唐建国
- 作品数：35 被引量：134H指数：8
- 供职机构：北京大学医学部基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 中国人肥胖抑素cDNA的克隆和在大肠杆菌中的初步表达被引量：3
- 1998年
- 目的为获得大量人肥胖抑素（ｌｅｐｔｉｎ）以便对其理化特性、生物学功能及其在肥胖发生中的作用进行深入的探讨。方法作者从人脂肪细胞中提取总ＲＮＡ，经逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）获得了人ｌｅｐｔｉｎｃＤＮＡ；通过体外ＤＮＡ重组技术，以ｐＢＶ２２０为表达载体构建重组表达质粒ｐＢＶ２２０－ｌｅｐｔｉｎ，经酶切及序列分析所证实。然后将重组表达质粒转化大肠杆菌ＤＨ５α（Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α）进行表达。结果经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，含有重组表达质粒的菌株表达出了特异性的１６ｋｕ蛋白质，其产量占总菌体蛋白的３１％～４７％，重组蛋白主要以包涵体形式存在。结论人ｌｅｐｔｉｎ重组表达系统的构建是成功的。
- 齐可民丁宗一樊征鸿周红江载芳唐建国
- 关键词：蛋白质类克隆大肠杆菌肥胖抑素
- 重组人类肥胖抑素抗血清的研究被引量：3
- 2001年
- 目的 研究重组人类肥胖抑素抗血清的制备及应用。方法 以高度纯化的体外重组肥胖抑素免疫兔子 ,获得兔抗人类肥胖抑素抗血清 ,应用双向免疫扩散电泳、免疫沉淀法、蛋白质印迹法及放射免疫法鉴定其滴度并研究应用其检测重组肥胖抑素的特异性和灵敏度 ,建立标准曲线并应用免疫沉淀法和蛋白质印迹法进行临床样本的初步检测。结果 双向免疫扩散电泳测定抗血清滴度为1∶16。应用放射免疫法确定抗血清工作稀释度为 1∶2 0 0 0 ,并建立检测范围在 0 78～ 10 0 μg/L的标准曲线。应用免疫沉淀法结合蛋白质印迹法进行检测 ,可见抗血清与重组人类肥胖抑素特异性结合 ,检测灵敏度可达 1μg/L ;抗血清与儿童血浆中肥胖抑素特异性结合 ,吸光度扫描定量为 10 μg/L。同时以具有生物活性的重组人类肥胖抑素作为免疫原所获得的抗体与变性及非变性重组蛋白均可特异性结合。结论 获得特异性兔抗人类肥胖抑素抗血清 ,并可用于临床检测生物样品中的肥胖抑素水平。
- 许婉宁丁宗一唐建国
- 关键词：肥胖症抗体放射免疫测定蛋白质类肥胖抑素
- 重组人类肥胖抑素在大肠杆菌中的大规模纯化被引量：4
- 2000年
- 目的 探讨产率较高 ,高度纯化大肠杆菌表达重组肥胖抑素的方法 ,深入研究肥胖抑素的分子结构 ,生物活性及临床应用 ,对在大肠杆菌中表达的重组人类肥胖抑素进行纯化。方法 温度诱导表达携有人类肥胖基因 (ob)片段的大肠杆菌重组子 ,采用酸沉淀结合凝胶过滤层析的方法从包涵体中纯化目的蛋白。结果 1周内从 3L培养液 (10g)湿菌体中可获得 70mg高度纯化的重组人类肥胖抑素。结论 在短期内成功获得了高产高纯化的重组人类肥胖抑素 ,为肥胖抑素的产业化及临床应用奠定了基础。
- 许婉宁丁宗一杜丽蓉唐建国
- 关键词：重组蛋白质类大肠杆菌肥胖症肥胖抑素
- 人胰岛素突变体的分离纯化及性质研究被引量：1
- 1995年
- 将人胰岛素原突变体（Ａ４Ｇｌｕ→Ｌｅｕ）基因重组到ｐＢＶ２２０表达载体上，在Ｅ．ｃｏｌｉ系统中得到高效表达，表达产物经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ的酶促转化等步骤，可得到纯的人胰岛素突变体（Ａ４Ｇｌｕ→Ｌｅｕ），其氨基酸组成与预期值相符，其受体结合活性及生物活性与标准猪胰岛素的基本相同。
- 陈来同唐建国胡美浩
- 关键词：人胰岛素突变体胰岛素提纯
- RGD多肽(224)对卵巢切除小鼠骨代谢和骨生物力学的影响被引量：1
- 2001年
