAK-4表达是LPS预处理减轻肝脏I/R I的重要机制之一。 刘作金 刘长安 游海波 陈先锋 李旭宏 龚建平关键词:再灌注损伤 脂多糖类