吴壮 作品数:12 被引量:51 H指数:5 供职机构: 广州医学院第一附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家杰出青年科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
T淋巴细胞共刺激分子在支气管哮喘患者发病中的作用 被引量:1 2004年 吴壮 黄瑾关键词:支气管哮喘 IGE抗体 白细胞介素13 天龙咳喘灵改善慢性哮喘小鼠气道重塑的机制 被引量:7 2011年 目的:探讨中药验方天龙喘咳灵水煎剂干预支气管哮喘气道重塑的可能机制。方法:实验设3组,盐水对照组,哮喘模型组,天龙咳喘灵治疗组。小鼠经常规OVA致敏后连续18天给予1.5%的OVA雾化吸入激发。治疗组小鼠每次激发后给予雾化天龙咳喘灵水煎剂。末次激发后72h,利用气道插管检测各组小鼠气道反应性;肺泡灌洗,观察肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;分离小鼠右肺制备组织切片进行病理分析;分离小鼠左肺提取总蛋白,检测肺部α-SMA表达水平和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activatedprotein,MAPK)信号通路,信号传导及转录活化因子-3(signal transducers and activators of transcription-3,Stat3)的活化情况。结果:与盐水对照组相比,OVA-哮喘组小鼠气道反应性显著升高(P<0.01),相应BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞比例也明显增加(P<0.01);天龙咳喘灵治疗组小鼠气道反应性明显低于哮喘组小鼠(P<0.01),但BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞比例亦较正常对照组增加(P<0.01)。肺组织病理切片显示哮喘组上皮下基底膜层明显增厚,α-SMA表达水平增高,而天龙咳喘灵治疗组气道上皮下未见明显改变,α-SMA表达水平与盐水对照组无显著差别。在哮喘小鼠肺部,MAPKs信号通路当中的胞外信号调节激酶(extracellular signal-reg-ulated kinase,ERK)通路和Stat3通路明显激活,而天龙咳喘灵能有效抑制该信号途径的活化。结论:天龙喘咳灵水煎剂能有效防治慢性哮喘小鼠模型的气道重塑,其机制可能是通过抑制ERKs通路和Stat3通路的活化实现的。 罗永峰 吴壮 徐军关键词:哮喘 气道重塑 气道高反应性 信号通路 慢性尘螨变应原暴露诱导了小鼠气道Th1炎症相关的气道重塑 观察慢性尘螨变应原暴露对小鼠气道重塑的影响,及其与Th1和Th2淋巴细胞亚群相关的气道炎症的相关性,旨在探讨Th1细胞因子在变应性气道炎症诱导的气道结构细胞重塑中的作用和地位。我们运用本实验室建立的一种能够报告平滑肌细胞... 罗永峰 吴壮 徐军文献传递 高迁移率蛋白1在肺纤维化发病中的功能研究 为探讨特发性肺纤维化(IPF)发展过程中最重要的效应细胞肌纤维母细胞的出现和活化机制,通过采纳肌纤维母细胞的标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的启动子为诱饵,应用核酸-蛋白pulldown的方法筛选到高迁移率蛋白家... 吴壮 蔡琳 徐军文献传递 平滑肌细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 被引量:6 2005年 目的:建立平滑肌细胞特异表达Cre重组酶的转基因小鼠。方法:用分子克隆的方法构建含有α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)启动子、Cre重组酶基因和polyA的转基因载体α-SMA-Cre。以显微注射的方法将5.3kb的转基因片段引入小鼠基因组。通过PCR和LacZ染色以检测Cre重组酶在体内介导重组的功能。结果:共注射282枚受精卵,移植至10只假孕母小鼠的输卵管中发育,获得子代小鼠19只,经PCR鉴定有4只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为21%。将该小鼠与基因组上携带LoxP位点的Smad4条件基因打靶小鼠交配,通过PCR在所有含有平滑肌细胞的组织基因组DNA中检测到重组后的234bp特异条带。与“报告”小鼠—ROSA26交配,LacZ染色后小肠壁平滑肌细胞中特异地检测到Cre重组酶活性。