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氧浓度非敏感性低氧诱导因子-1α表达载体的构建及其在PC12细胞系中的表达被引量：1: 2010年; 目的构建大鼠非氧浓度敏感性低氧诱导因子1α（HIF-1α）真核表达载体并观察其在PCI2细胞系中的表达。方法应用RT—PCR从脊髓损伤区域的细胞总RNA中扩增HIF—1αcDNA，采用重叠延伸PCR的方法克隆获得缺失氧敏感性降解结构域（ODD）的HIF-1α突变体基因克隆，采用质粒pEGFP—C1构建重组真核融合表达载体，将其转入培养的PC12神经细胞系中，应用所融合的绿色荧光蛋白的表达和Western blot鉴定其在细胞内的表达。结果通过重叠延伸PCR的方法成功扩增得到非氧浓度敏感性的HIF1α突变体基因（HIF1αAODD）序列，并构建了过量表达缺失ODD的转录调控因子HIF1α突变体的重组表达质粒（pEGFPCI一HIF1αAODD）。将其转染PC12细胞系后，Westernblot和绿色荧光蛋白结果均表明HIF—letAODD蛋白能在PC12神经细胞系中正确表达。结论成功构建了pEGFPCI一HIF1αAODD真核表达载体并在PC12细胞系中观察到融合蛋白表达。; 赵宁辉李冉黄晓玮; 关键词：低氧诱导因子1Α 质粒转染

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李冉