Hoechst33342对大鼠骨髓间充质干细胞的标记 被引量:4 2012年 背景:hoechst33342可以用于对骨髓间充质干细胞的标记,但是其标记的最佳浓度的研究目前尚未见报道。目的:观察不同浓度的Hoechst33342对大骨髓间充质干细胞的增殖、标记率的影响,以及其荧光持续时间。方法:贴壁筛选提取大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第3代,流式细胞仪检测其表面抗原,成骨、成脂诱导后染色,用不同浓度Hoechst33342标记大鼠骨髓间充质干细胞后,检测标记后的大鼠骨髓间充质干细胞增殖率、标记率,荧光显微镜下观察其持续时间。结果与结论:①hoechst33342可以用于骨髓间充质干细胞的标记,其最佳标记浓度为5mg/L,标记持续时间较长,30d未见猝灭。②其荧光激发后对细胞有损伤作用,标记浓度超过10mg/L时,可致细胞死亡。③标记浓度在7.5mg/L时,细胞增殖受到抑制;标记浓度在2.5mg/L时,标记时间较短,7d时荧光减弱,14d荧光消失。结果表明,hoechst33342可用于骨髓间充质干细胞的标记,其对骨髓间充质干细胞标记的最佳浓度为5mg/L;细胞表型鉴定CD45阴性,CD44,CD90均呈阳性表达。 谢兴文 侯费祎 李宁 李盛华 宋敏关键词:细胞标记 骨髓间充质干细胞 HOECHST33342 标记率 干细胞 中药杜仲含药血清对成骨细胞增殖、成骨性的影响 被引量:9 2013年 目的:探讨杜仲含药血清对成骨细胞的增殖、成骨分化的影响及其抗氧化性。方法:取乳鼠颅骨,利用二型胶原酶反复消化,离心,提取成骨细胞。利用杜仲含药血清干预,分别测定细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量。结果:细胞增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组(P<0.05)。结论:杜仲含药血清可促进成骨细胞的增殖、成骨分化并增强其抗氧化性。 魏国俊 丁玉芬 侯费祎关键词:成骨细胞 增殖分化 含药血清 不同标记方法对大鼠骨髓间充质干细胞标记的研究 被引量:1 2013年 目的观察Hoechest33342、BrdU、DAPI对大鼠BMSCs标记情况,比较其标记效果的差异性;培养转基因绿色荧光小鼠的BMSCs,观察细胞生长情况和其荧光持续时间,比较其与荧光标记后的干细胞之间的优越性。方法贴壁筛选提取大鼠BMSCs,培养至第三代,流式细胞仪检测其表面抗原,成骨、成脂诱导后染色;Hoechest33342、BrdU、DAPI标记大鼠BMSCs,检测标记后的大鼠BMSCs增殖率,显微镜下观察其荧光持续时间;观察转基因绿色荧光小鼠BMSCs在培养的不同时间段的细胞形态、荧光持续时间以及同上边3种标记方法比较的优缺点。结果 Hoechest33342、BrdU、DAPI可用于对BMSCs的标记;BrdU标记过程较长,在前期不存在荧光猝灭缺点,标记后经过荧光免疫组化处理后可见阳性细胞,Hoechest33342、DAPI标记过程较短,荧光持续时间较长,但此过程中必须避光,对操作带来了一定的困难。3种方法标记后对细胞增殖率无影响;转基因小鼠BMSCs生长较大鼠干细胞生长较慢,其优点是不用标记且荧光持续时间较长,用于细胞追踪研究更为方便可行。结论干细胞有多向分化的潜能,因此有很好的研究价值和应用价值,对干细胞进行标记,为干细胞迁移、归巢机制的研究提供更好的研究平台。 谢兴文 侯费祎 李宁 李盛华 宋敏关键词:绿色荧光 BRDU DAPI 细胞标记 重组人骨形态发生蛋白2诱导骨修复的应用及前景 被引量:6 2013年 背景:重组人骨形态发生蛋白2具备诱导成骨时间更早、成骨量较天然骨形态发生蛋白2多、生物学活性好、生物相容性好、成本低等特点,已成为近年来临床骨科创伤疾病防治研究的热点。目的:总结重组人骨形态发生蛋白2在骨组织工程及骨修复领域应用中的优势、不足及目前国内外的研究进展。方法:经第一作者检索CNKI数据库及SPRINGERLINK数据库2005至2011年与重组人骨形态发生蛋白2在诱导骨再生、骨组织修复有关研究进展方面的文献,英文检索词为"rhBMP-2,bone tissue engineering,bone repair materials",中文检索词为"重组人骨形态发生蛋白2,骨组织工程,骨修复"。共检索出98篇,最终保留30篇进行归纳总结。结果与结论:骨骼内天然骨形态发生蛋白2含量稀少、提取成本高昂,临床应用严重受限。重组人骨形态发生蛋白2有显著的成骨诱导能力,在骨组织工程及骨修复领域展现了巨大的潜在应用价值。体外试验无细胞毒性具有良好的生物相容性可供临床应用,其中重组人骨形态发生蛋白2和重组人骨形态发生蛋白7现已被应用于外科整形手术诱导骨再生,但由于重组人骨形态发生蛋白2是外源性细胞生长因子,临床应用多为超生理剂量,故潜在有软组织水肿,皮肤红疹、局部炎症反应、异位骨化和免疫反应等不良后果的危险,所以重组人骨形态发生蛋白2用于人体后的安全性研究还须长期密切关注。找到理想的载体,有效控制其在体内缓释是重组人骨形态发生蛋白2应用研究的关键问题。 谢兴文 姜徽 李宁 李盛华 宋敏 赵永利 侯费祎 黄晋关键词:重组人骨形态发生蛋白2 骨组织工程 骨修复 细胞生长因子 国家自然科学基金 不同浓度麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在体内迁移的影响 被引量:13 2012年 目的研究不同浓度麝香酮对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone rnarrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)在体内迁移的影响,以期筛选出最佳的治疗剂量。