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刘笋: 作品数：12 被引量：17H指数：2; 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>; 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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肝胰腺细小病毒(HPV)PCR检测及流行情况调查被引量：1: 2014年; 采用水产行业标准《对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第1部分:PCR检测法》(SC/T7203.1-2007)的方法,对2011-2013年期间我国沿海7个省市主要养殖对虾品种不同生长阶段的对虾样品进行该病毒携带情况的筛查。该方法的检测灵敏度为0.07 fg,相当于大约20个病毒拷贝。结果显示,639份样品的HPV阳性检出率为18.47%。其中,在中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)中均有阳性检出,且仔虾、幼虾、成虾各个阶段均可检出HPV,表明HPV已在我国养殖对虾中存在并流行。本研究结果为对虾养殖生产提供了疫病的科学数据,为我国养殖对虾中该病的流行情况提供了参考依据。; 刘天齐杨冰刘笋万晓媛王秀华黄倢; 关键词：对虾 PCR

4种水产动物源细菌主要分泌性蛋白的鉴定及其分泌性序列的分析: 刘笋黄捷王秀华宋晓玲; 关键词：细胞定位

坚强芽胞杆菌主要分泌蛋白的鉴定及其分泌性序列: 2011年; 【目的】坚强芽胞杆菌是一种在自然界普遍存在的益生菌,在对虾养殖中应用较为广泛.为了研究其分泌性蛋白从而为分泌性载体的构建提供理论依据,本文对坚强芽胞杆菌的主要分泌蛋白进行质谱鉴定及分泌性序列的分析。【方法】从本实验室分离保存的1株来自对虾肠道的坚强芽胞杆菌(Bacillus firmus)培养液中获取了分泌性蛋白,进行SDS-PAGE,并对表达量较高的3条蛋白区带进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定及克隆测序,进行生物信息学分析。【结果】鉴定出的蛋白分别是坚强芽胞杆菌几丁质酶(chitinase)、坚强芽胞杆菌肠毒素A(enterotoxin A)和坚强芽胞杆菌BCG9842蛋白(hypothetical protein BCG9842)。经在线软件SignaIP 3.0分析,确定chitinase、enterotoxin和BCG9842均存在不同的分泌性信号肽序列bf-43、bf-37和bf-16,通过在线软件PSORT分析表明,bf-43定位于细胞的外膜上,bf-37和bf-16定位于细胞的胞外。【结论】本研究鉴定出了坚强芽胞杆菌的3个主要分泌性蛋白,分析筛选出了3条分泌性序列,为分泌性载体的构建提供理论依据。; 刘笋宋晓玲黄倢; 关键词：克隆细胞定位

一种提高蛋白表达效率的方法及表达载体: 本发明涉及一种提高蛋白表达效率的表达载体，该表达载体起始密码子ATG后含有一段编码特定氨基酸片段的核苷酸，其特征在于：(a)上述的特定氨基酸为有4个或以上密码子的氨基酸；(b)上述的特定氨基酸片段的氨基酸残基数目不少于3...; 张庆利黄倢刘笋刘庆慧史成银梁艳; 文献传递

3株水产动物病原弧菌主要分泌性蛋白的鉴定及其分泌性序列的分析被引量：1: 2011年; 从3株水产动物病原菌鳗弧菌MN、鳗弧菌3101、费氏弧菌培养液中分别获取了分泌性蛋白,进行SDS-PAGE,对表达量较高的5条蛋白区带进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定表明,它们分别是鳗弧菌MN金属蛋白酶(empA-MN)、鳗弧菌3101金属蛋白酶(empA-3101)、锌金属蛋白酶(zinc empA)、费氏弧菌VFMJ11_1094蛋白(VFMJ11_1094)和费氏弧菌ES114的外膜蛋白(OMP)。根据所鉴定的序列设计引物,分别从鳗弧菌MN、鳗弧菌3101和费氏弧菌中扩增出相应基因,克隆后测定emp-MN、empA-3101、zinc empA、VFMJ11-1094和OMP相应基因的序列,经在线软件SignaIP 3.0分析,确定emp-MN、empA-3101、zincempA、VFMJ11-1094和OMP均存在不同的分泌性信号肽序列angMN-35、ang3101-35、ang3101-25、vf-38和vf-23,通过在线软件PSORT分析表明,所有信号肽均定位在细胞的周质空间或细胞外膜上。; 刘笋王秀华黄倢; 关键词：细胞定位

4种水产动物源细菌主要分泌性蛋白的鉴定及其分泌性序列的分析: 从本实验室分离保存的3种水产动物病原菌鳗弧菌(V.anguillarum)MN、鳗弧菌(V.anguillarum) 3101、费氏弧菌(V.fischeri)及对虾肠道中分离的1种非病原菌坚强芽孢杆菌(Bacillus...; 刘笋黄健王秀华宋晓玲; 关键词：细胞定位

