吕海军
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 心肌营养素1分子的克隆及其反转录病毒载体的构建
- 2007年
- 实验于2005-10/2006-06在江苏省干细胞重点实验室进行。体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞2周后,Trizol法抽提细胞总RNA,RT-PCR获得心肌营养素1基因,与克隆载体PMD18-T-Vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经鉴定正确后,PCR扩增心肌营养素1基因,EcoRI和BamHI双酶切,T4DNA连接酶连接,构建pEGZ-CT-1的反转录病毒载体。经PCR及酶切鉴定,测序表明心肌营养素1基因成功插入pEGZ-Term载体。pEGZ-CT-1载体的构建,为转基因细胞的制备和移植治疗心肌梗死奠定了基础。
- 吕海军张学光王如兴陈永井张稷杨丽华李肖蓉
- 关键词：心室肌细胞心肌营养素1反转录病毒
- 心肌营养素-1在心肌梗死中的作用
- 2007年
- 心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)是新发现的为白介素-6家族中的1种细胞因子,有促心肌细胞肥大作用,抑制心肌细胞的凋亡,影响心肌梗死后心室重构的进程,在心肌梗死的病理生理过程中发挥重要的作用。
- 吕海军王如兴李肖蓉张学光
- 关键词：心肌营养素-1心肌梗死心室重构细胞凋亡血流动力学
- 体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的:采用5-氮胞苷(5-aza)诱导骨髓间充质干细胞(M SCs)为心肌样细胞,对比分析诱导细胞与正常心肌细胞表型的差异,从而分析5-aza的诱导效应。方法:分离培养大鼠骨髓M SCs,通过检测不同浓度的5-aza诱导后M SCs表面CD 45、CD 54、CD 90分子的表达并与正常心肌细胞表型进行比较,以观察5-aza对间充质干细胞体外分化诱导的影响和作用。结果:5-氮胞苷能有效地诱导间充质干细胞分化为心肌样细胞,诱导后的细胞表面均表达M H C和desm in分子。浓度为10μm ol/L的5-aza诱导组细胞表型更接近于心肌细胞。结论:M SCs在体外条件下经5-aza诱导可以分化为心肌样细胞,10μm ol/L的诱导浓度为最优浓度。
- 张稷吴家林范志海吕海军李肖蓉张学光
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞分化
- 大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:实验旨在克隆大鼠成纤维细胞生长因子2CDS区基因全长,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建成纤维细胞生长因子2的真核表达载体。方法:实验于2007-03/06在苏州大学生物技术研究所完成。①实验材料:克隆载体PMD18-T-vector(takara);真核表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学第一附属医院消化科叶建新博士惠赠;大肠杆菌TOP10购自英俊公司;清洁级新生一两天SD大鼠2只。②实验过程及评估:体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞。Trizol法抽提心室肌细胞总mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法反转录获得总的cDNA,聚合酶链反应的方法扩增成纤维细胞生长因子2基因的CDS区片断全长。将扩增出来的基因片断和克隆载体PMD18-T-vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经电泳,质粒聚合酶链反应和酶切等鉴定正确后送去测序确认。测序正确后抽重组质粒,bglⅡ和pstⅠ同时双酶切PMD18-T-FGF-2和PIRES2-EGFP,将切下的目的基因片段和线性PIRES2-EGFP空质粒载体在T4DNA连接酶作用下进行连接,构建其真核表达载体。结果:①成功培养出了形态典型的SD大鼠的心室肌细胞。②所获的大鼠成纤维细胞生长因子2DNA序列与GeneBank中收录的大鼠成纤维细胞生长因子2序列完全一致。③PIRES2-EGFP-bFGF真核表达载体的构建测序表明,成纤维生长因子2成功插入真核表达载体PIRES2-EGFP之中。结论:实验成功克隆了大鼠成纤维细胞生长因子2基因全长,并构建了其真核表达载体。为转基因细胞制备和移植治疗心肌梗死奠定基础。
- 杨丽华张学光王如兴陈永井吕海军张燕李肖蓉
- 关键词：成纤维细胞生长因子2
