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高音: 作品数：20 被引量：81H指数：4; 供职机构：首都师范大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划山东省高等学校科技计划项目更多>>; 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>

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原核生物核糖核酸酶HII基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达被引量：1: 2004年; 核糖核酸酶HII (RNaseHII)能有效降解RNA和DNA杂交链中的RNA链。为进一步研究其功能 ,利用大肠杆菌XL1blue为模板 ,相应的寡聚脱氧核苷酸为引物 ,PCR扩增大肠杆菌RNaseHII(rnh 2 )基因 ,并将目的基因连接到克隆载体 pUC18上 ,经测序确认无误 ,分别亚克隆到能够进行IPTG诱导的表达载体pTrcHisC和进行温度诱导的表达载体pBV2 2 0上。重组质粒转化到大肠杆菌DH5α细胞中获得高效表达。在载体pTrcHisC和 pBV2 2 0中目的蛋白RNaseHII的表达量均超过菌体总蛋白的 2 0 % ,且表达产物以稳定的包涵体形式存在。此项工作为以后目的蛋白的纯化提供了有利条件 ,并为研究其结构和功能奠定了基础。; 席慧刘凤华周霞徐燕李永海高音; 关键词：原核生物基因克隆大肠杆菌包涵体

温度、二硫苏糖醇、基因定点突变对溶菌酶和肽基脯氨酰顺反异构酶蛋白交联反应的影响被引量：1: 2015年; 目的研究二硫键对溶菌酶和肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)蛋白交联聚集作用的影响。方法以人总RNA为模板设计引物进行人类PPI基因的克隆,以获取的正常型表达载体为模板,利用PCR定点突变的方法破坏掉PPI基因中形成二硫键的两个半胱氨酸残基(Cys),将其构建到p Trc His C-hpp I原核表达系统,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达获得正常型和突变型PPI蛋白,与溶菌酶在不同温度、还原剂二硫苏糖醇(DTT)存在条件下进行蛋白聚集反应,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹法分析和鉴定交联情况。结果溶菌酶和PPI在临界变性温度时有明显的二聚体和多聚体条带;反应体系中加入DTT后,几乎观察不到交联条带,两者的异源蛋白交联反应出现同样的现象;将突变型PPI置于与正常型PPI完全相同的反应条件下,均没有任何蛋白聚集现象。结论二硫键是蛋白质交联和多聚化发生的前提,破坏二硫键将导致蛋白结构和交联作用的丧失。; 徐燕邵世滨董立闫晓华高音; 关键词：定点突变

人肽基脯氨酰顺反异构酶基因的克隆、表达、纯化及热变性交联被引量：2: 2004年; 蛋白质分子间交联是普遍存在的现象 .然而 ,蛋白质交联的分子机理还不太清楚 .为了进一步探测蛋白质交联的分子机理 ,以及交联能否在异源肽链间发生 ,本实验室克隆了人肽基脯氨酰顺反异构酶 (humanPeptidylproly cis trans isomerase ,hPPI)cyclophilincDNA基因 ,并纯化出了PPI蛋白 .最后 ,将PPI和lysozyme蛋白进行热变性交联实验 ,结果显示在同源和异源肽链间都有二聚体和多聚体形成 .并证实蛋白质交联可经三步完成 :1 )蛋白质构象包括二级结构改变 ;2 )形成分子间二硫键 ;3); 周霞刘凤华席慧万平何宏伟高音; 关键词：克隆基因表达纯化 CYCLOPHILIN

大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基体外分子交联: 2008年; 为证明高音等提出的蛋白质交联三步假说,通过PCR技术扩增大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基(L-tartrate dehydratase beta subunit,TtdB)野生型与Cys/Ser突变型目的基因,构建带6×His标签的诱导型表达载体pTrcHisC-TtdB。重组蛋白以包含体形式存在,应用TALON固定化金属亲和树脂(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)以变性的方法纯化,通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性,复性率可达70%。将复性后的两种蛋白通过热诱导去折叠和氧化重折叠方法进行体外蛋白质分子交联实验。SDS-PAGE分析表明:野生型TtdB在其变性的临界温度反应时,出现交联二聚体和多聚体;在氧化重折叠后SDS-PAGE前加入100mmol/LDTT时,交联强度明显减弱。这种DTT打不开的交联即为异肽键交联;若在其氧化重折叠反应液中加入DTT则没有任何交联。突变型TtdB在与野生型TtdB相同的热诱导去折叠条件下,完全没有二聚体和多聚体的形成。这说明分子间二硫键的形成能促进随后分子间异肽键的形成。; 徐燕高音; 关键词：二硫键