采用OIE标准检测养殖对虾中传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的PCR检出类型被引量：7: 2015年; 利用世界动物卫生组织(OIE)推荐的4对引物(389F/R、392F/R、77012F/77353R和309F/R),通过普通PCR方法,对本实验室2011-2012年采集于国内不同地区的对虾样品进行IHHNV(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus)检测,并对国内存在的IHHNV检出类型进行初步分析。检测结果显示,在凡纳滨对虾、斑节对虾、中国对虾、宽沟对虾中均检测出了IHHNV,而在脊尾白对虾中未检出。其中凡纳滨对虾阳性率最高,中国对虾阳性检测率最低。对虾样品2011年阳性率高于2012年,华东地区高于华北、华南两地。此外,根据4对引物的检测结果,得到国内IHHNV的4种PCR检出类型。; 袁颜颜杨冰万晓媛刘笋刘天齐黄倢; 关键词：PCR 对虾

对虾肝胰腺细小病毒滚环扩增检测方法的建立: 2014年; 根据对虾肝胰腺细小病毒(HPV)保守基因序列,设计特异性的锁式探针及其扩增引物,优化反应条件,建立了肝胰腺细小病毒超分支滚环扩增检测方法。实验中采用一步法连接,探针在Taq DNA连接酶作用下,58℃连接40 min、62℃扩增30 min便可以扩增出明显条带。反应特异性验证实验表明,该体系能够特异性地检测出HPV,而不与供试的其他对虾病原发生交叉反应;灵敏度分析结果显示该方法的检测极限为105 copies/μl,与PCR检测方法相比,一步法连接的滚环扩增的灵敏度低两个数量级。该方法反应过程中温度变化次数少,基本都在等温条件下进行,不需要PCR仪,可发展成为在简便实验条件下使用的简易检测方法。; 王勤涛张庆利杨昊霖刘天齐刘笋杨冰黄倢; 关键词：对虾肝胰腺细小病毒滚环扩增

疑患EMS/AHPNS对虾中检出黄头病毒的一种新株型被引量：8: 2014年; 对2012—2013年从河北、福建和广东3个对虾养殖场采集的12份发生疑似早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死综合征(EMS/AHPNS)的样品,采用组织病理学方法、套式RT-PCR检测方法以及快速灵敏检测试剂盒进行了检测。三地来源的养殖对虾样品症状均表现为肝胰腺颜色变淡,部分出现萎缩,空肠空胃,腹节肌肉略微白浊;组织病理切片结果表明,患病对虾肝胰腺血细胞浸润,肝胰腺盲管上皮细胞脱落,继发性细菌感染,淋巴器官和血淋巴细胞内存在核固缩、破裂和细胞质包涵体。按世界动物卫生组织(OIE)手册的套式RT-PCR方法检测,结果显示,黄头病毒(Yellow head virus,YHV)目的产物的阳性样品检出率为66.7%,该方法对这些样品的灵敏度可能很低。目的产物测序后经NCBI Blast,与已报道的YHV相似性为76.5%—89%;系统发育树显示这3个来源的样品位于同一个分支,与已知的YHV/鳃联病毒(gill-associated virus,GAV)株均不相同,其亲缘关系与YHV较近,而与GAV较远。用新研发的YHV快速高灵敏检测试剂盒检测,结果表明,所有样品均为YHV强阳性。以上表明患AHPNS的养殖对虾中存在一种YHV的新株型的感染,这也是我国首次检测到YHV的感染。; 刘群黄倢杨昊霖杨冰刘笋王海亮王勤涛刘飞张庆利; 关键词：新株型 NESTED-PCR

凡纳滨对虾β-actin基因的克隆与表达: 2010年; 目的:克隆凡纳滨对虾肌动蛋白基因并在原核表达系统中表达。方法:根据GenBank上凡纳滨对虾β-actin基因序列设计引物,采用RT-PCR方法,从凡纳滨对虾肌肉组织中克隆出β-肌动蛋白基因cDNA部分序列,克隆序列连接到pBAD/gⅢA质粒,转化入大肠杆菌TOP10,筛选阳性克隆,进行温度诱导表达重组蛋白。结果:克隆序列长度为1300bp,测序结果与Gene-Bank序列同源性达99.91%;获得重组体诱导表达产物经SDS—PAGE分析,在约48kD处有表达的蛋白带,表达产物经Western Blotting鉴定为阳性。结论:获得β-actin基因在大肠杆菌中稳定表达产物。; 刘笋刘庆慧黄倢; 关键词：凡纳滨对虾 Β-ACTIN 克隆

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