徐智勇
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- HIV-1DNA疫苗优化改造及免疫途径优化
- 张舟徐智勇刘勇齐智邵一鸣
- 新一代HIV DNA疫苗优化设计及DNA疫苗导入技术的研究
- DNA疫苗安全可靠,可以同时诱导体液免疫和细胞免疫,是具有广阔应用前景的新型疫苗。但目前多数处于临床试验阶段的DNA疫苗尚存在诸多缺陷,最主要的问题是免疫原性较差。如何有效提高DNA疫苗的免疫原性是DNA疫苗研究领域亟待...
- 徐智勇
- 关键词：DNA疫苗HIV-1优化设计基因枪
- 文献传递
- HIV-1 CN54 Pol P51抗原高效表达、纯化、复性及在抗体检测中的应用被引量：2
- 2010年
- 为获得可溶性高纯度HIV-1中国株CN54PolP51抗原,将携带CN54polp51基因的重组质粒pTHioHisA51转化大肠杆菌BL21codonplus-RIL,用IPTG进行诱导表达。用Chelating SepharoseFF-Ni亲和层析柱及DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化目的蛋白,采用透析复性法得到可溶性抗原,Western blotting检测目的蛋白。用纯化的P51抗原蛋白标记辣根过氧化物酶及包被酶标板进行双抗原夹心法ELISA检测。结果显示P51以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%,经两步层析和透析复性,目的蛋白纯度大于95%。Western blotting和双抗原夹心法ELISA检测均显示了良好的灵敏度和特异性。本研究可以为HIV-1疫苗研究和开发检测试剂提供支持。
- 侯爵孙静徐智勇范文玲张怡轩刘勇郝彦玲
- 关键词：纯化复性抗体检测
- 体内电穿孔在质粒介导的基因转移及DNA免疫中的应用被引量：3
- 2010年
- 目的 研究体内电穿孔技术对于质粒DNA介导的体内基因表达以及HIV-1 Env DNA疫苗免疫效果的影响.方法 将携带荧光素酶Luciferase基因的表达质粒p1.0-Luc和携带HIV-1 CN54 env基因的DNA疫苗质粒p1.0-gp1455m通过单独肌肉注射或肌肉注射后加电穿孔两种不同方法 注射小鼠.用IVIS（R）活体成像系统实时检测Luciferase报告基因在体内的表达情况.用ELISA检测HIV-1 Env特异的抗体反应,用IFN-γ ELISPOT检测HIV-1 Env特异的T细胞免疫反应.结果 体内电穿孔技术可以显著提高Luciferase在小鼠体内的表达水平,幅度达35倍.HIV-1 Env DNA疫苗免疫结果 显示,8μg质粒剂量电穿孔途径诱导的体液和细胞免疫应答强于40μg质粒剂量单纯肌肉注射组;体内电穿孔途径免疫2次与单纯肌肉注射途径免疫3次诱导的体液和细胞免疫应答水平相当.结论 体内电穿孔技术可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗的免疫应答.
- 张舟徐智勇陈佩周芳张宪省刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗基因表达免疫应答
- 质粒剂量和免疫次数对基因枪免疫DNA疫苗免疫反应的影响被引量：3
- 2010年
- 目的研究质粒剂量和免疫次数对基因枪免疫DNA疫苗免疫反应的影响。方法构建携带HIV-1 Env gp145基因的DNA疫苗质粒p1.0-Env,分别采用肌肉注射和基因枪方法免疫BALB/c小鼠。其中,基因枪免疫采用不同剂量或不同次数。ELISA法检测小鼠体内Env特异性抗体水平。结果基因枪免疫小鼠诱导的抗体水平显著高于肌肉注射免疫。在0.1～2.25μg剂量范围内,基因枪免疫小鼠体内的Env特异性抗体水平随疫苗剂量的增加不断提高。加大免疫剂量至5μg和10μg,不能提高体液免疫反应水平。基因枪免疫1次和2次所诱导的特异性抗体水平很弱,免疫3次可诱导高水平的抗体应答。结论基因枪免疫能有效提高DNA疫苗所诱导的抗体应答,小鼠的最适免疫剂量约为2.25μg,2.25μg免疫3次可诱导较强的体液免疫反应。
- 徐智勇张舟陈佩周芳邵一鸣刘勇王立良
- 关键词：疫苗DNA免疫次数