生物化学实验教学的改革与实践被引量：34: 2005年; 通过对生物化学实验课在课程体系、教学内容、教学方法、教学手段和考核方式等方面进行改革,使得生物化学实验课能够充分实现其教学功能,取得较好的教学效果.; 杨志伟刘晓晴徐爱红赵琦陈志玲万平高音; 关键词：生物化学实验教学改革创新教育

突变型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因的合成被引量：3: 2005年; 利用PCR定点突变技术 ,以野生型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因为模板 ,获取 3种突变型 (Cys85Ser,Cys15 1Ser,Cys85 15 1Ser)二氢叶酸还原酶 (DHFR)基因 .用限制性内切酶BamHⅠ与PstⅠ将 3种突变基因片段插入到克隆载体pUC18上 ,进行蓝白筛选 ,将筛选的克隆进行DNA序列测定 .; 刘凤华席慧周霞李永海徐燕高音; 关键词：突变型二氢叶酸还原酶酶基因大肠杆菌 DHFR 定点突变技术

大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化被引量：3: 2005年; 谷氨酸脱氢酶是生物体内最主要的氧化脱氨基酶类 ,为了进一步研究其功能 ,我们以大肠杆菌DH5α菌株基因组DNA为模板和相应的寡聚脱氧核苷酸为引物 ,进行PCR扩增大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶基因 (NADP specificglutamatedehydrogenase ,gdhAgene) ,将所得DNA片断连接到质粒pUC18上 ,转化大肠杆菌DH5α ,进行蓝白筛选和酶切鉴定 ,经测序证明序列正确无误后将gdhA基因连接到表达载体pTrcHisC上 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,经SDS PAGE和双波长扫描分析 ,确定大肠杆菌谷氨酸脱氢酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在 ,未能检测到可溶性蛋白的表达 ,表达量可达菌体总蛋白的 15 %以上 .; 李永海徐燕席慧刘凤华周霞高音; 关键词：谷氨酸脱氢酶大肠杆菌 DH5Α 特异性 DNA片断

蛋白质交联的研究进展被引量：3: 2004年; 蛋白质共价交联不但存在于一些生理过程 ,还与一些神经性疾病的发病机理相关。本文综述国内外 3种观点 ,阐述蛋白质由功能体 /单体转变成交联的二聚体; 刘凤华席慧高音; 关键词：二硫键谷氨酰胺转移酶分子机理

人锰超氧化物歧化酶cDNA基因的克隆: 1999年; 利用人胚胎肝组织提取总ＲＮＡ，从总ＲＮＡ中分离纯化出ｍＲＮＡ，经逆转录得到ｃＤＮＡ第一条链，并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物，进行ＰＣＲ合成人锰超氧化物歧化酶ｃＤＮＡ基因，将所得ｃＤＮＡ克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ上，转化大肠杆菌ＤＨ５α细胞，进行诱导表达筛选，将筛选的克隆进行ｃＤＮＡ; 高音黎红晔华振玲万平杨志伟; 关键词：基因克隆 DNA序列分析

人蛋白质二硫键异构酶cDNA基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：15: 1999年; 从人胚胎肝组织中分离纯化出总ＲＮＡ，在总ＲＮＡ中提取ｍＲＮＡ，经逆转录得到ｃＤＮＡ第一条链，并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物，进行ＰＣＲ合成人蛋白质二硫键异构酶（Ｐｒｏｔｅｉｎｄｉｓｕｌｆｉｄｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ，ＰＤＩ）ｃＤＮＡ基因，将所得ｃＤＮＡ克隆到质粒ｐＵＣ１８上，转化大肠杆菌ＤＨ５α细胞，进行诱导表达筛选和活性筛选。将筛选的基因克隆到载体ｐＢＶ２２０上，在大肠杆菌细胞中表达，产物以溶解形式在胞浆中表达。表达产物经硫酸铵分级沉淀和ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ柱层析分离，产物的纯度与活性分别为９０％、１１００ｕ／ｇ。; 高音杨志伟华振玲高虹万平黎红晔; 关键词：二硫键异构酶基因克隆

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