冯宗承
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鼠血管紧张素Ⅱ受体1短发夹环RNA质粒的构建与鉴定
- 2005年
- 目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体 1 (AT1R)的RNAi对血管紧张素II(AngⅡ )功能的影响,我们构建了AT1R短发夹环RNA(shRNA),以期为进行这方面研究提供基础。方法:在GeneBank中查到鼠AT1R的mRNA基因序列并输入到相应设计软件中,以此设计引物序列。经PCR扩增、酶切后,克隆于T载体并行酶切鉴定。结果:构建的鼠AT1RshRNA质粒经测序鉴定验证与预期相符。结论:本研究结果为进一步研究AT1RshRNA质粒的RNAi功能及其对AngⅡ功能影响的研究奠定了基础。
- 孙成林段志泉辛世杰冯宗承张令宇张强
- 关键词：短发夹环RNA
- 血管紧张素Ⅱ1型受体短发夹环RNA抑制其在哺乳动物细胞中的表达被引量：1
- 2004年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的短发夹环RNA质粒(pAT1RshRNA)能否抑制AT1R在哺乳动物细胞中的表达。方法构建质粒并转染入鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中,24h后应用RTPCR及Westernblot检测VSMC的AT1R的mRNA和蛋白表达变化。结果构建的质粒经测序鉴定验证与预期相符,转染细胞后RTPCR吸光度值比值结果两质粒转染组分别为1.371±0.148和1.453±0.123,与对照组2.088±0.258比较差异有非常显著性(P<0.01);Westernblot结果两质粒转染组分别为1.121±0.037和1.202±0.068,与对照组3.168±0.210比较差异有非常显著性(P<0.01)。提示两质粒均能明显降低AT1R的mRNA和蛋白表达。结论构建的pAT1RshRNA具有RNA干扰作用,能在哺乳动物细胞中抑制该特异基因的表达。
- 孙成林段志泉冯宗承辛世杰古峻张京红张强
- 关键词：RNA哺乳动物细胞平滑肌细胞
- 人肝细胞生长因子基因腺病毒重组体的构建及转染血管平滑肌细胞的表达被引量：1
- 2004年
- 为探讨构建能表达肝细胞生长因子基因的腺病毒重组体的方法,以及这种腺病毒重组体能否在血管平滑肌细胞表达。将含有肝细胞生长因子基因片段的质粒用限制内切酶酶切,以琼脂糖凝胶电泳回收得到目的基因片段;将它用DNA连接酶插入至腺病毒穿梭质粒中,并用限制内切酶鉴别插入方向,得到插入方向正确的重组腺病毒穿梭质粒。用限制内切酶酶切重组腺病毒穿梭质粒和表达载体,使它们线性化;以电转化方法使它们共转化至BJ5183细胞中进行同源重组,构成肝细胞生长因子基因腺病毒重组体。以脂质体为转染介质,将肝细胞生长因子基因腺病毒重组体转染到人胚肾细胞中进行包装,使病毒复性具有感染能力。用包装后的肝细胞生长因子基因腺病毒重组体感染体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞;经逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹检测发现肝细胞生长因子呈现过表达。此外,酶切及测序发现重组腺病毒穿梭质粒和肝细胞生长因子基因腺病毒重组体是正确的;绿色荧光蛋白标记对重组体在人胚肾细胞中的包装及包装后感染大鼠主动脉平滑肌细胞进行了荧光示踪。结果提示。肝细胞生长因子基因腺病毒重组体构建成功,为血管疾病转基因治疗奠定了基础,具有一定临床价值。
- 冯宗承胡新华于彭孙达欣辛世杰张强
- 关键词：基因重组肝细胞生长因子腺病毒载体同源重组血管平滑肌细胞绿色荧光蛋白
- 移植血管狭窄、闭塞机制及防治的研究
- 胡新华杨军张强刘程伟王新文于维东李良满张志深张宏伟冯宗承辛世杰段志泉
- 1.通过显微外科吻合技术建立大鼠等动物的自体血管移植模型,应用组织形态学技术、免疫组织化学及现代分子生物学方法研究血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、凋亡及细胞外基质在移植血管狭窄、闭塞过程中的作用。与国际同步,在国内率先采...
- 关键词：
- 关键词：血管移植血管狭窄血管闭塞内膜增生
- 共转染HGF和HO-1基因调节自体移植静脉重塑的实验研究
- 目的
探讨局部共转染肝细胞生长因子/(hepatocyte growth facter，HGF/)基因和血红素加氧酶-1/(heme oxygenase-1，HO-1/)基因对大鼠自体移植静脉...
- 冯宗承
- 关键词：共转染血红素加氧酶-1自体静脉移植
- 文献传递
- 血管紧张素Ⅱ1型受体短发夹环RNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：8
- 2004年
- 目的 :RNA干扰 (RNAi)是一种新的高效特异地阻断基因表达的基因阻断技术。本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)的短发夹环RNA质粒 (pAT1R shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。 方法 :构建pAT1R shRNA质粒 ,并转染入鼠VSMC中 ,应用RT PCR及Westernblot检测血管平滑肌细胞AT1R的mRNA和蛋白表达的变化 ,验证 pAT1R shRNA是否具有RNAi作用 ;应用台盼蓝染色法和MTT法检测VSMC增殖情况。结果 :构建的质粒 pAT1R shRNA经测序鉴定验证与预期相符。转染组AT1R的mRNA和蛋白表达明显减少 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ;转染质粒同时加AngⅡ刺激的VSMC增生明显受到抑制 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :构建的pAT1R shRNA质粒具有RNAi作用 。
- 孙成林段志泉辛世杰冯宗承张京红张令宇张强
- 关键词：RNA干扰短发夹环RNA细胞增殖
- 血管紧张素Ⅱ1型受体的短发夹环RNA抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)的短发夹环RNA(shRNA)质粒 (pAT1R shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞增殖变化的影响并探讨其发生机制。方法 构建pAT1R shRNA质粒转染入鼠血管平滑肌细胞中 ,应用逆转录聚合酶链反应及Westernblot检测血管平滑肌细胞 (VSMC)AT1R的mRNA和蛋白表达的变化 ;倒置相差显微镜观察VSMC形态学的变化 ;锥虫蓝染色法和MTT法检测VSMC增殖的变化等。结果 构建的质粒经测序鉴定验证与预期相符。转染细胞后逆转录聚合酶链反应的吸光度值比值结果pAT1R shRNA1和pAT1R shRNA2 组分别为 1 37± 0 15和 1 4 5± 0 12 ,与对照组 2 0 9± 0 2 6相比差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;Westernblot吸光度值比值结果两质粒转染组分别为 1 12± 0 0 4和 1 2 0± 0 0 7,与对照组 3 17± 0 2 1相比差异有显著性意义 (P <0 0 1) ,提示两质粒均能明显降低AT1R的mRNA和蛋白表达。转染质粒同时加血管紧张素Ⅱ组的细胞计数结果两质粒转染组分别为 5 4 8± 0 4 4和 5 5 5± 0 4 5 ,与对照组 8 13± 0 4 1相比均减少、差异有显著性意义 (P <0 0 1) ,MTT法结果两质粒转染组吸光度值分别为 0 36 5± 0 0 2 4和 0 30 7± 0 0 2 5 ,与对照组 0 4 85±0 0 11相比均降低。
- 孙成林段志泉辛世杰冯宗承张京红古峻张强
- 关键词：VSMC短发夹环RNA转染细胞血管平滑肌细胞增殖锥虫