结论:成功构建了平滑肌细胞特异表达Cre重组酶的转基因小鼠,该小鼠在平滑肌细胞中特异表达Cre重组酶,并能在体内成功地介导LoxP位点间的重组。 杨蕾蕾 吴壮 程萱 徐军 杨晓关键词:CRE重组酶 Α-平滑肌肌动蛋白 平滑肌细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠Cre重组酶的表达分布 被引量:2 2005年 利用转基因技术构建了平滑肌细胞特异表达Cre重组酶的转基因小鼠(SMA-Cre),将该小鼠与基因组上携带LoxP位点的ROSA26小鼠杂交,通过LacZ染色检测Cre重组酶介导重组的功能以及表达的组织特异性。结果显示,在气管C形软骨连接处平滑肌、细支气管壁平滑肌、食道壁平滑肌、胃壁平滑肌、小肠壁平滑肌、子宫壁平滑肌、膀胱壁平滑肌、血管壁平滑肌、心肌及骨骼肌中检测到Cre重组酶活性。表明SMA-Cre转基因小鼠在所有平滑肌细胞中表达Cre重组酶,并且有很好的组织特异性。 杨蕾蕾 吴壮 程萱 徐军 杨晓关键词:CRE重组酶 平滑肌肌动蛋白 转基因小鼠 博莱霉素诱导α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠肺纤维化上皮细胞-间质转分化的研究 被引量:18 2009年 目的探讨在博莱霉素诱导的肺纤维化中是否发生了上皮细胞-间质转分化(EMT)现象,支气管上皮细胞是否参与了这一过程。方法采用α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠(α-SMA-Cre/R26R双转基因鼠)为实验动物,构建博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型,进行组织X-gal染色和α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测。结果气管内灌注博莱霉素的转基因小鼠支气管上皮下部分X-gal蓝染明显增多,终末小气道周围和肺血管壁蓝染细胞出现或增多,部分地区出现了支气管周围肺泡上皮细胞(ACE)阳性蓝染和浸润。结论在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中可以观察到EMT现象,气道上皮细胞和肺泡上皮细胞能向间充质细胞转化,参与肺纤维化病理过程。 蔡琳 吴壮 徐军关键词:肺纤维化 博莱霉素 CRE重组酶 Α平滑肌肌动蛋白 转基因小鼠 损伤气道上皮组织转化在气道重塑中的作用 被引量:7 2004年 目的 :探讨损伤气道上皮表型向肌纤维母细胞转化的可能性 ,以及转化生长因子 β1(TGF β1)在此过程中的影响。 方法 :用多聚左旋精氨酸 (PLA)反复损伤气道上皮细胞系 16HBE 14o,显微镜下实时观察形态学变化 ,免疫组化方法检测α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达 ;以TGF β1(10 μg/L)刺激转染表达质粒VSMP8[含(α SMA)启动子和氯霉素已酰基转移酶 (CAT)报告基因 ]的 16HBE 14o ,ELISA法测定细胞裂解液中CAT相对活性。 结果 :①在气道上皮细胞系 16HBE 14o反复损伤、修复过程中 ,有部分细胞α SMA表达阳性 ,其中有少数细胞形态呈现长梭形、多角形或星形 ;TGF β1的刺激增加了α SMA阳性细胞数 ,并延缓了损伤后 16HBE 14o的修复。②TGF β1刺激后 2 4hCAT活性显著升高。 结论 :气道上皮细胞反复损伤、修复过程中 ,可能有部分细胞未能正常愈合而出现向肌纤维母细胞转化 ,进而可能参与哮喘气道重塑、气道高反应性的发生发展 ,提示TGF 张敏 吴壮 徐军关键词:气道上皮细胞 肌纤维母细胞 转化生长因子-Β1 哮喘 利用SMA-Cre/R26R转基因报告鼠建立支气管哮喘气道重塑动物模型 支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑动物模型的制作方法尚不成熟,病理观察主要通过Masson三色染色、免疫组化、免疫荧光等方法来显示气道细胞外基质沉积、平滑肌肥大、增生以及基底膜增厚等病理改变,操作繁琐、影响因素多,病理图像效... 吴壮 罗永峰 徐军文献传递 Cre/Loxp位点重组酶系统在疾病动物模型建立中的应用 被引量:6 2004年 Cre/Loxp位点重组酶系统可以迅速、有效的导致时空特异性基因片段剔除 ,从而可以在体研究某一与疾病相关的基因在特定的组织、细胞类型和特定的时间空间表达的活化或抑制的情况。本文就运用Cre/Loxp位点重组酶系统建立疾病动物模型的特点。 吴壮 徐军关键词:动物模型 基因片段 基因克隆