彭一波
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 供职机构：西南大学农学与生物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用酵母双杂交系统检测SCR蛋白不同区段与SRK蛋白胞外域高变区的相互作用
- 薛丽琰罗兵张贺翠杨永军杨红彭一波朱利泉
- eSRK_s酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测
- 2011年
- 为研究甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域高变区(eSRKs)的相互作用,构建了eSRKs基因的酵母双杂交诱饵载体,检测其自激活作用,并验证是否适用于后续的相互作用研究.以甘蓝B3为材料,通过RT-PCR技术获得eSRKs目的基因片段,将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-eSRKs;测序正确后,将重组质粒转入Y2HGold,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性以及对报告基因有无自激活作用,结果获得了正确的eSRKs基因片段,并成功克隆到pGBKT7诱饵载体中,且转化在有诱饵载体pGBKT7-eSRKs的Y2HGold在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,表明表达产物对酵母细胞无毒性;显色反应结果表明对报告基因也无自激活作用,为下一步利用酵母双杂交系统检测SCR蛋白与SRK蛋白胞外域高变区的相互作用奠定基础.
- 杨红朱利泉彭一波罗兵杨昆张贺翠吴志刚黄丹高启国
- 关键词：酵母双杂交自激活作用
- 利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝SCR与SRK胞外域片段间的相互作用被引量：8
- 2011年
- 【目的】利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域。【方法】以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的全长SCRB3、SCRB3-1、SCRB3-2的重组诱饵质粒;以pGADT7为载体的全长eSRKB3、eSRKB3-1、eSRKB3-2的重组激活域(AD)质粒。用PEG/LiAc法将上述重组诱饵质粒转化感受态酵母菌Y2HGold,重组AD质粒转化感受态酵母菌Y187;Y2HGold[pGBKT7-SCRB3-s]、Y187[pGADT7-eSRKB3-s]两两融合培养,观察交配菌在SD/-Trp-Leu/x-α-gal/AbA(DDO/x/A)、SD/-Trp-Leu-Ade-His/x-α-gal/AbA(QDO/x/A)平板上的生长情况。【结果】酵母双杂交重组表达载体构建成功,且无毒性和自激活作用产生;9个试验组中只有SCRB3-1、SCRB3-2与eSRKB3-1、eSRKB3-2重组表达质粒转化子两两组合的4个融合株在QDO/x/A平板上出现蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2。【结论】酵母双杂交系统适用于SCR与SRK蛋白相互作用的研究,初步确定了SCR与eSRK存在相互作用,SRK跨膜域的存在与否对其相互作用的研究没有影响。
- 杨红朱利泉张贺翠杨永军薛丽琰杨昆余浩彭一波罗兵吴志刚黄丹高启国王小佳
- 关键词：结球甘蓝自交不亲和酵母双杂交
- 甘蓝SRK的S域及SCR酵母表达载体的构建及其相互作用区段的研究被引量：1
- 2011年
- 为了深入研究S位点受体激酶（SRK）和S位点富含半胱氨酸蛋白（SCR）甘蓝自交不亲和（self-incompatibility,SI）信号传导的雌雄决定因子的相互作用机制,以自交不亲和性高的结球甘蓝为材料,采用酵母双杂交体系,构建pGADT7-eSRKs和pGBKT7-SCRs重组载体,并分别转化到Y187和Y2HGold酵母中,通过SD/-Ade-His-Trp-Leu平板上菌落的形成,PCR以及x-α-gal显色反应鉴定转化到酵母中的两个重组质粒相互作用。结果表明,SRK S域的SRK1及SRK4分别与SCR2相互作用,且初步显示其相互作用区域为SRK第1个外显子的第16~421bp的片段和SCR第1876~2068bp的片段。这既为SRK-SCR相互作用提供了具体证据,也为甘蓝自交不亲和性分子机理的深入研究提供了新内容。
- 彭一波朱利泉杨红薛丽琰罗兵吴志刚黄丹杨昆高启国李成琼任雪松王小佳
- 关键词：甘蓝SRK酵母双杂交体系
- 甘蓝SCR识别与结合SRK胞外域核心编码区DNA序列的酵母双杂交检测
- 2012年
- SCR是芸薹属自交不亲和性的雄性决定因子。为研究SCR与SRK之间相互作用的核心区段，通过构建结球甘蓝的包含系列不同长度的SCR的cDNA序列的pGBKT7融合载体，利用酵母双杂交系统检测SCR与SRK之间的相互作用。结果显示，构建的载体均未出现自激活现象，所获得SCR全长与其相对应SRK胞外域具有相互作用，且相互作用核心编码区位于SCR编码基因的第97～186bp处。实验结果还显示，此单倍型的SCR信号肽剪切位点及相邻的几个氨基酸残基对相互作用实验结果有干扰作用。以上结论为包括甘蓝在内的芸薹属自交不亲和机制的研究提供了新的实验依据。
- 薛丽琰罗兵朱利泉杨永军张贺翠常登龙陈松彭一波杨红曾静杨昆高启国李成琼任雪松王小佳
- 关键词：甘蓝自交不亲和
- 利用酵母双杂交系统检测SCR蛋白不同区段与SRK蛋白胞外域高变区的相互作用
- <正>为研究在甘蓝自交不亲和作用中甘蓝S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)与其相对应的S点受体激酶(SRK)胞外域高变区可能的相互作用区域,本实验用具有典型自交不亲和性甘蓝D3为材料,利用多种PCR技术获得结球甘蓝SCR基因...
- 薛丽琰罗兵张贺翠杨永军杨红彭一波朱利泉
- 文献传递
- 同源重组快速构建甘蓝SCR酵母双杂交诱饵载体及其自激活作用的检测
- 2012年
- 采用巢式PCR获得甘蓝SCR的成熟肽编码区,利用同源重组技术首次将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pGBKT7-SCR,结果表明:通过巢式PCR获得了正确的甘蓝SCR成熟肽编码区,并成功构建到pGBKT7诱饵载体中,且转化有诱饵载体的Y2HGold在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,而在SD/-His-Trp和SD/-Trp/X-a-Gal/AbA营养缺陷平板上皆不能生长,说明对报告基因无自激活作用;且毒性实验也表明,SCR蛋白对酵母没有毒害作用.
- 罗兵朱利泉薛丽琰张贺翠彭一波杨红杨昆高启国李成琼王小佳
- 关键词：甘蓝同源重组酵母双杂交诱饵载体自激活
- 利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用被引量：6
- 2011年
- 为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象。融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK×pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。结果表明,eSRK与SCR蛋白能够相互结合,为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台。
- 罗兵薛丽琰朱利泉张贺翠彭一波陈松杨红杨昆李成琼王小佳
- 关键词：甘蓝酵母双杂交
- 甘蓝SRK的S域酵母双杂交表达载体的构建及其与SCR作用区段的研究
- 芸薹属植物自交不亲和性受单一位点的复等位基因控制,此位点被命名为S位点。它决定柱头表面花粉识别的专一性。S受体激酶基因/(S-locus receptor kinase, SRK/)和S位点糖蛋白基因/(S-locus ...
- 彭一波
- 关键词：酵母双杂交体系
- 文献传递
