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肿瘤特异性hTERT启动子与Survivin启动子在肺癌A549细胞中的转录活性研究被引量：5: 2009年; 目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据。方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基因;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别构建3种启动子调控的、以红色荧光蛋白CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-H-RED、pGL-LH-RED和pGL-S-RED。将重组质粒用脂质体分别转染A549和MRC-5细胞,72h后用Imagepro-Plus6.0分析3种启动子在相同时间内启动红色荧光蛋白的表达水平。结果:重组质粒在A549细胞中观察到了红色荧光,在MRC-5细胞中无红色荧光。pGL-S-RED质粒在A549细胞中表达最强,pGL-LH-RED次之,pGL-H-RED最弱,3种质粒在A549细胞中的荧光强度(IOD)分别为201.17、171.70和136.34。结论:所克隆的hTERT启动子和Survivin启动子均表现出肿瘤特异性,其中Survivin启动子在肺癌A549细胞中具有最好的启动效应,可望开发成为肺癌靶向性基因治疗工具。; 李奕璇陈全朱大冕; 关键词：人端粒酶逆转录酶 SURVIVIN基因肺癌

肿瘤特异性启动子调控SEA基因抗肺癌的实验研究: 目的：本研究首先以红色荧光蛋白为目的基因，比较肝癌来源的hTERT启动子、肺癌来源的hTERT启动子以及Survivin启动子肿瘤特异性启动子在肺癌A549中的启动活性;选择在A549肺癌细胞中有较强启动活性的Surv...; 李奕璇; 关键词：肺癌红色荧光蛋白 SEA基因; 文献传递

Survivin启动子调控的EGFP基因真核表达质粒的构建及其在肺癌细胞中的特异性表达被引量：4: 2009年; 目的构建由Survivin启动子调控的EGFP基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达。方法以A549细胞基因组DNA为模板,PCR扩增Survivin启动子,替换pEGFP-C1载体中的CMV启动子,构建携带Survivin启动子的pEGFP-C1真核表达质粒pEGFP-C1/Surp,转染A549细胞及人胚肺成纤维细胞MRC-5,在荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果重组表达质粒pEGFP-C1/Surp经双酶切和测序鉴定,证明构建正确。转染A549细胞和MRC-5细胞后,在荧光显微镜下可见A549细胞有较强的绿色荧光,而MRC-5细胞则未见绿色荧光。结论已成功构建以Survivin启动子为调控序列、EGFP为标示蛋白的真核表达质粒,且具有较强的肿瘤特异性启动活性,为进一步开发肿瘤靶向性基因治疗载体奠定了基础。; 朱大冕陈全李奕璇朱道银; 关键词：SURVIVIN 启动子增强型绿色荧光蛋白真核表达肺癌细胞

肿瘤特异的sea基因真核表达质粒的构建及在肺癌细胞中的功能研究被引量：1: 2009年; 构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核表达质粒,检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达以及表达产物的超抗原活性。以PCR法扩增sea基因,以含有Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒为基础,构建pGL-S-SEA真核表达质粒。用脂质体转染A549细胞,以RT-PCR法检测sea基因表达水平。制备健康献血者PBMC,用pGL-S-SEA质粒转染A549细胞的上清液和细胞裂解液进行PBMC刺激试验,以MTT法检测其促细胞增殖效应。结果显示,成功构建Survivin启动子调控的真核表达质粒pGL-S-SEA。重组质粒在A549细胞中启动了sea基因的表达,其转录强度为内参(GADPH基因)的65.96%,在对照MRC-5细胞中无明显表达。该质粒转化A549细胞的裂解液具有促进人PBMC增殖活性、上清液无明显促PBMC增殖作用,裂解液组、上清液组和PHA阳性对照组的刺激指数分别为1.29、0.95和1.58。结论成功构建pGL-S-SEA质粒,其在A549细胞的表达产物具有诱导人PBMC增殖的超抗原活性,为下一步将其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础。; 朱大冕陈全李奕璇朱道银; 关键词：葡萄球菌肠毒素A 肺癌基因治疗

减毒沙门菌靶向肿瘤基因治疗: 2007年; 保持一定侵袭力的减毒沙门菌为低致病性营养缺陷型兼性厌氧菌，能在肿瘤部位富集而靶向肿瘤组织，从而发挥肿瘤基因治疗载体菌作用或产生局部抗肿瘤效应。通过口服方式给予重组减毒沙门菌，将编码对肿瘤具有治疗作用蛋白的外源基因等有效递送至肿瘤组织，是一种较为安全的肿瘤基因治疗途径。; 李奕璇陈全; 关键词：沙门菌属肿瘤基因疗法

Survivin启动子调控sea基因真核表达质粒的构建及其在肺癌细胞中的特异性表达被引量：2: 2009年; 目的构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达。方法以金黄葡萄球菌(ATCC25923)基因组为模板,PCR扩增sea基因。用sea基因替代以Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒中的Red基因,构建真核表达质粒pGL-S-SEA。酶切及测序鉴定后,用脂质体转染A549细胞和MRC-5人胚肺成纤维细胞,RT-PCR检测两种细胞sea基因的转录情况。结果Survivin启动子调控的、以超抗原SEA编码序列CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-S-SEA构建正确,并在A549细胞中启动了sea基因的转录,其强度为内参基因(GAPDH)的65.96%,而在MRC-5细胞对照中未检测到sea基因的转录。结论已成功构建Survivin启动子调控的sea基因真核表达质粒,Survivin启动子可在转录水平特异性地调控sea基因在A549细胞内表达,为下一步以其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础。; 李奕璇陈全朱大冕; 关键词：SURVIVIN启动子超抗原葡萄球菌肠毒素A

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李奕璇