- 目的 :探讨合成的RGD多肽 (2 2 4)对卵巢切除 (OVX)小鼠骨代谢和骨生物力学的影响 ,并与 17β 雌二醇 (E2 )进行比较。方法 :36只平均体重 35 g的昆明种雌性小鼠均分为 4组 :OVX组 ,假手术组 ,17β E2 (30 μg·kg-1·d-1)治疗组 ,RGD多肽 (6 .2 9mg·kg-1·d-1)治疗组 ,6周治疗后 ,测定各组小鼠的骨密度 (BMD)、骨矿含量(BMC)、骨生物力学、骨形态计量学及生化指标。结果 :RGD多肽 (2 2 4)组和 17β E2 组的股骨BMD分别增加 0 .7%和 5 .9% ,2组的股骨BMC分别增加 4.0 %和 5 .7% ;股骨最大载荷 2组分别增加 12 .9%和 16 % ;血清碱性磷酸酶(AKP)分别减少 33%和 37%。结论 :RGD多肽 (2 2 4)可增加骨矿含量及骨强度 ,降低骨转换。
- 薛延谭辉王芊孙葆明唐建国井健
- 关键词：RGD多肽骨生物力学骨质疏松
- 人胰岛素原类似物（B－Arg－Arg－A）基因的构建和表达被引量：6
- 1995年
- 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法将Ｃ肽为６个氨基酸残基的胰岛素原类似物基因删除突变成Ｃ肽仅为２个精氨酸残基的胰岛素原类似物（ＢＡｒｇ－Ａｒｇ－Ａ）基因，即把ｐＵＣ１８ＢＣ＇Ａ改建为ｐＵＣ１８ＢＲ＿２Ａ。再将ｐＵＣ１８ＢＲ＿２Ａ与ｐＪＧ１０５重组为表达质粒ｐＪＧ１０７，使Ｂ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａ与ｐＪＧ１０５编码的一种多肽构成融合蛋白在大肠杆菌体系中表达。融合蛋白占细菌蛋白总量的５８％。表达产物具有人胰岛素放射免疫活性。
- 李雄彪谢斌陈来同唐建国胡美浩
- 关键词：胰岛素类聚合酶链反应基因表达
- 胰岛素B链N端的修饰及其生物活性变化
- 1994年
- 通过对在大肠杆菌体系中表达及部分加工的粗产物的反相快速蛋白液相色谱的分离，我们得到了Ｌ－Ｍｅｔ^（ＢＯ）－人胰岛素原、Ｌ－Ｍｅｔ^（Ｂ－１）－Ｌ－Ｌｙｓ^（ＢＯ）－人胰岛素原，氨基酸组成分析结果与设想的完全一致。两者的胰岛素受体活性分别为人胰岛素原的６６％及５４％，而胰岛素的放射免疫活性分别降为人胰岛素原的２２％及９％。表明胰岛素Ｂ链的Ｎ端对胰岛囊分子与其受体的结合有一定的重要性，而更重要的是它非常可能参与组成胰岛素分子的抗原决定簇。
- 唐建国张洪涛孙怀宇戴勇胡美浩
- 关键词：胰岛素生物活性
- 6个氨基酸小C肽人胰岛素原类似物基因的构建和表达被引量：3
- 1994年
- 用片段置换法，从在Ｃ肽两端具有酶切位点的双突人胰岛素原基因中，将Ｃ肽基因替换成含Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ６个氨基酸小Ｃ肽基因。将这个小Ｃ肽人胰岛素原类似物基因（ＢＣ＇Ａ）重组到具有Ｔａｃ启动子的质粒中，并与部分牛凝乳酶原基因融合，在Ｅ．ｃｏｌｉ中得到了高效表达。表达的ＢＣ＇Ａ 融合蛋白占菌体总蛋白的１６％。表达产物以包含体形式存在，经ＣＮＢｒ裂解及磺酸化，再经复性后，具有对胰岛素的放射免疫活性。
- 韦革张北林唐建国胡美浩
- 关键词：胰岛素原基因表达氨基酸基因
- Met-Lys-双C肽人胰岛素原基因的构建表达及分离纯化被引量：9
- 1999年
- 应用 Ｐ Ｃ Ｒ 定点突变方法构建编码 Ｍ ｅｔ Ｌｙｓ双 Ｃ 肽人胰岛素原基因，并在大肠杆菌中以包含体方式获得表达 表达产物经还原、重组、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５ 分离纯化，获得 Ｍ ｅｔ Ｌｙｓ双 Ｃ 肽人胰岛素原，经胰蛋白酶与羧肽酶 Ｂ的酶解， Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔ Ｍ Ｑ 阴离子交换柱层析分离制备得人胰岛素，其放免活性、受体结合活性均与猪胰岛素相同
- 陈雅蕙杜雅励唐建国
- 关键词：人胰岛素原纯化
- 从琼脂糖电泳凝胶中回收DNA的一种简便方法被引量：3
- 2000年
- 目的 构建一种简便装置,以高效回收琼脂糖电泳凝胶中的DNA。方法 利用15ml微量离心管、1ml移液枪头、尼龙网膜和透析膜,做成一个巧妙且简单的DNA回收装置。以分子量参照物λDNAEcoRI+Hind为验证样品,对其部分条带进行回收。用凝胶电泳和DNA连接实验鉴定回收产品的质量。结果 在电压降为3Vcm、时间为05h的电洗脱条件下,分子量标记中564bp条带的最终回收率高达80%,21227bp条带的回收率约为30%。DNA回收产品质量优良。结论 从琼脂糖电泳凝胶中回收目的DNA,这是一种简便、快速、高效且廉价的方法。
- 王利民唐建国
- 关键词：琼脂糖凝胶电泳DNA回收