方法 SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,采用牙科钻营造颅骨缺损的大鼠模型;利用贴壁筛选法提取大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代,并加入含有终浓度为10μmol/LBrdU进行标记,待细胞融合至于80%时,利用胰酶消化,配置成细胞密度为1×109cells/L细胞混悬液,然后通过尾静脉注入颅骨缺损的大鼠体内,回植后分别采用高(16.8μL/100g)、中(8.4μL/100g)、低(4.2μL/100g)剂量的麝香酮灌服实验大鼠,空白组以灌服等体积生理盐水作为对照。14d后取出颅骨,固定,脱钙,做免疫组化后,荧光显微镜下,计数BrdU阳性细胞。结果利用免疫组化处理后,进行灰度分析,麝香酮低、中剂量组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.01),麝香酮高剂量组与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论麝香酮具有促进外源性干细胞在体内的迁移作用,以中、低浓度麝香酮效果较好。 谢兴文 侯费祎 李宁 李盛华 宋敏关键词:骨髓间充质干细胞 麝香酮 BRDU 迁移 近五年中西医结合治疗原发性骨质疏松症的临床研究进展 被引量:24 2014年 目的探析近五年来原发性骨质疏松症的中西医结合治疗研究进展。方法通过分析相关文献所采用的治疗方法及特点,对中西医结合治疗原发性骨质疏松症的效果及临床常用的物理疗法所起的特殊疗效进行分类探讨。结果中西医结合治疗原发性骨质疏松症方法众多,但临床缺乏统一的治疗规范。结论中西医结合治疗原发性骨质疏松症疗效显著,可以更好的指导临床。 李鼎鹏 谢兴文 宋敏 侯费祎 赵永利关键词:骨质疏松症 中西医结合 药物治疗 麝香酮含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、分化的影响 被引量:12 2013年 目的研究麝香酮含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖及其向成骨细胞分化的影响,初步了解麝香酮单体对骨髓间充质干细胞的作用机制。方法贴壁筛选法提取大鼠BMSCs,培养至第3代,流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨成脂诱导,鉴定认为培养成功后,利用制备的不同浓度麝香酮含药血清干预。测定细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量等,研究麝香酮含药血清对大鼠干细胞增殖、分化的影响。结果筛选纯化的BMSCs呈均一的成纤维细胞样,贴壁生长,以长梭形为主;表型鉴定:CD45阴性,CD44、CD95均呈阳性表达;用含药血清干预后的增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组。结论麝香酮含药血清可以促进BMSCs的增殖、成骨分化。 侯费祎 谢兴文 席芳琴 徐世红 李盛华 宋敏关键词:骨髓间充质干细胞 增殖 分化 麝香酮 含药血清 麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在颅骨缺损大鼠体内迁移的影响 被引量:6 2017年 背景:骨髓间充质干细胞是多向分化干细胞,在骨折愈合和中有着重要作用。如何促进其在体内迁移,进而促进骨缺损的修复,有着重要研究意义。目的:研究不同浓度麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在体内迁移的影响,探讨其促进骨折愈合的机制及其引经理论初探。方法:建立大鼠颅骨缺损的大鼠模型;贴壁筛选法提取干细胞,取第3代细胞,利用DAPI进行标记,然后尾静脉回植入颅骨缺损的大鼠体内。分别以0,42,84,168μL/kg麝香酮灌胃1次。结果与结论:与高剂量麝香酮组和空白组相比,低、中剂量麝香酮组骨缺损部分的骨髓间充质干细胞数量增加,干细胞因子和Fractalkine的表达水平明显增加。提示中低剂量麝香酮具有促进外源性干细胞在体内的迁移作用。 侯费祎 谢兴文 李慎松 邵宏斌 张莲关键词:干细胞 骨髓间充质干细胞 麝香酮 颅骨缺损 DAPI 干细胞因子 FRACTALKINE 浅谈踝关节三角韧带损伤对其稳定性的影响及治疗进展 2013年 随着人口老龄化及城镇交通的繁杂,踝关节骨折的发生率不断增加,据统计,踝关节骨折的临床发生率约占全身骨折总数的3.92%,居关节骨折的首位。踝关节主要限于前后方向的屈伸运动,稳定性由其骨骼、韧带及有关的肌肉共同维持,结构上的完整是稳定的必要条件。周围韧带的损伤常因踝关节骨折引起,25%的踝关节骨折会导致三角韧带损伤,三角韧带的损伤常被遗留,且常常被认为可以自动修复,而放弃进一步处理,踝关节的稳定性受到影响,往往遗有关节反复扭伤、关节无力、疼痛、肿胀等症状。 黄晋 谢兴文 许伟 胡彬 徐世红 赵永利 侯费祎 姜辉关键词:踝关节 三角韧带 MAPK信号通路在MSCs成骨分化和增殖中作用的研究进展 2012年 丝裂原活化蛋白激酶(M itogen-activated prote in kinase,MAPK)属于丝/苏氨酸蛋白激酶,广泛存在于哺乳动物细胞的胞质中,参与细胞生长、发育、分裂、死亡以及细胞间的功能等一系列生命活动的调节[1]。该信号通路由于其信号传导途径有较清楚的调节方式,在各学科中已逐渐成为研究的热点[2,3]。 谢兴文 侯费祎 李宁 李胜华 宋敏关键词:MAPK 骨髓间充质干细胞 成骨细胞